缺氧缺血性腦病新生兒血清sLOX-1、VILIP-1的變化及臨床意義

陳曉玲，陳曉君，楊麗霞，邢舒旺，邱成英

新生兒缺氧缺血性腦病（hypoxie ischemic encephalopathy，HIE）是因窒息引起的新生兒腦組織缺氧缺血導致的腦部病變［1］。目前，臨床主要根據圍產期的缺氧病史、患兒的臨床表現、影像學檢查等來診斷HIE，但部分患兒的臨床表現不明顯或缺乏特異性，而影像學檢查存在一定的滯后性，有漏診的可能，導致部分患兒錯過最佳治療時間窗，進而影響患兒預后［2］。近年研究顯示，鈣結合蛋白B 等血清生物標志物可提示早期HIE 疾病，且其與腦損傷的發生、發展有關［3］。可溶性凝集素樣氧化型低密度脂蛋白受體1（soluble lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1，sLOX-1）可在一定程度上反映機體的血管內皮損傷和炎癥反應狀態，是急性冠狀動脈綜合征［4］、急性腦梗死［5］等多種缺血性心腦血管疾病的生物標志物，但其與同樣由缺氧缺血引起的HIE 的關系尚不清楚。視椎蛋白樣蛋白（visininlike protein，VILIP）-1 是一種在神經系統中高度表達的鈣離子結合蛋白，是新興的腦損傷生物標志物，其表達水平與腦損傷程度關系密切［6］。目前，鮮有sLOX-1、VILIP-1 與HIE 關系的報道。本研究分析了HIE 患兒血清sLOX-1、VILIP-1 的變化及其對HIE 的診斷價值，以期為HIE 的臨床診斷提供新的思路。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2018 年1 月—2021 年3 月于四川大學華西三亞醫院住院治療的HIE患兒（HIE組）146例，男76例，女70例，平均胎齡（38.95±1.02）周，平均出生體質量（3.04±0.51）kg；診斷標準參照文獻［7］：（1）胎兒宮內窘迫，或者在分娩時有明顯窒息史。（2）出生時有重度窒息。（3）新生兒出生后出現神經系統癥狀，且持續時間超過24 h。（4）排除電解質紊亂等原因引起的抽搐以及宮內感染等原因引起的腦損傷。排除標準：先天發育畸形、先天性心肺疾病患兒；先天性病毒或細菌感染者；染色體異常患兒；胎齡小于36周；自發性顱內出血患兒；有遺傳代謝性疾病。將146例患兒分為輕度組（58例）、中度組（52例）和重度組（36例）。另外以同期在我院出生的正常新生兒50例作為對照組，男24例，女26例，平均胎齡（39.23±0.98）周，平均出生體質量（3.11±0.65）kg。2組性別（χ2=0.245）、胎齡（t=1.692）及體質量（t=0.779）比較差異無統計學意義（均P＞0.05）。本研究經本院倫理委員會批準，新生兒家屬均簽署知情同意書。

1.2 觀察指標 收集所有新生兒的性別、胎齡、出生體質量、5 min Apgar評分，并于出生后24 h進行新生兒行為神經測定（neonatal behavioral neurological assessment，NBNA）［8］，該評分量表共包括行為能力、主動肌張力、被動肌張力、原始反射、一般反應5個方面，滿分為40分，＜35分為異常。HIE組分別于出生后24 h（T1）、出生后48 h（T2）、出生后72 h（T3）抽取靜脈血3 mL，3 000 r∕min 離心10 min，提取上清液，采用酶聯免疫吸附試驗檢測血清sLOX-1、VILIP-1 的水平，試劑盒購自上海信裕生物科技有限公司。對照組于出生后24 h（T1）抽取靜脈血3 mL，由于對照組新生兒不宜反復采血，因此以T1時間點的數據代替48 h（T2）和72 h（T3）數據。

1.3 聯合診斷方法 取2 個指標各自的診斷閾值，2 個指標同為陽性則為陽性，同為陰性則為陰性，出現一陰一陽則進行復測。若復測結果不變，則結合專業實踐及醫師觀點進行診斷并側重考慮：陽性診斷參考敏感度較高指標，陰性診斷參考特異度較高指標。

1.4 統計學方法 采用SPSS 22.0軟件進行數據分析。符合正態分布的計量資料以±s表示，2 組間比較采用獨立樣本t檢驗，多時點觀測資料行重復測量方差分析；計數資料以例或例（%）表示，組間比較用χ2檢驗。相關性分析采用Pearson相關系數。采用受試者工作特征（ROC）曲線分析T1時間點血清sLOX-1、VILIP-1 對HIE 的診斷價值。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2組5 min Apgar 評分、NBNA 評分比較 與對照組比較，HIE 組5 min Apgar 評分、NBNA 評分均降低（P＜0.01），見表1。

