細胞蠟塊聯(lián)合免疫組化在胸腹水診斷中的應(yīng)用研究

錢潔，趙小莉，徐妍，徐蓉

1.張家港市第一人民醫(yī)院病理科，江蘇張家港 215600；2.張家港市第一人民檢驗科，江蘇張家港 215600

據(jù)近幾年數(shù)據(jù)統(tǒng)計結(jié)果發(fā)現(xiàn)，我國惡性腫瘤疾病的患病率、病死率均呈升高趨勢。由于多數(shù)惡性腫瘤疾病早期癥狀表現(xiàn)較為隱匿，因此發(fā)現(xiàn)時多已發(fā)展至中晚期，從而錯過最佳治療時機[1]。另外惡性腫瘤患者一般身體各項機能減退，對病理活檢的耐受性較差，因此，找尋一種準確、安全、便捷的腫瘤診斷技術(shù)已成為臨床深入研究的課題。一般惡性腫瘤患者晚期會伴有胸腹水情況，這是因為惡性腫瘤在腹膜、淋巴道等處擴散，破壞靜脈、淋巴管道，對腹膜、胸膜形成刺激[2]，提示可通過檢驗胸腹水中脫落細胞學(xué)診斷腫瘤性疾病。液基細胞學(xué)為常用腫瘤診斷方式之一，但無法判斷腫瘤分型與來源，準確率不理想。細胞蠟塊聯(lián)合免疫組化可有效提高檢出率，通過細胞蠟塊延長保存時間，能保證檢驗結(jié)果的準確與穩(wěn)定[3]。本研究選取2020 年5 月—2022 年5 月于張家港市第一人民醫(yī)院就診的62例疑似惡性胸腹水患者為研究對象，分析細胞蠟塊、免疫組化聯(lián)合診斷的應(yīng)用價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇于本院就診的62 例疑似惡性胸腹水患者作為研究對象，男39 例，女23 例；年齡28～85 歲，平均（47.95±6.03）歲；胸水患者51 例，腹水患者11 例。本研究取得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準。

1.2 納入與排除標準

納入標準：①臨床診斷為疑似惡性胸腹水情況者；②患者有明確病理診斷結(jié)果；③患者同意配合該次診斷研究。

排除標準：①對檢驗方法不耐受者；②溝通障礙者；③排斥該次診斷研究者。

1.3 方法

1.3.1 液基細胞學(xué)檢查方法對臨床送檢的新鮮胸、腹水先進行離心處理，以2 000 r/min 離心5 min，將試管內(nèi)上清液棄掉，再向內(nèi)部加入相較于沉淀物2～5 倍的緩沖液，以吹打的方式將其混合均勻。吹打處理后使用滴管取2～5 滴沉淀樣本，將其滴于載玻片上，以巴氏染色法處理后實施液基細胞學(xué)觀察。

1.3.2 細胞蠟塊聯(lián)合免疫組化檢查方法對臨床送檢的新鮮胸、腹水靜置20 min 后，輕輕棄去上清液，混勻后取50 mL 置于尖頭離心管內(nèi)，剩余部分放置于冰箱內(nèi)冷藏保存?zhèn)溆?，? 000 r/min 離心5 min，棄上清液，如沉淀量不夠，可反復(fù)離心收集，如有血性沉淀，可吸取白膜層，加入少量生理鹽水，振蕩均勻，以3 000 r/min 離心5 min，去除血細胞干擾；將瓊脂液加熱溶解后備用；向沉淀中加入等量的瓊脂液，在瓊脂凝固前快速攪勻，靜置3 min，從離心管底取出瓊脂塊，用包埋紙包裹后放入自動脫水機中與常規(guī)組織一起進行脫水、浸蠟、包埋等過程，制成的細胞蠟塊進行4 μm 切片及常規(guī)HE 染色，細胞蠟塊保留備用?？筛鶕?jù)需要切片，選擇不同的抗體，用全自動免疫組化染色儀進行免疫組化染色。

