磷酸甘油醛脫氫酶基因多態(tài)性在多柔比星誘導(dǎo)心衰患者中的表達(dá)及其意義

邵靚 蔡新勇 劉員員 黃笑 楊柳 王洪 賴珩莉 洪浪

摘要：目的：實(shí)施對(duì)照分析，深入探究健康人群和阿霉素誘導(dǎo)心衰病人內(nèi)GAPDH基因的遺傳學(xué)，探討磷酸甘油醛脫氫酶基因多態(tài)性和阿霉素誘導(dǎo)心衰的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)和聯(lián)系。方法：收集94例阿霉素誘導(dǎo)心衰患者和性別、年齡相互匹配的125例正常人外周血，采用外周血DNA，SNaPshot方法檢測(cè)目的基因并進(jìn)一步分析結(jié)果。結(jié)果：rs1060620位點(diǎn)在GAPDH基因中的多態(tài)性與阿霉素誘導(dǎo)心衰病人存在緊密聯(lián)系。保護(hù)堿基主要為A，同時(shí)A點(diǎn)在統(tǒng)計(jì)學(xué)研究中存在顯著差異，同時(shí)在男性中不具備統(tǒng)計(jì)學(xué)價(jià)值。結(jié)論：GAPDH基因5非編碼區(qū)點(diǎn)rs1060620多態(tài)性與相關(guān)，且與性別具有。女性是該基因與阿霉素誘導(dǎo)心衰相關(guān)發(fā)病的危險(xiǎn)因素。

關(guān)鍵詞：GAPDH;基因位點(diǎn)突變;阿霉素;心力衰竭

【中圖分類號(hào)】 R741.05 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A? ? ? 【文章編號(hào)】2107-2306（2022）05--01

[Abstract]：Objective： To investigate the genetics of GAPDH Gene in healthy people and patients with adriamycin induced heart failure， and to explore the risk and relationship between PD and GAPDH Gene. Methods： the peripheral blood of 94 patients with adriamycin induced heart failure and 125 sex and age-matched normal subjects were collected. The target gene was detected by peripheral blood DNA and snapshot， and the results were analyzed. Results： the rs1060620 gene polymorphism in GAPDH Gene was closely related to adriamycin induced heart failure. The protective base is mainly a， and point a has significant difference in statistical research， and it has no statistical value in men. Conclusion： the polymorphism of rs1060620 in the 5 ‘noncoding region of GAPDH Gene is related to sex. Male is a risk factor associated with doxorubicin induced heart failure.

[Key words]：GAPDH; Gene site mutation; Adriamycin; heart failure

引言

阿霉素（Doxorubicin，Dox）是一種從鏈霉菌中提取的蒽環(huán)類抗生素，是最常用的治療多種癌癥的有效化療藥物之一[1]，如白血病[2]、實(shí)體瘤和軟組織肉瘤等[3]。然而，Dox對(duì)心肌細(xì)胞劑量依賴性毒性作用一直是一個(gè)引發(fā)高度關(guān)注的問題[4]，Dox給藥累積劑量超過成人400～700 mg/m2和兒童300 mg/m2時(shí)就可以誘發(fā)充血性心力衰竭（congestive heart-failure，CHF）[5]，而且此心臟毒性可在治療的任何階段出現(xiàn)，臨床具有不可預(yù)判性。這些特性嚴(yán)重限制了Dox的臨床應(yīng)用。雖然針對(duì)心臟損傷的研究方法和技術(shù)已有不斷提高，但關(guān)于Dox引起心臟毒性的具體機(jī)制仍不明確也無有效治療方案，因此早期診斷和預(yù)測(cè)分析Dox產(chǎn)生心臟毒性可以提示更換化療方案，避免Dox心臟損傷功能是目前亟待解決的問題。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以從2018年至2022年作為研究時(shí)間，從江西省人民醫(yī)院內(nèi)選取阿霉素誘導(dǎo)心衰患者作為研究對(duì)象，以心衰診療標(biāo)準(zhǔn)作為依據(jù)，剔除掉既往有心功能異常的患者，共計(jì)94名患者，招募正常健康人群125名作為對(duì)照組。所有入組人員均被告知參與實(shí)驗(yàn)，并填寫紙質(zhì)版知情同意書及署名。

