不同農產品中常見喹諾酮殘留量檢測的前處理方法研究

韓晶

摘 要：本研究以雞蛋、雞肉、豬肉及魚肉為試驗材料，對4種喹諾酮藥物殘留測定方法中的提取液濃度、均質時間、氮吹溫度及氮吹剩余量等參數進行優化設計。結果表明，雞蛋、雞肉、豬肉和魚肉的回收率為67.5%～115.0%;目標物濃度為5.0～800.0 μg/L時，與質譜的響應值之間有良好的線性關系，相關系數（R2）≥0.999。在50.0 μg/kg、100.0 μg/kg添加水平下，4種喹諾酮類藥物的相對標準偏差（n=6）為2.2%～4.5%，符合方法規范要求。因此，優化后的前處理方法可分別用于雞蛋、雞肉、豬肉及魚肉中4種喹諾酮殘留量的測定。

關鍵詞：農產品;喹諾酮;前處理;檢測

Study on Pretreatment Methods for the Determination of Common Quinolone Residues in Different Agricultural Products

HAN Jing

（Dalian General Standard Technical Service Co.， Ltd.， Dalian 116039， China）

Abstract：In this study， eggs， chicken， pork and fish were used as experimental materials to optimize the parameters such as extract concentration， homogenization time， nitrogen blowing temperature and nitrogen blowing residue in the determination of four quinolone drug residues. The results showed that the recoveries of eggs， chicken， pork and fish were 67.5%～115.0%; The target concentration is 5.0～800.0 μg/L， there is a good linear relationship with the response value of mass spectrometry， and the correlation coefficient （R2） ≥ 0.999. At the addition level of 50.0 μg/kg、100.0 μg/kg， the relative standard deviation （n=6） of the four quinolones was 2.2%～4.5%， which met the requirements of the method specification. Therefore， the optimized pretreatment methods can be used to determine the residues of four quinolones in eggs， chicken， pork and fish respectively.

Keywords： agricultural products; quinolone; pretreatment; testing

喹諾酮是一種作用于細菌DNA的合成抗菌藥物。本研究以雞蛋、豬肉、雞肉及魚肉為材料，通過設計提取液濃度、均質時間、氮吹溫度及氮吹剩余量優化前處理方法，應用液相色譜-質譜聯用法測定4種氟喹諾酮殘留量，以期為檢測4種氟喹諾酮提供更簡單、便捷的方法，提高禽畜和水產品質量安全監控效果。

1 材料與方法

1.1 材料

雞蛋、雞肉、豬肉及魚肉均來自大連通用標準技術服務有限公司食品實驗室有機液質組。

1.2 試劑

水;乙腈;冰乙酸;甲酸;正己烷;恩諾沙星、環丙沙星、氧氟沙星和培氟沙星標準品。

1.3 儀器與設備

液相色譜-串聯質譜儀;高速組織搗碎機;均質器;旋轉蒸發儀。

1.4 試驗方法

1.4.1 試驗條件設計

《動物源產品中喹諾酮類殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》（GB/T 20366—2006）[1]中的提取液濃度為2%，本研究設置提取液濃度分別為0.4%、0.8%、1.6%和3.2%;國家標準中均質時間為1 min，本研究設置均質時間分別為0 min、1 min、10 min和30 min;國家標準中的氮吹溫度為40 ℃，本研究設置氮吹溫度分別為20 ℃、40 ℃、60 ℃和80 ℃;國家標準中的氮吹剩余量為近干，本研究設置氮吹剩余量分別為0 mL、0.5 mL、1.0 mL和2.0 mL。使用1.4.3制備的加標樣品，按照1.4.2的試驗步驟和1.4.4的色譜和質譜條件及優選的前處理條件，對雞蛋、豬肉、雞肉和魚的陰性樣品中的喹諾酮類殘留量進行檢測，并對每個添加量進行6次平行處理，計算4種喹諾酮類藥物的平均回收率和相對標準偏差，驗證方法是否可行。