1.4 觀察指標

①胸腹水診斷結(jié)果分析。將活檢病理診斷結(jié)果作為金標準，總結(jié)患者惡性胸腹水占比率及具體疾病。②診斷結(jié)果。記錄兩種診斷方案測定結(jié)果。③診斷效能。分別計算兩種診斷方案的靈敏度、特異性與準確率。靈敏度=真陽性例數(shù)/（真陽性例數(shù)+假陽性例數(shù)）×100%；特異性=真陰性例數(shù)/（真陰性例數(shù)+假陰性例數(shù)）×100%；準確率=（真陽性例數(shù)+真陰性例數(shù)）/總例數(shù)×100%。

1.5 統(tǒng)計方法

采用SPSS 25.0 統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，將[n(%)]作為計數(shù)資料記錄結(jié)果的標準格式，進行χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 惡性胸腹水病理診斷結(jié)果分析

62 例疑似惡性胸腹水患者通過活檢病理診斷顯示，52 例患者診斷為惡性胸腹水，占比83.87%。其中惡性胸水患者43 例，疾病診斷包括肺腺癌、乳腺癌、神經(jīng)內(nèi)分泌癌、膽管腺癌；惡性腹水患者9例，疾病診斷包括卵巢癌、胃腸道癌轉(zhuǎn)移。見表1。

表1 惡性胸腹水病理診斷結(jié)果分析[n(%)]

2.2 兩種診斷方案的診斷結(jié)果分析

以活檢病理診斷結(jié)果為金標準，液基細胞學(xué)、細胞蠟塊聯(lián)合免疫組化診斷結(jié)果見表2。

表2 兩種診斷方案的診斷結(jié)果分析

2.3 兩種診斷方案的診斷效能對比

細胞蠟塊聯(lián)合免疫組化對胸腹水診斷的靈敏度、準確率均高于液基細胞學(xué)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 兩種診斷方案的診斷效能對比（%）

3 討論

液基細胞學(xué)是臨床檢查工作中較為常用的方式之一，樣本制作后的細胞分布較為均勻，各結(jié)構(gòu)的清晰度較高，經(jīng)染色后可準確分辨，被廣泛地應(yīng)用于腫瘤類疾病的篩查工作中[4-5]。但隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的不斷革新，對腫瘤細胞學(xué)檢驗的要求也在相應(yīng)提升，其不僅需要在篩查時判斷病變的良、惡性質(zhì)，還需進一步確認細胞樣本的來源、分型、時期等具體信息[6-7]。須要注意的是，實際開展該檢查時，所獲得的樣本往往為單一細胞，無法分析其組織結(jié)構(gòu)等特征，且容易受到采集操作、樣本處理等的影響，導(dǎo)致最終檢查結(jié)果出現(xiàn)偏差[8-9]。另外，部分情況下胸腹水中所包含的異常增生的間皮細胞在外形上和惡性腫瘤細胞相似度極高，單純通過液基細胞學(xué)檢查難以區(qū)分。而利用胸腹水樣本經(jīng)過石蠟包埋切片制作的樣本，其細胞也更接近于真實的組織結(jié)構(gòu)，并且還可根據(jù)實際情況開展免疫組化檢查，使得整體實用性、效用性等均相對更高[10-11]。

細胞蠟塊即是采集脫落的細胞樣本，再經(jīng)過脫水、浸蠟、包埋等處理后形成細胞蠟塊，以此作為檢驗樣本，供細胞學(xué)、免疫組化等檢查操作使用。臨床上針對胸腹腔積液、痰液、灌洗液等樣本處理時均可使用，可充分固定其中所包含的組織碎塊、細胞等，以保證多種生理、病理特征被詳細觀察。且經(jīng)過石蠟包埋后，可實現(xiàn)重復(fù)性切片，以滿足后續(xù)多種檢查的需求，從而確保檢查結(jié)果的準確性、敏感性[12-13]。臨床較為常用的方式為直接固定法，但該操作會導(dǎo)致沉淀物中的細胞間黏度下降，導(dǎo)致組織碎塊被大量分散，且松散細胞不容易被聚集，再經(jīng)過后續(xù)脫水處理后便會導(dǎo)致細胞的分布更加松散，切片時產(chǎn)生嚴重丟失細胞數(shù)的情況[14]。

