新生兒溶血病患兒輸血前應用微柱凝膠檢測新生兒溶血三項、紅細胞不規則抗體的價值

宋繼成

連云港市婦幼保健院輸血科，江蘇連云港 222000

新生兒溶血病屬于臨床比較常見的疾病之一，病因在于母體與嬰兒血型不合，亦或母體妊娠期間IgG 抗體通過胎盤進入胎兒，引起正常紅細胞結構損壞，造成免疫性反應，發生溶血。臨床研究顯示，當母體血型為O 型，而新生兒血型為A 型或者B 型，則極容易出現新生兒溶血病。據統計，我國新生兒溶血病患病率在20%～30%之間，而一旦Rh 血型不合，則二胎發生溶血病的概率升高至80%～90%[1]。如果母體抗體進入患兒體內，則進行輸血治療時，一旦采取常規同型輸血方式，則可引起患兒溶血問題加重。因而，輸血治療前，需對患兒紅細胞不規則抗體、溶血三項指標進行篩查，進而確保輸血安全性。以往臨床檢測方式以試管法為主，但檢出率不理想[2]。隨著醫療技術水平的提高，微柱凝膠檢測法逐漸發展，被用于多種臨床檢測工作中，然而針對新生兒溶血患兒輸血前抗體檢測內容研究較少。本研究針對2017 年1 月—2021 年12 月連云港市婦幼保健院門診及住院收治的新生兒溶血病患兒30 例進行研究，對比探討微柱凝膠檢測與試管檢測的應用價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

抽選本院門診及住院新生兒溶血病患兒30 例進行研究觀察，男16 例，女14 例；日齡1～6 d，平均（3.12±0.45）d；體 質 量2.53～4.35 kg，平 均（3.25±0.45）kg。本研究取得醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 納入與排除標準

納入標準：①經臨床綜合診斷確診為新生兒溶血病患兒；②日齡＜1 周；③患兒監護人同意參與并配合本研究。排除標準：①有藥物過敏史患兒；②有遺傳精神病史患兒；③遺傳心臟病患兒；④監護人不同意配合研究的患兒。

1.3 方法

患兒在輸血前分別采取微柱凝膠檢測法與試管法進行紅細胞不規則抗體、溶血三項檢測，試劑為長春博迅 ABO、RhD 血型檢測卡微柱凝膠[批準文號：國食藥監械(準)字2013 第3400932 號]，具體檢測方法如下。

1.3.1 樣本處理向血液樣本中加入EDTA 抗凝制劑，共2 mL，再將樣本放入離心機中進行處理，轉速設定為3 000 r/min，連續離心10 min 后取出樣本。使用濃度為0.9%的生理鹽水對樣本實施洗滌處理，隨后提取出1 mL 紅細胞樣本制成壓積紅細胞，其余樣本分別制成濃度為0.8%、3%～5%的紅細胞懸濁液。

1.3.2 直接抗人球蛋白檢測方法觀察組選擇抗人球蛋白卡，分別標記A、B、O 三孔，并各加入0.8%的紅細胞懸液樣本，劑量為50 μl，將抗人球蛋白卡放入離心機內處理，等待1 min 后觀察試劑變化情況。對照組則在相應試管內加入3%～5%的紅細胞懸濁液1 滴，同時加入抗人球蛋白血清，同樣為1滴，輕搖試管后混勻，將其置入離心機內處理，等待1 min 后觀察試劑變化情況。

1.3.3 游離抗體檢測方法觀察組選擇抗人球蛋白卡，分別標記A、B、O 三孔，并在其中各加入0.8%的紅細胞懸濁液樣本，劑量為50 μl，同時在各孔內滴入新生兒的血清樣本，各50 μl 即可。將抗人球蛋白卡放置在室溫環境下孵化15 min，后置入離心機內處理，等待1 min 后觀察試劑變化。對照組取空試管，標記后向內加入新生兒血清樣本，滴入2 滴，再加入3%～5%的紅細胞懸濁液1 滴。輕搖混勻后將標記試管加入恒溫水浴鍋內孵化，設備溫度設定為37%，水浴60 min 后取出，向試管內滴入廣譜抗IgG 抗人球蛋白血清，滴入1 滴。最終將試管置入離心機內進行處理，等待1 min 后如觀察到試管內出現凝集的情況，則確認樣本屬于抗體陽性。

