UPLC?MS/MS分析及NMR技術(shù)鑒定千金子中二萜類(lèi)化合物△

孫明娜，吳孟華，陳虎彪，林敏婷，劉韻，張玲玲，張建業(yè)*

1.廣州醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院/附屬第五醫(yī)院 廣東省分子靶標(biāo)與臨床藥理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 511436；2.暨南大學(xué) 藥學(xué)院，廣東 廣州 510632；3.香港浸會(huì)大學(xué) 中醫(yī)藥學(xué)院，香港特別行政區(qū)

中藥及天然產(chǎn)物在藥物開(kāi)發(fā)和應(yīng)用中占有舉足輕重的地位，是先導(dǎo)化合物的重要來(lái)源之一[1]。全球批準(zhǔn)上市的抗癌藥物中73%非合成所得，其中47%是天然產(chǎn)物或其衍生物[2?4]。傳統(tǒng)中藥千金子是大戟科植物續(xù)隨子Euphorbia lathyrisL.的干燥成熟種子，用于二便不通、水腫、痰飲、積滯脹滿、血瘀經(jīng)閉[5]。其化學(xué)成分主要有脂肪油、蛋白質(zhì)、甾醇、二萜酯及游離二萜醇、香豆素等。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的多種二萜類(lèi)化合物千金子素（euphorbia factor，EF）L1～L25等，其中EFL1、EFL2、EFL3含量最高約占0.2%～0.4%。現(xiàn)代藥理學(xué)及臨床研究表明，千金子中的二萜類(lèi)成分具有一定的抗腫瘤活性[6?7]。

本課題組前期進(jìn)行了千金子中二萜類(lèi)成分的提取分離，發(fā)現(xiàn)EFL1、EFL2 和EFL3 具有明顯的抗腫瘤作用。最初，發(fā)現(xiàn)EFL1 對(duì)人口腔表皮樣癌細(xì)胞KB、口腔表皮樣癌耐藥細(xì)胞KBv200、人乳腺癌細(xì)胞MCF?7 及人乳腺癌耐阿霉素細(xì)胞MCF?7/ADR 等腫瘤細(xì)胞具有顯著的增殖抑制作用[8]；隨后發(fā)現(xiàn)EFL1 具有逆轉(zhuǎn)ATP 結(jié)合盒蛋白亞家族B 成員1（ATP?binding cassette subfamily B member 1，ABCB1）介導(dǎo)的KBv200 及MCF?7/ADR 細(xì)胞多藥耐藥（multidrug resistance，MDR）的活性，但并不影響該細(xì)胞對(duì)化學(xué)治療藥的敏感性[9]；此外，EFL1 可降低抗癌藥對(duì)ABCB1高表達(dá)的人白血病阿霉素耐藥細(xì)胞K562/ADR 的半數(shù)抑制濃度（IC50），并可通過(guò)線粒體途徑增敏細(xì)胞K562/ADR 的凋亡[10]；再者，EFL1 也可增加活性氧的釋放、降低線粒體膜電位、釋放細(xì)胞色素C（cytochrome C，Cyt C），從而誘導(dǎo)人肺癌細(xì)胞A549的凋亡[11]。本課題組也發(fā)現(xiàn)，EFL2和EFL3 對(duì)肺癌A549 細(xì)胞有顯著的抑制作用，其作用機(jī)制與通過(guò)線粒體途徑誘導(dǎo)凋亡相關(guān)[12?13]。為了進(jìn)一步探討千金子中的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，本研究采用超高效液相色譜?質(zhì)譜法（UPLC?MS/MS）分析與傳統(tǒng)的乙醇回流提取及色譜分離相結(jié)合的方法研究千金子乙酸乙酯提取部分的化學(xué)成分，并利用分離所得化合物的核磁共振（NMR）數(shù)據(jù)驗(yàn)證UPLC?MS/MS的分析結(jié)果。

1 材料

1.1 試劑

分析純有機(jī)溶劑如乙醇、甲醇、三氯甲烷、二氯甲烷、環(huán)己烷、正丁醇、乙酸乙酯、石油醚均購(gòu)自廣州佳鉆生物科技有限公司；色譜純?cè)噭┤缂状肌⒁译尜?gòu)自廣州威佳科技有限公司；柱色譜硅膠（200～300 目，青島海洋化工有限公司）；Sephadex LH?20 型葡聚糖凝膠（瑞士Pharmacia Biotech 公司）；千金子購(gòu)自河北安國(guó)藥材市場(chǎng)，經(jīng)香港浸會(huì)大學(xué)陳虎彪教授鑒定為大戟科續(xù)隨子EuphorbialathyrisL.的干燥成熟種子，標(biāo)本保存于廣州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院植物標(biāo)本室；對(duì)照品EFL1、EFL2、EFL3為自制樣品，純度均大于99%。

