寒地山楂樹栽培技術(shù)及山楂葉總黃酮含量測(cè)定

馮繼承，趙憲斌，胡鳳亮，鄭小春，李光，劉百通，黎曙光

1.黑龍江省藥品審核查驗(yàn)中心(哈爾濱 150076)；2.黑龍江貴龍醫(yī)藥有限公司(哈爾濱 150076)；3.黑龍江省肇源縣林業(yè)和草原局(大慶 166500)

山楂為傳統(tǒng)藥食同源中藥材，具有健脾開胃、消食化滯、活血化瘀等功效，廣泛用于消化不良、活血化痰等。山楂葉被中國(guó)藥典收載，為薔薇科植物山里紅Crataeguspinnatifida Bge.var.major N.E.Br.或山楂CrataeguspinnatifidaBge的干燥葉，具有活血化瘀，理氣通脈，化濁降脂；用于氣滯血瘀，胸痹心痛，胸悶憋氣，心悸健忘，眩暈耳鳴，高脂血癥。隨著對(duì)山楂葉研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)山楂葉總黃酮具有調(diào)節(jié)脂質(zhì)和糖代謝，護(hù)肝、抗氧化、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈等多種藥理活性，能有效治療糖尿病、高血壓等[2]。

近幾年，國(guó)內(nèi)外專家學(xué)者從山楂葉提取出了牡荊素、牡荊槲皮素、金絲桃苷等成分，并開發(fā)研制了50多種含有山楂葉的藥物，其中“心安膠囊”是含有山楂葉的單方制劑。山楂葉應(yīng)用市場(chǎng)前景廣闊，規(guī)模化栽培應(yīng)運(yùn)而生[3]，有必要開展深入研究。

1 栽植

1.1 基地選擇與整地

本研究種植地選擇位于黑龍江省肇源縣新站林場(chǎng)，面積300畝。該林場(chǎng)位于黑龍江省西南部，地處松嫩平原沙地內(nèi)，川崗相間，波狀起伏，地形開闊，平均海拔130米；屬北溫帶大陸性季風(fēng)氣候，植被屬蒙古植物區(qū)系。栽植樹苗前，做好土地整理，即對(duì)土壤進(jìn)行深翻熟化，修建樹盤蓄水池，挖魚鱗坑。

1.2 選擇樹苗

挑選根系發(fā)達(dá)完整、主根短直的幼苗。起苗后，根系應(yīng)無(wú)劈裂，苗干粗壯通直，高度適中。側(cè)枝分布均勻，數(shù)量5～6條即可。側(cè)芽發(fā)育飽滿，能構(gòu)成豐滿的樹冠，且樹苗不能有病蟲害和自然損傷，為后續(xù)寒地山楂種植與生長(zhǎng)奠定良好基礎(chǔ)[4]。

1.3 科學(xué)定植

采用秋季挖坑、春季栽種植株體或秋季土壤封凍前栽種植株體方式。栽種密度取決于地形，山地或丘陵按株行距2.5×3米、3米×4米；平地按株行距4米×5米。栽種時(shí)，提苗、踏實(shí)，栽好后澆足水、封土保濕。

1.4 田間管理[5]

1.4.1 水分管理 人工建植后灌足水，保證移栽兩個(gè)月內(nèi)土壤濕潤(rùn)；在分枝時(shí)期和開花期保證水量充足供水，初冬及時(shí)澆封凍水，以利幼苗順利過(guò)冬。

1.4.2 施肥 秋季施基肥以利補(bǔ)充樹休營(yíng)養(yǎng)，基肥以有機(jī)肥和農(nóng)家肥為主。果實(shí)采收后，每畝開溝施入500～1000kg，當(dāng)根系布滿全園時(shí)，基肥可全園撒施，然后結(jié)合深翻樹盤將地表肥翻入土中，深度為15～20厘米，追肥頻次為每年3次，并在發(fā)芽期、開花結(jié)果期、果實(shí)膨大期根據(jù)具體情況施用，前期以氮肥為主，后期多施磷、鉀肥。

