T細胞亞群、炎癥指標及fetuin-A與慢性丙型肝炎的相關性

周偉，石磊

上海中醫藥大學附屬曙光醫院檢驗科，上海 200120

慢性丙型病毒性肝炎(chronic hepatitis C，CHC)是由丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)病毒感染引起的慢性傳染性疾病[1]，可導致肝臟出現慢性炎癥壞死、肝纖維化，部分患者可發展為肝硬化、肝癌等，對患者的生命安全造成嚴重威脅。CHC的發病機制目前尚未明確，但眾多研究表明，T細胞免疫異常、炎癥反應、血糖代謝異常可能是誘發CHC發生、發展的影響因素[2-3]，參與了CHC引起肝組織損傷、肝纖維化的過程。HCV RNA載量反映了HCV病毒復制的活躍程度和病情變化，是CHC 診斷和抗病毒治療的重要參考指標[4]。本研究對我院近年來收治的CHC 患者HCV-RNA 病毒載量與T 細胞亞群、炎癥指標、fetuin-A 水平的相關性進行分析，旨在為進一步探討CHC的病理機制及臨床診治提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2019 年8 月至2020年10 月上海中醫藥大學附屬曙光醫院收治的140 例CHC 患者的臨床資料，其中男性 61 例，女性 79 例；年齡24～71 歲，平均(48.28±5.11)歲。納入標準：(1)均符合《丙型肝炎防治指南(2019 年版)》[5]的診斷標準；(2)病歷資料完整齊全。排除標準：(1)合并其他病毒性肝炎、酒精性肝病、肝硬化等肝臟疾病；(2)惡性腫瘤、自身免疫系統疾病、代謝性疾病和嚴重基礎疾病；(3)檢查前6個月有抗病毒和免疫調節藥物治療史；(4)病歷資料不全者。所有患者按照HCV RNA載量水平進行分組，其中 31 例 HCV RNA 載量＜1.00×103copies/mL的患者歸為低載量組，67 例HCV RNA 載量在1.00×103～1.00×105copies/mL 的患者歸為中載量組，42 例HCV RNA 載量＞1.00×105copies/mL 的患者為高載量組(42例)。本研究經我院倫理委員會批準。

1.2 檢測方法

1.2.1 HCV RNA 定量檢測 晨起采集所有患者的空腹靜脈血3 mL，以3 000 r/min的速度離心后取血清樣本在-70℃環境下保存待測。采用熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應(PCR)對血清中的HCV RNA 水平進行測定，檢測儀器為美國ABI 公司生產的Prism 7300熒光定量PCR儀，試劑盒購自中山大學達安基因股份有限公司，所有操作均嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.2.2 T細胞亞群檢測 取EDTA 抗凝血100 μL加入流式細胞專用試管底部，加入5 μL四色熒光抗體(購自美國Beckman-Coulter公司)，混合均勻后在室溫避光環境下孵育20 min，加入250 μL 紅細胞溶解液，充分溶血裂解紅細胞20 min 后以1 200 r/min 的速度離心5 min，去除上清液，PBS 緩沖液沖洗2次，最后采用500 μL PBS 緩沖液懸浮細胞，采用流式細胞儀FC500 檢測患者外周血的 CD3+、CD4+、CD8+水平，計算CD4+/CD8+值。

1.2.3 炎癥指標及fetuin-A水平檢測 采用酶聯免疫吸附(ELISA)法檢測白細胞介素-2 (IL-2)、白細胞介素-6 (IL-6)、白細胞介素-10 (IL-10)、白細胞介素-32(IL-32)等炎癥指標和人胎球蛋白A(fetuin-A)水平，炎癥指標試劑盒均購自美國Genzyme公司，fetuin-A試劑盒購自上海西唐生物公司，檢測儀器采用日立7600全自動生化分析儀，所有檢測操作均嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3 統計學方法 應用SPSS20統計軟件進行數據統計分析。計量資料均符合正態分布，以均數±標準差()表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩間比較采用t 檢驗，采用Pearson 相關性分析法分析HCV-RNA病毒載量與T細胞亞群、炎癥指標、fetuin-A水平的相關性。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同HCV-RNA 病毒載量CHC 患者的T 細胞亞群水平比較 不同HCV-RNA 病毒載量CHC 患者的CD3+水平比較差異無統計學意義(P＞0.05)；隨著HCV-RNA 病毒載量的不斷增大，CHC 患者的 CD4+、CD4+/CD8+水平明顯降低，CD8+水平明顯升高，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 不同HCV-RNA病毒CHC患者的T細胞亞群水平比較()

表1 不同HCV-RNA病毒CHC患者的T細胞亞群水平比較()

注：與低載量組比較，aP＜0.05；與中載量組比較，bP＜0.05。

組別CD4+/CD8+例數CD3+(%)CD4+(%)CD8+(%)低載量組中載量組高載量組F值P值1.58±0.21 1.27±0.17a 1.06±0.11ab 88.73 0.000 1 31 67 42 77.23±9.04 76.18±8.71a 75.02±8.36ab 0.59 0.556 1 47.38±5.31 42.12±4.27a 38.33±3.84ab 37.71 0.000 1 30.23±4.42 33.71±4.82a 36.26±5.46ab 13.29 0.000 1

2.2 不同HCV-RNA 病毒載量CHC 患者的炎癥指標和fetuin-A 水平比較 隨著HCV-RNA 病毒載量的不斷增大，CHC 患者的IL-2 水平明顯降低，IL-6、IL-10、IL32 及fetuin-A 水平明顯升高，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表2。

