傣醫(yī)常用解藥抗炎作用篩選研究

梁志慶 倪凱 何鵬飛 王胤驍 趙應紅

摘要：目的 研究傣醫(yī)常用的5種解藥對小鼠巨噬細胞焦亡和活力的影響，初步篩選評價其抗炎活性。方法 采用Celigo Cytomter全視野細胞掃描分析儀，對健康生長條件下空白組及藥物干預的小鼠巨噬細胞進行分析，通過對細胞增值數(shù)的觀察分析，篩選出可抑制小鼠巨噬細胞增值的藥材。結果 與空白組比較，給藥組的小鼠巨噬細胞數(shù)減少（P<0.05）。結論 傣族常用解藥對小鼠巨噬細胞有一定的抑制作用。

關鍵詞：傣醫(yī);解藥;巨噬細胞;抗炎;篩選

中圖分類號：R285.5?? 文獻標志碼：A?? 文章編號：1007-2349（2022）03-0078-03

炎癥反應存在與機體的諸多生理病理過程中，是最基礎的保護性反應之一。體內(nèi)多種細胞參與其中，巨噬細胞在調控人體炎癥反應變化的過程中扮演著不可替代角色。人體內(nèi)的巨噬細胞處于應答狀態(tài)，當其受到微觀世界中各種效應子的激活信號，諸如外界的病原體、突發(fā)損傷刺激干擾或者免疫適應，都會引起巨噬細胞的分化，從而開啟不同的遺傳程序，誘導其成為極化狀態(tài)[1]。當這種穩(wěn)態(tài)的平衡被打破，就會造成巨噬細胞極化失調。從而可能導致多種慢性炎癥相關性疾病的發(fā)生發(fā)展，例如膿毒癥、動脈粥狀硬化、哮喘及炎癥性腸病等[2]。因此，調控巨噬細胞的穩(wěn)態(tài)，糾正其極化失調表達，可能會延緩這些相關疾病的炎癥進程，這也使得對巨噬細胞極化的調控有望成為控制和治療這些炎癥性疾病新的靶點。傣族醫(yī)藥歷史悠久，據(jù)《貝葉經(jīng)》記載，早在2500多年前，傣族就有了自己的醫(yī)藥，是傣族人民長期與自然和疾病斗爭中總結、積累出來的，并受到中醫(yī)學、印度傳統(tǒng)醫(yī)學的影響，且傣醫(yī)理論“四塔”（風、火、水、土）和“五蘊（色、識、受、想、行）與中醫(yī)陰陽五行學說有相似之處，具有鮮明的民族特色，是祖國醫(yī)學的重要組成部分。傣醫(yī)藥學具有獨到的防病治病的特征。傣醫(yī)傳統(tǒng)理論認為，凡功能以解毒為主，針對各種食物、藥物、動物叮咬及各種原因過敏等所導致的體內(nèi)殘留毒素而設，具有解除毒素、調補四塔功能的藥物稱為雅解（解藥），而其使用方法則稱為“解法”[3]。在前期調研過程中，搜集到了數(shù)十種傣族解藥，其中嘿宋些、文尚海、牙給哈蒿、呀楠嫩、芽哈擺、埋答巴等十余種為當?shù)亓曈贸Ｓ玫慕馑帯?/p>

傣醫(yī)臨床常用的解法，其解除毒素、調補四塔功效，可能與調控巨噬細胞穩(wěn)態(tài)、糾正其極化失調以致延緩炎癥有關，選擇了5種常用傣醫(yī)解藥進行細胞實驗，觀察其對巨噬細胞生長的影響，初步評價其抗炎活性。

1 材料與方法

1.1 實驗細胞 RAW264.7小鼠單核巨噬細胞，編號：KCB200603YJ，來源于中國科學院昆明細胞庫（中科院動物所）。

1.2 實驗藥物與試劑 5種傣藥（編號：1、2、3、4、5），批號：20211230，均購自西雙版納州州民族醫(yī)藥研究所。中美特級胎牛血清（04-001-1ACS，BI）、DMEM/高糖培養(yǎng)液（06-1055-57-1ACS，BI）、青霉素-鏈霉素溶液（03-031-1B，BI）、胰蛋白酶溶液（03-050-1A，BI）上述試劑均從云南澤浩商貿(mào)有限公司采購。

1.3 實驗儀器 DLAB多速度離心機，型號：DM0412，大興龍創(chuàng)實驗儀器（廣州）有限公司;CO2細胞培養(yǎng)箱，德國WIGGENS;BIO成像系統(tǒng)，65666，BIO;全視野細胞掃描分析儀（Celigo Cytomter），美國Nexcelom，耐細隆生物儀器（上海）有限公司;超純水系統(tǒng)，英國ELGA Classic UF;-80℃超低溫冰箱，Ermo Fisher;顯微鏡 BX600，奧林巴斯（上海）銷售服務有限公司;電轉儀（半程），314456，北京生物;真空操作臺，AIRTECH，0135。

1.4 藥材受試液制備 每種傣藥均取100 g，加8倍量純水煎煮3次，每次25 min，濾過，合并濾液濃縮至100mg生藥/ml，2500 rpm離心15 min，取上清液高壓滅菌后凍存（-15℃）備用。凍存原液稀釋為3個濃度（200、400、800μg/mL）供實驗用。

1.6 實驗環(huán)境 細胞培養(yǎng)箱環(huán)境（37℃、5%CO2），完全培養(yǎng)基稀釋，持續(xù)抽風狀態(tài)生物安全柜等，遵循無菌操作。