1.3.4 放散液抗體檢測方法選擇酸放散方式對放散液進行制備，再通過釋放試驗檢測相關抗體。取空的大試管，加入新生兒的壓積紅細胞樣本1 mL，再加入濃度為0.9%的生理鹽水1 mL，標記后將試管放入恒溫水浴鍋內加熱孵化，設備溫度設定為56℃，連續水浴7 min 后將試管放入離心機內處理。離心機轉速設定為3 000 r/min，連續離心5 min 后提取上層放散液備用。

觀察組使用抗人球蛋白卡，分別標記A、B、O孔，并各加入0.8%的紅細胞懸濁液樣本，劑量為50 μl，隨后在三孔內各加入50 μl 的放散液，將抗人球蛋白卡放置在室溫環境下孵化，共15 min 即可。孵化后，將抗人球蛋白卡置入離心機內處理，轉速保持不變，連續離心處理10 min 后觀察三孔內試劑變化情況。如O 孔中試劑發生凝集，則說明O孔呈陽性，且釋放A、B、O 外抗體。另外選擇抗人球蛋白卡，加入相應抗體后篩選細胞，分別滴入50 μl 的放散液，篩選樣本中的不規則抗體。

對照組取空試管標記，滴入1 滴3%～5%的紅細胞懸濁液樣本。將試管置入恒溫水浴鍋內孵化，設備溫度設定為37℃，連續孵化60 min，取出后使用濃度為0.9%的生理鹽水洗滌3 次，最終在試管內滴入廣譜抗IgG 抗人球蛋白血清，劑量為1 滴。將試管置入離心機內，等待1 min 后觀察結果。

1.3.5 紅細胞不規則抗體檢測方法觀察組樣本分離血漿后，分別在試劑卡的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ孔內各加入50 μl 的血漿樣本，在三孔內各加入篩查譜細胞，劑量同樣為50 μl。將試劑卡放入恒溫水浴鍋內孵化，設備溫度設定為37℃，15 min 后取出并置入離心機內。根據篩查譜紅細胞反應情況判斷檢測結果，如出現凝集的情況，或發生溶血情況，則判斷為陽性。如紅細胞完全沉淀在孔底，且未發生凝集情況，則判斷為陰性。

對照組采取試管法進行紅細胞不規則抗體檢測，將紅細胞血清、血漿混合物放入37℃恒溫箱中保存30 min，通過NS 洗滌紅細胞，利用鹽水法進行紅細胞不規則抗體檢測，如出現陽性反應為陽性，未出現為陰性。

1.4 觀察指標

比較兩種檢測方法測定紅細胞不規則抗體、溶血三項（直接抗人球蛋白實驗、抗體釋放試驗、游離抗體試驗）陽性檢出率。

1.5 統計方法

采用SPSS 21.0 統計學軟件處理數據，計量資料符合正態分布，以（±s）表示，組間差異比較采用t檢驗；計數資料以[n(%)]表示，組間差異比較采用χ2檢驗。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種檢測方法的紅細胞不規則抗體檢出陽性率比較

30 例新生兒溶血病患兒紅細胞不規則抗體檢測結果中，采取微柱凝膠檢測陽性檢出率高于試管法，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩種檢測方法的紅細胞不規則抗體檢出陽性率對比［n(%)］

2.2 溶血三項指標中兩種檢測方法的直接抗人球蛋白實驗測定結果比較

微柱凝膠檢測法測定溶血病患兒溶血三項指標中，直接抗人球蛋白陽性檢出率明顯高于試管法，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 溶血三項指標中兩種檢測方法的直接抗人球蛋白實驗測定結果對比