1.4.2 樣品前處理

將樣品打碎拌勻，稱取5.0 g置于50 mL PTFE離心管中，加入20 mL 2%的甲酸-乙腈溶液，均質1 min，以4 000 r/min離心5 min，將上清液轉移到另一個50 mL PTFE離心管中，再次用20 mL 2%甲酸-乙腈進行提取，合并上清液。將上清液轉移到125 mL分液漏斗中，加入25 mL乙腈飽和的正己烷，搖動2 min，棄去上層溶液，將下層溶液轉移到100 mL棕色雞心瓶中，40 ℃水浴旋轉并蒸發至近干，氮氣流吹干。精確添加1.0 mL甲酸-乙腈溶液，將殘留物溶解，渦旋混合，用0.22 μm有機濾膜過濾該溶液，置于樣品瓶中，上機測定。

1.4.3 標準液配制

用外標法定量，配制標準溶液。準確稱取適量的4種喹諾酮標準品，用乙腈配制0.1 mg/mL的標準儲備液，再用乙腈配制成10 μg/mL的標準中間液，準確量取適量的喹諾酮標準中間溶液，用2%甲酸-乙腈溶液制備成濃度系列為5.0 ng/mL、20.0 ng/mL、50.0 ng/mL、100.0 ng/mL、200.0 ng/mL、400.0 ng/mL和800.0 ng/mL的喹諾酮混合標準工作溶液。

1.4.4 儀器條件

（1）色譜條件。色譜柱：C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）;流動相：乙腈+2%甲酸乙腈;流速：0.8 mL/min;進樣量：20 μL。

（2）質譜條件。離子源：電噴霧離子源;掃描模式：正離子掃描;監測方式：多反應監測;電噴霧電壓：5 500 V;霧化氣壓力：0.413 MPa;氣簾氣壓力：0.344 MPa。

1.4.5 上機測試

設置質譜條件和色譜條件后，將樣品放入進樣區內，進行檢測。之后用曲線定量，對檢測結果進行分析。

1.4.6 喹諾酮殘留量計算

試樣中喹諾酮殘留量計算公式為：

（1）

式中：X為試樣中被測組分殘留量，μg/kg;

c為從標準工作曲線得到的被測組分溶液濃度，ng/mL;

V為試樣溶液定容體積，mL;m為試樣溶液所代表的質量，g。

2 結果與分析

2.1 前處理選擇

2.1.1 雞蛋的前處理選擇

綜合4種藥物的回收率情況，雞蛋的前處理條件設置為提取液濃度0.8%、均質時間1 min、氮吹溫度40 ℃、氮吹剩余量0.5 mL，4種藥物的回收率情況見表1、表2。

2.1.2 豬肉的前處理選擇

綜合4種藥物的回收率情況，豬肉的前處理條件設置為提取液濃度0.8%、均質時間1 min、氮吹溫度60 ℃、氮吹剩余量1 mL[2]。4種藥物的回收率情況見表3、表4。

2.1.3 雞肉的前處理選擇

綜合4種藥物的回收率情況，雞肉的前處理條件設置為提取液濃度0.4%、均質時間1 min、氮吹溫度60 ℃、氮吹剩余量1 mL，4種藥物的回收率情況見表5、表6[3]。

2.1.4 魚肉的前處理選擇

綜合4種藥物的回收率情況，魚肉的前處理條件設置為提取液濃度0.8%、均質時間1 min、氮吹溫度60 ℃、氮吹剩余量1 mL，4種藥物的回收率情況見表7、表8。

2.2 工作曲線繪制

研究通過外標法定量，在確定的最佳條件下，根據每個分析對象的響應值，將4種喹諾酮類藥物配制成5.0～800.0 μg/L的混合標準工作溶液，并繪制標準工作曲線。由表9可知，該方法分析的每個目標物的濃度與質譜的響應值間具有良好的線性關系，相關系數（R2）均≥0.999。4種喹諾酮色譜圖峰型清晰、良好，此研究得出的數據較準確。

2.3 回收率與精密度試驗

由表10可知，恩諾沙星、環丙沙星、培氟沙星和氧氟沙星在50.0 μg/kg添加水平下的回收率分別為94.3%、94.2%、91.3%和90.5%;相對標準偏差分別為2.3%、3.5%、2.6%和4.5%。恩諾沙星、環丙沙星、培氟沙星和氧氟沙星在100.0 μg/kg添加水平下的回收率分別為92.7%、90.4%、88.5%、87.1%;相對標準偏差分別為3.4%、2.2%、3.2%和4.1%。表明該方法準確度高，重復性好，可滿足動物源產品中4種喹諾酮殘留量的檢測需求。