1.4.3 除草 雜草要早除勤除，若雜草已經(jīng)進(jìn)入開花期或結(jié)實(shí)期，一定要在其成熟前割除清理。

1.4.4 病蟲害防治 夏秋季易發(fā)生白粉病，葉片正反面產(chǎn)生白粉狀斑后期逐漸長(zhǎng)出小黑點(diǎn)(病菌的菌囊殼)，嚴(yán)重時(shí)使葉片早期脫落。白粉病病菌以菌囊殼在殘殼和殘?bào)w上越冬，翌春子囊白孢子引起初侵染，病株上產(chǎn)生的分生孢子主要靠氣流傳播，不斷進(jìn)行再次侵染，導(dǎo)致不相鄰的地塊也會(huì)普遍發(fā)病。秋季清除田間病株并燒毀，發(fā)病初期可用25%的粉銹寧1000倍液噴霧防治，每7～10天噴施1次，連續(xù)噴施2～3次，注意噴藥后半個(gè)月停止?jié)菜诉x擇下午氣溫較高，植物各器官缺水狀態(tài)時(shí)噴施效果最好，噴藥應(yīng)順風(fēng)方向噴施，以免對(duì)人體造成危害。

2 含量測(cè)定

2.1 山楂葉來(lái)源

黑龍江省肇源縣林業(yè)局新站林場(chǎng)三年生寒地山楂葉。

2.2 溶液制備

取本品細(xì)粉約1g，精密稱定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加熱回流提取至提取液無(wú)色，棄去三氯甲烷液，藥渣揮去三氯甲烷，加甲醇繼續(xù)提取至無(wú)色(約4小時(shí))，提取液蒸干，殘?jiān)酉∫掖既芙猓D(zhuǎn)移至50mL量瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，作為供試品貯備液。

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備 精密稱取蘆丁對(duì)照品(批號(hào)：100080-202012，92.2%)26.12mg，置50mL量瓶中，加乙醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加乙醇至刻度，搖勻。精密量取20mL，置50mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得(濃度0.1927mg/mL)。

2.2.2 供試品溶液制備 取供試品貯備液，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5mL，置25mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取2mL，置25mL量瓶中。

2.3 測(cè)定方法

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對(duì)照品溶液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL、6mL，分別置25mL量瓶中，各加水至6mL，加5%亞硝酸鈉溶液1mL，搖勻，放置6分鐘，加10%硝酸鋁溶液1mL，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10mL，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，以相應(yīng)試劑為空白。結(jié)果可參見表1。

表1 標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線的測(cè)定數(shù)據(jù)

2.3.2 供試品溶液測(cè)定 照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“加水至6mL”起依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的重量，計(jì)算，即得。結(jié)果可參見表2。

表2 供試品的測(cè)定數(shù)據(jù)

2.4 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線供試品溶液，計(jì)算供試品溶液中蘆丁的重量。結(jié)果見圖1。

圖1 山楂葉標(biāo)準(zhǔn)曲線

按干燥品計(jì)算(水分5.60%)：樣品1含量值為9.30%，樣品2含量值為9.32%，平均值為9.31%。山楂葉總黃酮含量達(dá)9.31%，高于藥典標(biāo)準(zhǔn)。

3 討論

山楂樹栽培技術(shù)的廣泛應(yīng)用，加速培育藥用植物資源，以促進(jìn)森林資源的合理利用，實(shí)現(xiàn)經(jīng)濟(jì)的可持續(xù)發(fā)展，為林業(yè)轉(zhuǎn)型升級(jí)開辟了一條新路。在開發(fā)、培育山楂藥用植物資源的同時(shí)，拓展了農(nóng)業(yè)投資領(lǐng)域，保護(hù)生態(tài)環(huán)境處于良好的自然水平，保證了藥材資源所需的生態(tài)環(huán)境，從而實(shí)現(xiàn)以農(nóng)養(yǎng)藥，對(duì)當(dāng)?shù)卣衽d、職工致富具有實(shí)際意義。