表2 不同HCV-RNA病毒載量CHC患者的炎癥指標和fetuin-A水平比較()

表2 不同HCV-RNA病毒載量CHC患者的炎癥指標和fetuin-A水平比較()

注：與低載量組比較，aP＜0.05；與中載量組比較，bP＜0.05。

組別低載量組中載量組高載量組F值P值IL-32(ng/L)145.74±42.15 237.49±61.17a 414.42±78.09ab 177.45 0.000 1例數31 67 42 IL-2(ng/L)55.38±9.31 48.82±7.12a 37.15±5.38ab 62.10 0.000 1 IL-6(ng/L)18.32±3.32 27.13±5.81a 47.91±9.28ab 202.19 0.000 1 IL-10(ng/L)156.24±31.29 223.49±45.27a 716.24±103.16ab 896.37 0.000 1 fetuin-A(g/L)5.43±1.26 7.58±1.41a 8.19±1.63ab 34.97 0.000 1

2.3 HCV-RNA 載量與T 細胞亞群、炎癥指標及fetuin-A 的相關性 經Pearson 相關性分析結果顯示，HCV-RNA 載量與T 細胞亞群明顯相關，其中HCV-RNA 載量與 CD8+水平呈正相關(r=0.472，P=0.027)，與 CD4+、CD4+/CD8+水平均呈負相關(r 值分別為-0.505、-0.529，P 值分別為0.019、0.017)；HCV-RNA載量與炎癥指標、fetuin-A 水平明顯相關，其中HCV-RNA 與 IL-6、IL-10、IL-32 以及 fetuin-A 水平均呈正相關(r 值分別為 0.518、0.627、0.553，P 值分別為0.018、0.009、0.011)，與 IL-2 水平呈負相關(r=-0.509，P=0.021)。

3 討論

CHC 具有隱匿性、慢性化和高漏診率等特點[6-7]，患者在臨床上并無明顯特異性癥狀，處于急性發作期的患者也僅表現為全身乏力，多數CHC患者在確診時已延誤最佳治療時機。因此、早期診斷和治療有助于及早控制病情進展，對于減少肝硬化、肝細胞癌的發生具有重要意義[8]。

CHC 除了與HCV 病毒復制、變異等因素有關以外，機體免疫反應機制在其病情進展中也發揮重要作用[9]。機體免疫反應機制的核心是細胞免疫功能，T淋巴細胞具有識別抗原、激活并產生調節因子和趨化因子的功能[10]，其數量和各亞群比例能夠反映機體細胞免疫水平，對病情發展和轉歸具有重要意義。本研究結果顯示，隨著HCV-RNA病毒載量的不斷增大，CHC患者的CD4+、CD4+/CD8+水平顯著降低，CD8+水平顯著升高，HCV-RNA 載量與CD8+水平呈正相關，與CD4+、CD4+/CD8+水平均呈負相關。CHC 患者 CD4+水平的降低使相關免疫細胞增殖分化能力明顯下降[11]，CD8+水平升高代表機體免疫攻擊能力增強，CD4+/CD8+比值發生明顯變化，機體免疫平衡被打破，機體清除病毒能力明顯下降[12]。

另外，HCV病毒還能夠對機體固有的免疫應答造成破壞，進而刺激單核巨噬細胞分泌IL-6、IL-10、IL-32等一系列炎癥因子[13]，此類炎性因子可激活機體免疫細胞，引發細胞免疫和體液免疫，導致溶酶體、白介素等更多炎癥因子大量釋放，進而損傷肝細胞。機體肝臟的持續性損傷導致清除炎癥因子的能力下降，持續存在的炎癥因子損害肝臟，引發肝纖維化、肝硬化及肝癌的發生[14]。本研究結果顯示，隨著HCV-RNA病毒載量的不斷增大，CHC 患者的IL-2 水平明顯降低，IL-6、IL-10、IL-32 水平明顯升高。HCV-RNA 載量與IL-6、IL-10、IL-32水平均呈正相關，與IL-2水平呈負相關。說明IL-2、IL-6、IL-10、IL-32 等炎癥指標與CHC病情程度密切相關。

肝臟在機體血糖代謝中發揮重要作用，CHC的發生可影響機體胰島素的分泌，產生胰島素抵抗，進而引發肝源性糖尿病的發生[15]。fetuin-A 是胰島素受體的天然抑制因子，能夠與胰島素受體的亞基結合，結合后可抑制胰島素受體的自身磷酸化，使胰島素信號通路中多種因子的表達受到抑制，進而使機體胰島素抵抗得到顯著增強，實現對機體糖脂代謝的調控[16]。本研究結果顯示，隨著HCV-RNA 病毒載量的不斷增大，CHC 患者的 fetuin-A 水平明顯升高，HCV-RNA 載量與fetuin-A 水平均呈正相關。上述結果提示，CHC患者的血糖代謝存在異常，胰島素抵抗明顯，其嚴重程度與CHC患者的病情程度密切相關。檢測fetuin-A水平對于臨床評價CHC患者病情、預測胰島素抵抗發生都具有重要意義。

綜上所述，HCV感染后，CHC患者的T細胞亞群、炎癥指標和fetuin-A 水平均出現異常變化，其變化與CHC患者的病情程度密切相關，檢測上述指標有助于了解CHC 的發病機制和慢性化過程，對于其臨床診治、療效評價和預后轉歸都具有重要意義。