2.3 溶血三項指標中兩種檢測方法的抗體釋放試驗測定結果比較

微柱凝膠檢測抗體釋放試驗陽性檢出率高于試管法，差異有統計學意義（P＜0.05），見表3。

表3 溶血三項指標中兩種檢測方法的抗體釋放試驗測定結果對比

2.4 溶血三項指標中兩種檢測方法的游離抗體試驗測定結果比較

30 例新生兒溶血病患兒中，通過微柱凝膠檢測游離抗體，陽性患兒28 例，陽性檢出率為93.33%；通過試管法檢測游離抗體，陽性患兒14例，陽性檢出率為46.67%，兩組數據比較，差異有統計學意義（χ2=9.000，P=0.003）。

3 討論

新生兒溶血的發病率相對較高，主要是由于新生兒自身血清與母體不符，進而導致母體產生了相應的血型抗體，抗體經由臍帶系統突破胎盤屏障到達新生兒體內，而此時的新生兒血型抗原與其無法匹配，從而導致新生兒溶血病變的產生[3-4]。ABO新生兒溶血近幾年在臨床上的發病率仍處于較高水平，病理角度分析其病變的主因即在于母嬰血型不符，進而使母體循環系統中產生的IgG 抗體可直接進入新生兒的血液當中，使其內的紅細胞遭到破壞，可導致溶血癥、貧血癥、繼發型高膽紅素血癥等多種疾病，給新出生嬰兒的健康帶來巨大的威脅。目前臨床干預新生兒溶血癥時常用的治療方式為輸血，可有效補充缺失的紅細胞量，但在輸血前必須實施準確的檢驗，以確定輸血源和新生兒血型的匹配性。但由于臨床實際工作中檢驗的樣本量相對較大，因而可能會產生檢驗過程失誤、檢驗操作不達標、檢驗樣本采集不當等問題，從而使檢驗的準確率受到影響[5-6]。

實際治療新生兒溶血患兒時，必須在輸血前進行相應檢查，相關檢驗需圍繞母體內抗體陽性情況進行檢測，從而避免在輸血后再次發生溶血情況。因此，需要同時對新生兒和母體的血液情況給予評估，繼而確保輸血操作的安全性和有效性。微柱凝膠檢測法是目前臨床血液檢測工作中的常用方式，其操作簡便，檢驗結果出具速度較快，且與傳統的方式相比，微柱凝膠法可有效減少對紅細胞洗滌的相關步驟，從而簡略整體檢驗步驟，且對最終檢測結果的準確率并沒有影響，整體準確率相對較高[7]。

相關研究表明，使用微柱凝膠法開展針對新生兒溶血檢驗的溶血三項時，其對直接抗球蛋白陽性的檢出率可以達到95%以上，同時對游離性的紅細胞不規則抗體檢出率也可達到90%以上，對于臨床早期階段的輸血治療工作可以提供及時、準確的參考數據。其中紅細胞不規則抗體可引發人體產生免疫性的溶血癥狀，通常在輸血治療過程中產生，屬于較為嚴重的輸血不良反應[8-9]。其中以IgG 抗體為主，而不規則抗體則包含了抗C、抗c、抗E、抗e、抗D 等，這種不規則抗體在女性妊娠階段、輸血治療階段均可產生，能夠對人體免疫系統產生不良刺激，從而導致血液中出現相應的抗體，也使人體對特定的紅細胞產生過敏反應[10-11]。其中輸血階段產生的IgG 效價和后續過敏、溶血反應的程度有著密切關聯，二者呈正向關系，且部分情況下還可能產生遲發性溶血反應，給治療工作帶來明顯的影響[12-14]。

本研究結果顯示，30 例新生兒溶血病患兒通過微柱凝膠檢測方式進行紅細胞不規則抗體檢測，陽性檢出率為30.00%，明顯高于試管法（P＜0.05），本研究結果與賈冰等[15]發表文章的結果“采用微柱凝膠檢測的觀察組患兒不規則抗體陽性檢出率5.50%高于對照組試管法陽性檢出率0.50%”相一致。

綜上所述，臨床在對新生兒溶血病患兒進行輸血治療前，應通過微柱凝膠檢測方式對紅細胞不規則抗體、溶血三項指標進行檢測，進而保障輸血安全。微柱凝膠檢測具有陽性檢出率高、操作簡單等優點，能夠提供可靠數據支持，值得運用推廣。