1.7 受試藥材對RAW264.7細胞計數(shù)的影響 通過觀察其對于細胞技術的影響，從而分析受試藥材對巨噬細胞的增殖以及活力情況的影響。

將RAW264.7細胞消化傳代，取對數(shù)生長期（聚合度在75%以上）的RAW264.7細胞，將每組細胞以1×104個/孔（約8500個細胞）接種于無菌的96孔板中，稍微振蕩，使細胞貼壁。然后放入細胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，24 h后分別加入等量受試藥材（培養(yǎng)基稀釋后），根據(jù)預設的3個濃度，用完全培養(yǎng)基稀釋，每組設10個復孔，空白組加入等量培養(yǎng)基，分別在藥材刺激后24 h，48 h，72 h取出96孔板，用分析儀檢測細胞計數(shù)情況，分析其細胞增值和細胞活力情況，從而評價藥物對RAW264.7細胞生長的影響。

1.8 統(tǒng)計學方法 實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)一進行方差齊性校驗，使用SPSS28.0軟件進行數(shù)據(jù)處理分析，各組均數(shù)之間的比較采用單因素方差分析計量資料用均數(shù)±標準差（x±s）表示，P>0.05為差異無顯著統(tǒng)計學性意義，P<0.05為差異有顯著統(tǒng)計學性意義。

2 結果

2.1 1號傣藥對平均細胞數(shù)的影響 表1結果表明，1號傣藥高濃度在0～24、24～48、48～72 h時均顯著減少小鼠巨噬細胞數(shù);中濃度僅在24～48 h時顯著減少小鼠巨噬細胞數(shù);低濃度對小鼠巨噬細胞數(shù)無顯著影響。

2.2 2號傣藥對平均細胞數(shù)的影響 表2結果表明，2號傣藥高濃度僅在48～72 h時顯著減少小鼠巨噬細胞數(shù)，中、低濃度對小鼠巨噬細胞數(shù)均無顯著影響。

2.3 3號傣藥對平均細胞數(shù)的影響 表3結果表明，3號傣藥對小鼠巨噬細胞數(shù)無顯著影響。

2.4 4號傣藥對平均細胞數(shù)的影響 表4結果表明，4號傣藥高濃度在0～24、24～48、48～72 h時均顯著減少小鼠巨噬細胞數(shù);中濃度僅在48～72 h時顯著減少小鼠巨噬細胞數(shù);低濃度對小鼠巨噬細胞數(shù)無顯著影響。

2.5 5號傣藥對平均細胞數(shù)的影響 表5結果表明，5號傣藥高濃度在0～24、24～48、48～72 h時均顯著減少小鼠巨噬細胞數(shù);中濃度在24～48、48～72 h時顯著減少小鼠巨噬細胞數(shù);低濃度對小鼠巨噬細胞數(shù)無顯著影響。

3 小結

據(jù)文獻記載，1號傣藥其性涼、味苦，入火、土、風塔，具有清火解毒、消腫止痛之功效，可用于咽喉腫痛、口舌生瘡、疔瘍斑疹、肺熱咳嗽、胃脘痛、尿痛等，還可用于消除因飲食不潔或用藥不當所致的各種不良反應[4];2號傣藥其性涼、味苦，入火、土、風塔，具有清火解毒、增強免疫之功效;3號傣藥其性涼、味甘，入火、土塔，具有清火解毒、強精補腎之功效;4號傣藥味苦、微甜，氣臭，性溫。入四塔，功效為調補四塔，解毒。用于治療產(chǎn)后因飲食不潔（節(jié)）等而致的疾病;5號傣藥的功效為清熱解毒，性溫。入四塔。本研究表明，除3號傣藥外，其余4種傣藥均對小鼠巨噬細胞生長均有一定的抑制作用，且4、5號傣藥的高濃度組在0～72 h 3個時間段均有顯著性差異（P<0.05）。

傣醫(yī)“雅解”學說是傣醫(yī)理論最具民族特色的理論之一，使用歷史悠久，是傣醫(yī)基礎理論的重要組成部分，它以四塔、五蘊為理論核心，“未病先解，先解后治，同解同治”的解毒理論是其核心內(nèi)容，雅解旨在解除人體內(nèi)各種毒素，并調節(jié)體內(nèi)“四塔、五蘊”功能失調，達到防病治病，保持人體健康之目的。但“雅解”的生物學原理及解藥的作用機制研究匱乏，本研究以不同濃度的藥物對巨噬細胞生長的影響為指標，初步評價5種常用傣醫(yī)解藥的抗炎活性，對研究解藥的作用機制具有一定的重要意義。

參考文獻：

[1]Murray P J.Macrophage polarization[J].Annual Review of Physiology，2017，79（1）：541-566.

[2]Abbadi A，Llfitis J，Wang M，et al.Heparin inhibits proinflammatory and promotes ant-inflammatory macrophage po-larization under hyperglycemic stress [J].Journal of Biological Chemistry，2020，295（15）：4849-4857.

[3]臺海川，林艷芳.傣醫(yī)“解”的理論與解藥的現(xiàn)代研究初探[J].中國民族醫(yī)藥志，2009，15（10）：37-39.

[4]李海濤，康利平，郭寶林，等.常用傣藥“傣百解”的基原考證[J].中國中藥雜志，2014，39（8）：1525-1529.

（收稿日期：2021-11-18）