瘦素和瘦素受體在肺癌組織中的表達

劉 毅，吳風雷，胡 楠，楊成喜

(連云港市第一人民醫院病理科，江蘇 連云港221002)

肺癌是目前病死率最高的惡性腫瘤，其病因一直是研究的熱點，肥胖是一些腫瘤重要的誘因已被公認，而大量的證據提示瘦素作為典型的脂肪因子在腫瘤的發生、發展中起著重要的作用［1-3］。近年來研究結果顯示，瘦素與肺癌發生的關系密切［4］。本研究旨在檢測瘦素及其受體在肺癌組織、相應癌旁組織和正常組織中的表達，探討其與肺癌發生、發展的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集連云港市第一人民醫院病理科2009年至2012年存檔的68 例原發性肺癌石蠟包埋標本，其中男性47 例，女性21 例;年齡(59. 8 ±8.6)歲;依據2009年第7 版肺癌TNM 分期標準:I期18 例，Ⅱ期25 例，Ⅲ期25 例;肺腺癌20 例，肺鱗癌48例?；颊咝g前均未經放療或化療治療，均有完整的臨床病理資料和隨訪資料，所有死亡病例均與腫瘤復發和轉移有關。雙盲法對全部切片進行組織學分型復診，其中小細胞肺癌的診斷均經過免疫組化Chr-A，Syn，CD56，CK，NSE 等5 項指標證實。

1.2 主要試劑 兔抗人瘦素多克隆抗體Ob(A-20)、羊抗人瘦素多克隆抗體Ob-R(M-18)及S-P 免疫組化染色試劑盒購自Santa Cruz 公司。

1.3 方法 標本經中性甲醛固定，梯度酒精脫水，常規石蠟包埋切片，切片厚度4 μm。操作按試劑盒說明書進行，后經蘇木精復染、封片、觀察。用PBS 替代一抗作為陰性對照。

1.4 結果判定 顯微鏡下細胞漿呈棕褐色或棕黃色為陽性細胞。每張切片隨機取10 個高倍視野，切片中陽性細胞表達的比例≥50%為(+++);25% ～＜50%為(++);5% ～ ＜25% 為(+);＜5% 或無著色為(-)。

1.5 統計學處理 采用SPSS 11.5 進行統計學處理，率的比較采用χ2檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 瘦素表達的檢測結果 68 例肺癌組織中，19 例(-)，8 例(+)，19 例(++)，22 例(+++)，陽性率為72.06%;68 例相應癌旁組織中，39 例(- )，6 例(+)，14 例(++)，9 例(+++)，陽性率為42.65%;68 例正常肺組織中，50 例(- )，6 例(+ )，8 例(++)，4 例(+++)，陽性率為26.47%。癌組織中陽性率明顯高于相應癌旁組織和正常肺組織(P ＜0.05);相應癌旁組織和正常肺組織陽性率比較差異無統計學意義(P ＞0.05)。見表1。

表1 瘦素的表達情況 例(%)

2.2 瘦素受體表達的檢測結果 68 例肺癌組織中，24 例(-)，11 例(+)，12 例(++)，21 例(+++)，陽性率64.71%;68 例相應癌旁組織中，45 例(-)，8 例(+)，8 例(++)，7 例(+++)，陽性率33.83%;68 例正常肺組織中，48 例(-)，5 例(+)，10 例(++)，5例(+++)，陽性率為29.41%。癌組織陽性率明顯高于相應癌旁組織和正常肺組織(P ＜0.05);相應癌旁組織和正常肺組織陽性率比較差異無統計學意義(P＞0.05)。見表2。

表2 瘦素受體的表達情況 例(%)

2.3 瘦素和瘦素受體在肺癌組織中表達的相關性68 例肺癌組織中瘦素和瘦素受體表達共同陽性的40例，共同陰性的15 例，兩者存在顯著正相關關系(r =0.754，P ＜0.01)。

3 討論

惡性腫瘤細胞的重要生物學特征是無限增殖性和去分化性。瘦素是一種蛋白質激素，近年來臨床和基礎研究證實其與腫瘤的發生密切相關［5-7］，有促進多種細胞增殖與分化的作用。瘦素是由Ob 基因編碼的蛋白質，人類Ob 基因位于7 號染色體(7q31.3)，由167 個氨基酸殘基組成，N 端是由21 個親水氨基酸殘基構成的信號肽，表明瘦素是一種分泌蛋白質，成熟蛋白由166 個氨基酸殘基組成，相對分子質量為16 000，單鏈，鏈內的2 個半胱氨酸殘基構成1 個二硫橋，這種結構也常見于其他分泌性多肽。據氨基酸序列推測，瘦素是球形分子，無明顯的結構域或跨膜區，以單體形式存在于血漿中。人類瘦素受體基因位于1 號染色體(1p31)，長70 kb，由20 個外顯子和19 個內含子組成。外顯子3 和外顯子4 中含編碼信號序列，外顯子18 編碼跨膜結構域，外顯子19 和外顯子20 編碼胞內結構域。人類瘦素受體于1995年克隆成功，由894 個氨基酸組成，包括胞外區、跨膜區和胞內區。瘦素受體屬I類細胞因子受體家族，其和白介素-6 受體的信號轉導成分糖蛋白、粒細胞集落刺激因子受體和白血病因子受體密切相關。瘦素受體在體內分布于多種組織器官，如神經系統、心臟、胃、肝臟、胰腺、腎臟、前列腺、睪丸、卵巢、子宮、胎盤、皮膚和肌肉等［8-12］。Terzidis等［1］研究發現在校正公認的混雜因素后，血清瘦素水平仍是肺癌的一個獨立危險因素，這與分子機制研究結論一致，即瘦素啟動基因與發生肺癌的危險性增高有關，也可能是由于上游腫瘤相關因子失調的原因。另外，Carpagnano 等［2］報道，非小細胞肺癌患者呼出氣冷凝液、痰液、血液、尿液及支氣管肺泡灌洗液中瘦素水平明顯增加，認為瘦素在非小細胞肺癌中發揮了重要的作用。Petridou 等［3］研究發現，血清瘦素水平是一個獨立的肺癌危險因素，促進肺癌的發生、發展。作者用免疫組化方法檢測68 例肺癌組織、相應癌旁組織和正常肺組織中瘦素、瘦素受體表達，結果示癌組織中的表達高于相應癌旁組織和正常肺組織，差異有統計學意義(P ＜0.05)，提示瘦素在病理狀態下的過表達可促進腫瘤生長。68 例肺癌組織中瘦素和瘦素受體表達共同陽性的40 例，共同陰性的15 例，兩者呈正相關關系(r=0.754，P ＜0.01)，說明瘦素與其受體結合后，能夠促進肺癌細胞的增殖。

作者初步證實了瘦素、瘦素受體的異常表達與肺癌的進展密切相關。瘦素、瘦素受體在肺癌發生、發展過程中呈正相關關系，提示瘦素可能是通過上調其受體的數量促進肺癌的發生、發展。但肺癌組織中瘦素合成、表達以及瘦素通過與受體結合后激活的具體信號通路，如何發揮生物學效應還有待深入研究。

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