1.2 儀器

1290 型超高效液相測(cè)譜儀、G6540A 型飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（Agilent Technologies 公司）；質(zhì)譜分析軟件為Agilent MassHunter（G3336?60048）；工作站軟件為Qualitative Analysis B.06.00；Inova?500 NB 型核磁共振儀、Inova?400 NB 型核磁共振儀（美國(guó)Varian公司）。

2 方法

2.1 提取分離

取千金子藥粉16 kg，用95%乙醇（4 L·kg-1）加熱回流，提取3 次，每次3 h。合并提取液后減壓濃縮得浸膏。將浸膏混懸于蒸餾水中，依次用環(huán)己烷（4 L）和乙酸乙酯（4 L）提取（各3 次）。乙酸乙酯層減壓濃縮后，進(jìn)行硅膠柱色譜（石油醚?乙酸乙酯洗脫）和Sephadex LH?20 柱色譜（二氯甲烷?甲醇洗脫）分離。

2.2 樣品制備

分別稱(chēng)取EFL1、EFL2、EFL3、千金子乙酸乙酯提取部分0.1 mg，溶解于10 μL三氯甲烷中，再用色譜甲醇稀釋至1 mL，得對(duì)照品溶液和供試品溶液。

2.3 色譜條件

ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；ACQUITY Van Guard BEH C18色譜柱（5 mm×2.1 mm，1.7 μm）；檢測(cè)波長(zhǎng)分別為210、230、250、280 nm；流動(dòng)相為0.1%甲酸水溶液（A）?0.1%甲酸乙腈溶液（B）；梯度洗脫（0～15 min，45%～80%B；15～18 min，80%B；18～22 min，80%～45%B）；流速為1 mL·min-1；進(jìn)樣體積為1.0 μL。

2.4 質(zhì)譜條件

離子源為噴射流電噴霧離子源（AJS ESI）；脫溶劑氣溫度為300 ℃；脫溶劑氣流速為7.0 L·min-1；霧化氣壓力為45 psi（1 psi≈6.895 kPa）；鞘氣溫度為350 ℃；鞘氣流速為10.0 L·min-1；帽電壓為4000 V；噴嘴電壓為0 V；碎裂電壓為140 V；分離錐電壓為65.0 V；八級(jí)桿透射峰電壓為750 V。

2.5 核磁共振實(shí)驗(yàn)條件

用氘代三氯甲烷（CDCl3）作為溶劑，并以四甲基硅烷（TMS）作為參考物質(zhì)；相對(duì)于TMS 的化學(xué)位移（δ）；處理分析軟件為MestReNova V12.0.0。

3 結(jié)果

3.1 UPLC?MS/MS分析

千金子乙酸乙酯提取部分和對(duì)照品（EFL1、EFL2、EFL3）的離子流色譜見(jiàn)圖1，千金子乙酸乙酯提取部分離子流圖中主要有12個(gè)峰。

圖1 千金子素對(duì)照品及千金子乙酸乙酯提取物的總離子流色譜

3.2 UPLC?MS/MS鑒定結(jié)構(gòu)

根據(jù)每個(gè)峰對(duì)應(yīng)的二級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)，結(jié)合參考文獻(xiàn)已報(bào)道的千金子二萜類(lèi)化合物的信息[8,11,13?20]，并與對(duì)照品EFL1、EFL2、EFL3 的UPLC?MS/MS 進(jìn)行對(duì)比，鑒定出12 種千金子二萜類(lèi)化合物，分別為化合物1～12，鑒定結(jié)果見(jiàn)表1，化合物結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖2。千金子中二萜成分的結(jié)構(gòu)中含多個(gè)酯鍵，其質(zhì)譜信息中多為脫除中性小分子羧酸的碎片離子。在本研究所采用的離子源條件下，各化合物的分子離子及碎片離子均可檢測(cè)到加氫和加鈉離子信號(hào)，加氫信號(hào)離子的豐度更大，本研究主要通過(guò)加氫離子信號(hào)分析鑒定各化合物。分析3 種對(duì)照品的質(zhì)譜裂解規(guī)律，為了與參考文獻(xiàn)對(duì)比，故采用了加鈉離子信號(hào)。EFL3的質(zhì)譜裂解規(guī)律（圖3）：分子離子峰為m/z545［M+Na］+，脫除1 分子乙酸得m/z485；脫除2 分子乙酸得m/z425；脫除1 分子苯甲酸得m/z423；脫除1分子乙酸和1分子苯甲酸得m/z363；脫除2分子乙酸和1 分子苯甲酸得m/z303，質(zhì)譜裂解規(guī)律與參考文獻(xiàn)［14?15］相一致。

圖2 千金子素乙酸乙酯提取物中化合物1～12的化學(xué)結(jié)構(gòu)

