姜黃素通過AKT/HIF-1α/VEGF信號通路在體外抑制脈絡膜新生血管的機制

陳水齡,亢澤峰,褚文麗,郝雪蓮,陶方方,張明明,李書嬌

0引言

脈絡膜新生血管(choroidal neovascularization，CNV)是年齡相關性黃斑病變(age-related macular degeneration，ARMD)、病理性近視(pathological myopia，PM)及中心性滲出性脈絡膜視網膜病變(central exudative choroidal retinopathy，CEC)等多種眼底疾病的病理表現。CNV的形成是多細胞與多因子共同作用的結果，血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是目前已知促進CNV形成的重要的因子之一。缺氧誘導因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α)相關信號通路是參與調控這些細胞與因子活性的重要信號通路[1]。目前，中藥單體在抗新生血管方面的研究較多，尤其是在抗腫瘤新生血管方面，也為眼科新生血管類疾病的研究提供了思路。姜黃素(Curcumin)是從姜科植物姜黃、郁金、莪術提取的一種多酚類化合物，也是姜黃發揮藥理作用的主要成分，體內外實驗研究證實其藥理作用廣泛[2-3]，主要有抗炎、抗氧化、抗新生血管及抗腫瘤等[4-5]，但在CNV方面的研究較少。本研究探討姜黃素在體外抑制CNV的作用機制，為CNV的治療提供思路。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1細胞來源人視網膜色素上皮(ARPE-19)細胞購自中國典型培養物保藏中心(CCTCC)；人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)購自美國ScienCell公司。

1.1.2主要試劑氯化鈷(CoCl2)和姜黃素(美國Sigma)，DMEM/F12培養液(美國Hyclon)，ECM培養基(美國Cell Signaling Technology)，胎牛血清(美國Gibco)，Matrigel基質膠(美國BD)，CCK-8試劑盒(日本同仁)。RNA試劑盒(北京康為世紀生物科技有限公司)。一抗：anti-AKT和anti-p-AKT(美國CST)，anti-HIF-1α和anti-VEGF-A(美國Abcam)。

1.2方法

1.2.1CCK-8法篩選造模試劑CoCl2和實驗藥物姜黃素及陽性對照藥雷珠單抗的濃度將對數生長期ARPE-19細胞接種于96孔板培養24h；分別加入濃度為0、50、100、200、400及800μmol/L的CoCl2溶液分別培養6、12、24和48h后，每孔加入CCK-8溶液20μL，培養4h后檢測各孔在450nm的吸光度值(OD值)。……