Tab.1 Comparison of 5 min Apgar score and NBNA score between the two groups表1 HIE組和對照組5 min Apgar評分和NBNA評分比較（分，±s）

Tab.1 Comparison of 5 min Apgar score and NBNA score between the two groups表1 HIE組和對照組5 min Apgar評分和NBNA評分比較（分，±s）

＊＊P＜0.01。

組別對照組HIE組t n 50 146 5 min Apgar評分8.79±1.02 3.83±1.56 20.980＊＊NBNA評分37.61±1.24 32.15±2.48 14.924＊＊

2.2 HIE 組和對照組血清sLOX-1、VILIP-1 水平比較 隨時間延續，HIE組血清sLOX-1、VILIP-1水平均降低（P＜0.05）；與對照組比較，HIE 組各時點VILIP-1水平及T1、T2時間點的血清sLOX-1均增高（P＜0.01），見表2。

2.3 不同疾病嚴重程度的HIE 患兒血清sLOX-1、VILIP-1 水平比較 不同疾病嚴重程度的HIE 與時間效應對血清sLOX-1 存在交互作用（P＜0.05），對血清VILIP-1 水平無交互作用影響。隨時間延續，各組血清sLOX-1、VILIP-1 水平均降低，各時點輕、中及重度組血清sLOX-1、VILIP-1 水平依次升高，見表3。

2.4 HIE 患兒T1 時間點血清sLOX-1、VILIP-1 與5 min Apgar評分、NBNA評分的相關性分析 Pearson分析顯示，HIE 患兒血清sLOX-1 與5 min Apgar 評分、NBNA評分均呈負相關（r分別為-0.308、-0.412，P＜0.05），VILIP-1 與5 min Apgar 評分、NBNA 評分均呈負相關（r分別為-0.352、-0.424，P＜0.05）。

2.5 血清sLOX-1、VILIP-1（T1時間）對HIE的診斷價值分析 血清sLOX-1、VILIP-1 對HIE 均有較高的診斷價值，兩者聯合應用對HIE的診斷效能較優，見表4、圖1。

3 討論

研究顯示，亞低溫治療可較好地改善HIE 患兒的預后，但治療時間窗較短，最適宜在生后6 h 內進行，且越早越好［9-10］。重度HIE在早期就有明顯的癥狀，易于診斷，但輕、中度HIE的早期癥狀不明顯，影像學檢查一般在72 h后才能發現腦水腫等顱腦病理改變，存在一定的滯后性［11］。HIE 患兒受損的腦組織可在短時間內分泌特定的生物標志物進入腦脊液或血液，這些標志物通常可在一定程度上反映腦損傷程度，并對疾病的診斷、治療及預后的評估有一定輔助作用［12］。

凝集素樣氧化型低密度脂蛋白受體1（lectinlike oxidized low density lipoprotein receptor-1，LOX-1）是氧化型低密度脂蛋白的特異性受體，兩者結合可引起血管內皮功能障礙，促進動脈粥樣硬化的形成［13］。LOX-1 位于胞外近膜區的結構域可以被切割水解成sLOX-1 并釋放入血，血中的sLOX-1 水平可反映LOX-1 的表達情況［14］。VILIP-1 在小腦、前腦、尾狀核、海馬體等腦組織中廣泛表達，并參與調控神經細胞的凋亡及修復等［15］。本研究結果顯示，與對照組比較，T1、T2時間點的血清sLOX-1以及各時點的VILIP-1在HIE 中表達升高，提示sLOX-1和VILIP-1可能參與了疾病的發生、發展。另一方面，各時點輕、中及重度組血清sLOX-1、VILIP-1水平依次升高，提示sLOX-1和VILIP-1可能與病情嚴重程度有關，兩者有潛力成為HIE 的新型生物標志物。HIE會導致氧自由基增多、氧化應激反應增強，引起體內脂質過氧化水平升高，進而使得氧化型低密度脂蛋白大量產生［16］。Yao 等［17］研究顯示，氧化型低密度脂蛋白可促進胞外信號調節激酶磷酸化，上調LOX-1的表達，此外，脂質過氧化水平升高可促進白細胞介素6等炎癥因子水平上升，而白細胞介素6濃度依賴性地使LOX-1 的表達上調，這可能是血清sLOX-1在HIE中表達升高的原因。VILIP-1在大腦組織中高度表達，當腦部組織受到缺血缺氧性損傷時，表達VILIP-1 的細胞會因受損而釋放大量的VILIP-1到細胞外，進而導致血中的VILIP-1水平上升［18］。相關研究也證實，VILIP-1 在HIE 大鼠模型中呈高表達［19］。本研究還顯示，隨時間延續，HIE組血清sLOX-1、VILIP-1水平呈降低趨勢，提示通過臨床干預使得腦組織的缺血、缺氧性損傷得到控制、改善，降低了血清sLOX-1、VILIP-1 水平，尤其是HIE組T3時間點的sLOX-1水平與對照組比較差異無統計學意義，可見隨著臨床治療sLOX-1水平的下降速度較快。Apgar評分是反映新生兒窒息情況的評分，而NBNA評分則可反映新生兒行為神經功能。本研究通過相關性分析發現，HIE 患兒血清sLOX-1、VILIP-1 與5 min Apgar 評分、NBNA 評分均呈負相關，這也從側面證實sLOX-1、VILIP-1的表達與新生兒窒息嚴重程度和神經功能受損情況有關。