3 結果與討論

馬春華等[4]用QuEChERS結合高效液相色譜法快速檢測雞肉中的氟喹諾酮殘留，結果顯示，最佳的提取溶液為5%甲酸乙腈，2%甲酸乙腈次之。實驗過程中發現甲酸乙腈溶液濃度越高，樣品越難搖散;甲酸乙腈溶液濃度過低，影響蛋白質沉淀，增加雜質，所以選擇合適的甲酸乙腈溶液濃度不僅使實驗操作更便利，而且節省了資源。本研究中雞蛋、豬肉、魚肉選擇的提取物濃度為0.8%，雞肉的提取物濃度為0.4%。在均質時間的選擇上，4種農產品的最優選擇均為1 min，均質的目的是為了更好地搖散樣品，使提取更充分，但均質時間過長可能會導致沉淀中的雜質重新析出。在氮吹溫度的選擇上，雞蛋的最優氮吹溫度為40 ℃，豬肉、雞肉和魚肉則為60 ℃，氮吹的主要目的是濃縮檢測類藥物，溫度越高，氮吹速度越快，但易產生不確定性雜質以及可能會對喹諾酮類藥物產生破壞。彭文繡[5]在優化液質聯用法對氟喹諾酮類藥物殘留的檢測實驗中，將添加無水硫酸鈉、50 ℃旋蒸作為優化后的旋蒸條件，研究中并未對不同基質的不同情況進行對比，與本研究不同基質區分研究不同，因此數據有差異。雞蛋的最優氮吹溫度為40 ℃，這可能與其脫脂步驟有關，雞蛋樣品較散，脫脂情況比其他3種農產品好，因此氮吹過程中雜質少、氮吹快，而其他3種農產品中雜質相對較多，溫度升高，更易氮吹，加快濃縮時間。在氮吹剩余量的選擇上，雞蛋的最優選擇為0.5 mL，豬肉、雞肉和魚肉為1 mL，都與GB/T 20366—2006不同，吹干會導致喹諾酮類殘留黏在瓶口，如定容溶解殘渣不充分，則會造成提取不充分。雞蛋溶液脫脂干凈，氮吹剩余量為0.5 mL，回收率最好，其余3種農產品中，雜質比雞蛋多，氮吹剩余量選擇1 mL能更好地保留喹諾酮類藥物。本研究中4種喹諾酮含量為5.0～800.0 μg/L，與國家標準中的1.0～50.0 μg/kg相比，檢測的范圍更廣，且線性相關系數都≥0.999，故該方法線性關系良好，檢測結果較準確。

4 結論

綜上所述，雞蛋在提取液濃度0.8%、均質時間1 min、氮吹溫度40 ℃、氮吹剩余量0.5 mL的前處理條件下;豬肉在提取液濃度0.8%、均質時間1 min、氮吹溫度60 ℃、氮吹剩余量1 mL的前處理條件下;雞肉在提取液濃度0.4%、均質時間1 min、氮吹溫度60 ℃、氮吹剩余量1 mL的前處理條件下;魚肉在提取液濃度0.8%、均質時間1 min、氮吹溫度60 ℃、氮吹剩余量1 mL的前處理條件下，樣品使用外標定量法，色譜條件選擇乙腈+2%甲酸溶液洗脫，正離子掃描，其回收率為67.5%～115.0%，4種喹諾酮類藥物在5.0～800.0 μg/L時，線性關系良好（R2≥0.999），在50.0 μg/kg、100.0 μg/kg添加水平下，4種喹諾酮回收率的相對標準偏差（n=6）為2.2%～4.5%，說明這4種方法有較好的回收率和較高的精確度，可分別用于雞蛋、豬肉、雞肉及魚肉4種喹諾酮殘留的檢測。

參考文獻

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[5]彭文繡，李璇，成昕.雞蛋中喹諾酮類獸藥殘留現狀及對策建議[J].中國獸藥雜志，2020，54（10）：76-81.