圖3 EFL3的質(zhì)譜裂解規(guī)律

EFL2 的質(zhì)譜裂解規(guī)律：分子離子峰為m/z665［M+Na］+，脫除1 分子乙酸得m/z605；脫除2 分子乙酸得m/z545；脫除1 分子苯甲酸得到m/z543；脫除1分子乙酸和1分子苯甲酸得m/z483；脫除2分子乙酸和1分子苯甲酸得m/z423；脫除1分子乙酸和2分子苯甲酸得m/z361；脫除2 分子乙酸和2 分子苯甲酸得m/z301（圖4），與參考文獻(xiàn)［14,16］相一致。

圖4 EFL2的質(zhì)譜裂解規(guī)律

EFL1 的質(zhì)譜裂解規(guī)律：分子離子峰為m/z575［M+Na］+，脫除1 分子乙酸得m/z515；脫除2 分子乙酸得m/z455；脫除1 分子苯乙酸得m/z439；脫除1分子乙酸和1分子苯乙酸得m/z379；脫除2分子乙酸和1 分子苯乙酸得m/z319（圖5），與參考文獻(xiàn)［14］相一致。

圖5 EFL1的質(zhì)譜裂解規(guī)律

參考EFL1、EFL2、EFL3 的質(zhì)譜裂解規(guī)律[14?16]，本研究實(shí)驗(yàn)中千金子乙酸乙酯提取部分12 種化合物的總離子流色譜圖見(jiàn)圖1D，質(zhì)譜信息見(jiàn)表1。化合物1 的保留時(shí)間（tR）為8.754 min，分子離子峰為m/z539［M+H］+，分子式為C31H38O8。二級(jí)質(zhì)譜為m/z419［M+H-120］+，m/z417［M+H-122］+，m/z357［M+H-182］+，m/z297［M+H-242］+，產(chǎn)生脫去120、122、182、242 個(gè)質(zhì)量單位的碎片離子，基本可以推斷分子中含有2個(gè)乙酸酯片段和1個(gè)苯甲酸酯片段。基于以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)報(bào)道信息[17]，鑒定化合物1為EFL25。

表1 千金子乙酸乙酯提取部分12種化合物的質(zhì)譜數(shù)據(jù)

化合物2 的tR為9.339 min，分子離子峰為m/z553［M+H］+，分子式為C32H40O8。二級(jí)質(zhì)譜為m/z493［M+H-60］+，m/z417［M+H-136］+，m/z357［M+H-196］+，m/z297［M+H-256］+，產(chǎn)生脫去60、136、196、256 個(gè)質(zhì)量單位的碎片離子，基本可以推斷分子中含有2個(gè)乙酸酯片段和1個(gè)苯乙酸酯片段。基于以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)報(bào)道信息[8,11,17?19]，結(jié)合化合物2的質(zhì)譜信號(hào)與EFL1對(duì)照品在tR9.342 min 的信號(hào)一致，鑒定化合物2為EFL1。

化合物3 的tR為9.506 min，分子離子峰為m/z495［M+H］+，分子式為C30H38O6。二級(jí)質(zhì)譜為m/z435［M+H-60］+，m/z359［M+H-136］+，m/z299［M+H-196］+，產(chǎn)生脫去60、136、196個(gè)質(zhì)量單位的碎片離子，基本可以推斷分子中含有1個(gè)乙酸酯片段和1個(gè)苯乙酸酯片段。基于以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)報(bào)道信息[17]，鑒定化合物3為EFL13。

化合物4的tR為9.598 min，分子離子峰為m/z581［M+H］+，分子式為C33H40O9。二級(jí)質(zhì)譜為m/z521［M+H-60］+，m/z461［M+H-120］+，m/z401［M+H-180］+，m/z339［M+H-242］+，m/z279［M+H-302］+，產(chǎn)生脫去60、120、180、242、302個(gè)質(zhì)量單位的碎片離子，基本可以推斷分子中含有3 個(gè)乙酸酯片段和1 個(gè)苯甲酸酯片段。基于以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)報(bào)道信息[17]，鑒定化合物4為EFL7b。

化合物5的tR為9.915 min，分子離子峰為m/z481［M+H］+，分子式為C29H36O6。二級(jí)質(zhì)譜為m/z421［M+H-60］+，m/z359［M+H-122］+，m/z299［M+H-182］+，產(chǎn)生脫去60、122、182個(gè)質(zhì)量單位的碎片離子，基本可以推斷分子中含有1個(gè)乙酸酯片段和1個(gè)苯甲酸酯片段。基于以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)報(bào)道信息[17]，鑒定化合物5為EFL12或其異構(gòu)體。