為此，現(xiàn)代細胞蠟塊檢查法經(jīng)過改良后，先以瓊脂進行預(yù)包埋處理，可大幅提升細胞間粘附的穩(wěn)定性，從而在后期脫水處理前，使細胞的相對位置更加固定，分布也更加均勻[15-16]。且瓊脂并不會影響染色效果，經(jīng)過HE 處理后的細胞核、細胞質(zhì)等染色效果較好，且各結(jié)構(gòu)間對比度明顯，細胞結(jié)構(gòu)清晰可見。免疫組化染色背景無干擾因素，且細胞的分布較為均勻，可達到液基細胞學(xué)的效果，也可避免其檢查技術(shù)的缺陷。將細胞蠟塊和免疫組化檢查聯(lián)合后，能夠有效增加胸腹水診斷的準確率，且染色檢查還能夠確定腫瘤細胞的分型情況。另外，應(yīng)用瓊脂預(yù)包埋時必須在其未凝固前完成混合操作，以確保細胞能夠均勻地分布在瓊脂內(nèi)部，并對具有血性沉淀者給予特殊處理，以降低血細胞對檢查的影響[17]。免疫組化診斷中，癌胚抗原（carcinoembryonic antigen, CEA）本身是一種腫瘤標志物，其具有廣譜特性，在臨床診斷、檢查腫瘤類病變時擁有較強的特異性，對于人體內(nèi)是否存在腫瘤病灶能提供可靠的參考數(shù)據(jù)。健康人血液當中CEA 的含量通常較低，且使用免疫組化檢驗時的結(jié)果往往為陰性，如最終檢查結(jié)果呈陽性，則可懷疑該受檢者體內(nèi)存在腫瘤病灶。Ema 則屬于免疫組化指標之一，由于其主要是在上皮細胞膜中合成，因此也被稱為“上皮膜抗原”。現(xiàn)代臨床研究證實部分腫瘤細胞膜也會表達、合成Ema，在患病時可能呈現(xiàn)數(shù)值增加的情況。CK7 屬于角蛋白中的一種，分子量相對較低，通常可用于對單層上皮細胞進行標記，包括卵巢、肺實質(zhì)、乳腺等細胞異常增殖后均可被大量檢出，可用于評估相關(guān)腫瘤類病變。細胞蠟塊結(jié)合免疫組化技術(shù)極大提高了胸、腹腔積液的診斷率，不同病理類型原發(fā)腫瘤細胞免疫組化染色結(jié)果不同，鱗癌主要表達細胞角蛋白（CK5/6）和抑癌基因（P40），腺癌主要表達甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子（thyroid transcription factor 1, TTF-1）和天冬氨酸蛋白酶A（Napsin A），小細胞癌主要表達細胞角蛋白（cytokeratin, CK）和嗜鉻粒蛋白A（CgA），惡性間皮瘤及間皮瘤主要表達鈣結(jié)合蛋白（calretinin）和腎母細胞瘤（wilms tumor 1, WT-1）。并可依靠免疫組織化學(xué)特異性指標明確腫瘤組織來源，不同組織來源的腫瘤免疫組化染色結(jié)果也不同，肺腺癌組織主要表達細胞角蛋白CK7、NapsinA 和TTF-1，乳腺癌組織主要表達雌激素受體（estrogen receptor, ER）和孕激素受體（progesterone receptor, PR），胃腸道腺癌組織主要表達細胞角蛋白（CK20）、癌胚抗原（CEA）和腸道特異性轉(zhuǎn)錄因子（caudal-related homeobox transcription factor 2, CDX-2），卵巢癌組織主要表達糖類抗原125 蛋 白（carbohydrate antigen 125, CA125）、ER 和PR。

通過研究結(jié)果顯示，細胞蠟塊聯(lián)合免疫組化診斷惡性胸腹水的準確率93.55%明顯高于液基細胞學(xué)（P＜0.05），本研究結(jié)果與張煙等[18]研究所得結(jié)果“細胞蠟塊聯(lián)合免疫組化檢出準確率48.24%高于液基細胞學(xué)31.58%”相一致。

綜上所述，細胞蠟塊聯(lián)合免疫組化方式診斷胸腹水良惡性具有較高的靈敏度，可有效提高疾病檢出準確率，為進一步制訂治療方案提供支持。