1.2 方法

抽取每位研究人群外周血4ml-10ml，存儲(chǔ)于-80℃冰箱。參照試劑盒指導(dǎo)，用手提法，提取外周血基因組DNA。合成GAPDH基因rs1060620點(diǎn)位置引物為：F- GCCACTAGGCGCTCACTGTT;R- CTCCTCTGCGACACGTGAC，根據(jù)SNaPshot方法及試劑盒操作。結(jié)束后，應(yīng)用用GeneMapper 8.1對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)展開分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

計(jì)量資料采用（x±s）表示，非正態(tài)分布數(shù)據(jù)采用四分位法表示，計(jì)數(shù)資料采用%表示，采用卡方檢驗(yàn)和Fisher精確檢驗(yàn)進(jìn)行比較。使用SPSS23.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。P<0.05視為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異。

2 結(jié)果

2.1 GAPDH基因5非編碼區(qū)位點(diǎn)rs1060620基因頻率分析

研究發(fā)現(xiàn)rs1060620基因單核苷酸多態(tài)性與阿霉素誘導(dǎo)心衰患者的發(fā)病相關(guān)（p=0.007）。最小等位基因頻率A為保護(hù)堿基，AA/TT與Acarriers/TT均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p=0.002，OR：0.317，CI：0.104-0.529;p=0.018，OR：0.682，CI： 0.633-1.258）。（表1）

2.2 不同性別心衰患者中GAPDH基因rs1060620位點(diǎn)的比較

在不同性別的阿霉素誘導(dǎo)心衰患者中，此點(diǎn)女性對(duì)照研究統(tǒng)計(jì)學(xué)有明顯差異性（P<0.05），而男性病例無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。（女性p=0.011;男性p=0.042）。同時(shí)在女性組之間存在顯著差異，男性組之間無明顯區(qū)別（表2）

3 討論

GAPDH基因，轉(zhuǎn)錄編碼GAPDH蛋白，是糖酵解途徑的一個(gè)關(guān)鍵酶。除糖酵解作用外，還具有豐富的生理功能，比如影響微管組裝和解聚、膜融合、膜分解和胞內(nèi)物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、DNA修復(fù)、核RNA輸出、細(xì)胞骨架動(dòng)態(tài)平衡以及調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬、凋亡等作用[5，6，7]。另一方面，GAPDH聚集可以改變線粒體膜的通透性，并與線粒體膜上的電壓依賴性離子通道相作用，促使細(xì)胞凋亡。部分研究者提出，正常的GAPDH可激活A(yù)tg5（自噬相關(guān)基因5，autophagy associated gene 5），移除損傷的線粒體，抑制caspases非依賴性細(xì)胞死亡，挽救瀕死細(xì)胞[8]。

阿霉素的治療過程中，GAPDH的可逆性改變和不可逆性改變持續(xù)存在。GAPDH在細(xì)胞內(nèi)的異常聚集進(jìn)一步加重，甚至影響到細(xì)胞器的正常功能，阻礙細(xì)胞從氧化應(yīng)激損傷狀態(tài)中復(fù)蘇。在氧化應(yīng)激過程中，異常改變的GAPDH主要集中在線粒體中。氧化應(yīng)激時(shí)，糖酵解啟動(dòng)，然后異常聚集的GAPDH蛋白不但不能輔助能量代謝反而改變線粒體膜電壓，使線粒體膜通透性增強(qiáng)，造成線粒體結(jié)構(gòu)改變，造成細(xì)胞凋亡[9，10]。

綜上所述，GAPDH基因rs1060620位點(diǎn)多態(tài)性與阿霉素誘導(dǎo)的心衰相關(guān)，女性是該基因與阿霉素誘導(dǎo)心衰相關(guān)發(fā)病的危險(xiǎn)因素。

4 參考文獻(xiàn)

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第一作者：邵靚，江西省人民醫(yī)院心內(nèi)科，江西省南昌市豐和北大道266號(hào)，E-mail： shaoliang021224@hotmail.com

通訊作者：邵靚，江西省人民醫(yī)院心內(nèi)科，江西省南昌市豐和北大道266號(hào)，E-mail： shaoliang021224@hotmail.com

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