Tab.2 Comparison of serum levels of sLOX-1 and VILIP-1 between the two groups表2 2組血清sLOX-1、VILIP-1比較 （±s）

Tab.2 Comparison of serum levels of sLOX-1 and VILIP-1 between the two groups表2 2組血清sLOX-1、VILIP-1比較 （±s）

＊＊P＜0.01；A與T1比較，B與T2比較，P＜0.05。

組別對照組HIE組t n 50 146 sLOX-1（ng∕L）T1 398.38±106.82 846.51±252.85 12.150＊＊T2 398.38±106.82 484.56±148.22A 3.786＊＊T3 398.38±106.82 373.59±98.66AB 1.501 F-279.441＊＊VILIP-1（μg∕L）T1 0.36±0.12 0.88±0.19 18.136＊＊T2 0.36±0.12 0.74±0.15A 16.215＊＊T3 0.36±0.12 0.54±0.14AB 8.123＊＊F-166.951＊＊

Tab.3 Comparison of serum levels of sLOX-1 and VILIP-1 between the three groups of HIE children表3 按臨床分度的3組HIE患兒血清sLOX-1、VILIP-1比較 （±s）

Tab.3 Comparison of serum levels of sLOX-1 and VILIP-1 between the three groups of HIE children表3 按臨床分度的3組HIE患兒血清sLOX-1、VILIP-1比較 （±s）

＊＊P＜0.01；a與輕度組比較，b與中度組比較，A與T1比較，B與T2比較，P＜0.05。

組別輕度組中度組重度組F交互∕F組間∕F時間n 58 52 36 T1 465.74±136.53 912.08±353.60a 1 371.12±588.52ab 25.637＊＊∕135.434＊＊∕25.637＊＊sLOX-1（ng∕L）T2 355.32±98.24A 524.79±157.26aA 644.25±190.76abA T3 269.39±65.73AB 394.59±85.91aAB 510.77±91.10abAB T1 0.74±0.14 0.87±0.17a 1.12±0.24ab 1.629∕156.809＊＊∕173.922＊＊VILIP-1（μg∕L）T2 0.62±0.12A 0.71±0.13aA 0.97±0.20abA T3 0.44±0.11AB 0.52±0.14aAB 0.71±0.18abAB

Tab.4 ROC analysis of serum sLOX-1 and VILIP-1 in the diagnosis of HIE表4 血清sLOX-1、VILIP-1診斷HIE的ROC分析

Fig.1 ROC curves of serum sLOX-1 and VILIP-1 in the diagnosis of HIE圖1 血清sLOX-1、VILIP-1診斷HIE的ROC曲線

臨床上，新生兒出生24 h（T1）時是最重要的常規觀測時點，且HIE 患兒和正常新生兒血清sLOX-1、VILIP-1 兩個指標數據差別明顯，故本研究采用T1 時點的sLOX-1、VILIP-1 資料。經ROC 分析發現，血清sLOX-1、VILIP-1對HIE均有較高的診斷價值，均AUC＞0.75，兩者聯合診斷時敏感度和約登指數均有明顯提升，診斷價值有進一步的提高。

綜上所述，HIE患者血清sLOX-1、VILIP-1表達水平升高，且其表達水平與病情嚴重程度和神經功能受損情況有關，兩者聯合對HIE 有較高的診斷價值。監測血清sLOX-1、VILIP-1 水平對HIE 的早期診斷、病情評估具有重要意義。