化合物6的tR為10.149 min，分子離子峰為m/z537［M+H］+，分子式為C32H40O7。二級(jí)質(zhì)譜為m/z477［M+H-60］+，m/z417［M+H-120］+，m/z401［M+H-136］+，m/z341［M+H-196］+，m/z281［M+H-256］+，產(chǎn)生脫去60、120、136、196、256個(gè)質(zhì)量單位的碎片離子，基本可以推斷分子中含有2 個(gè)乙酸酯片段和1 個(gè)苯乙酸酯片段。基于以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)報(bào)道信息[17]，鑒定化合物6為EFL18。

化合物7的tR為10.842 min，分子離子峰為m/z523［M+H］+，分子式為C31H38O7。二級(jí)質(zhì)譜為m/z463［M+H-60］+，m/z403［M+H-120］+，m/z401［M+H-122］+，m/z341［M+H-182］+，m/z281［M+H-242］+，產(chǎn)生脫去60、120、122、182、242個(gè)質(zhì)量單位的碎片離子，基本可以推斷分子中含有2 個(gè)乙酸酯片段和1 個(gè)苯甲酸酯片段。基于以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)報(bào)道信息[17]，推測(cè)化合物7可能為EFL3或EFL17。

化合物8的tR為11.259 min，分子離子峰為m/z523［M+H］+，分子式為C31H38O7。二級(jí)質(zhì)譜為m/z463［M+H-60］+，m/z403［M+H-120］+，m/z401［M+H-122］+，m/z341［M+H-182］+，m/z281［M+H-242］+，產(chǎn)生脫去60、120、122、182、242個(gè)質(zhì)量單位的碎片離子，基本可以推斷分子中含有2 個(gè)乙酸酯片段和1 個(gè)苯甲酸酯片段。基于以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)報(bào)道信息[17]，推測(cè)化合物8可能為EFL3或EFL17。

為了確證化合物7和8的具體結(jié)構(gòu)，利用實(shí)驗(yàn)室自制的EFL3 對(duì)照品在相同色譜條件下測(cè)得tR為11.269 min，與化合物8 的tR11.259 min 非常接近，故鑒定化合物8為EFL3[13,15,17,19]，化合物7為EFL17。

化合物9的tR為11.928 min，分子離子峰為m/z549［M+H］+，分子式為C33H40O7。二級(jí)質(zhì)譜為m/z489［M+H-60］+，m/z429［M+H-120］+，m/z401［M+H-148］+，m/z341［M+H-208］+，m/z281［M+H-268］+，產(chǎn)生脫去60、120、148、208、268個(gè)質(zhì)量單位的碎片離子，基本可以推斷分子中含有2 個(gè)乙酸酯片段和1 個(gè)肉桂酸酯片段。基于以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)報(bào)道信息[17]，鑒定化合物9為EFL7a。

化合物10的tR為12.830 min，分子離子峰為m/z517［M+H］+，分子式為C30H44O7。二級(jí)質(zhì)譜為m/z457［M+H-60］+，m/z401［M+H-116］+，m/z397［M+H-120］+，m/z341［M+H-176］+，m/z281［M+H-236］+，產(chǎn)生脫去60、116、120、176、236個(gè)質(zhì)量單位的碎片離子，基本可以推斷分子中含有2 個(gè)乙酸酯片段和1 個(gè)正己酸酯片段。基于以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)報(bào)道信息[17]，鑒定化合物10為EFL23。

化合物11的tR為13.055 min，分子離子峰為m/z601［M+H］+，分子式為C36H40O8。二級(jí)質(zhì)譜為m/z541［M+H-60］+，m/z479［M+H-122］+，m/z419［M+H-182］+，m/z297［M+H-304］+，m/z279［M+H-H2O-304］+，產(chǎn)生脫去60、122、182、304、322個(gè)質(zhì)量單位的碎片離子，基本可以推斷分子中含有1 個(gè)乙酸酯片段和2 個(gè)苯甲酸酯片段。基于以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)報(bào)道信息[20]，鑒定化合物11為EFL11。

化合物12的tR為13.205 min，分子離子峰為m/z643［M+H］+，分子式為C38H42O9。二級(jí)質(zhì)譜為m/z583［M+H-60］+，m/z523［M+H-120］+，m/z521［M+H-122］+，m/z461［M+H-182］+，m/z401［M+H-242］+，m/z339［M+H-304］+，m/z279［M+H-364］+，產(chǎn)生脫去60、120、122、182、242、304、364 個(gè)質(zhì)量單位的碎片離子，基本可以推斷分子中含有2 個(gè)乙酸酯片段和2 個(gè)苯甲酸酯片段。基于以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)報(bào)道信息[16?19]，結(jié)合其質(zhì)譜信號(hào)與EFL2 對(duì)照品在tR13.183 min 的信號(hào)一致，鑒定化合物12 為EFL2。

3.3 NMR鑒定結(jié)構(gòu)

為了進(jìn)一步證實(shí)UPLC?MS/MS 所鑒定的化合物結(jié)構(gòu)，本研究進(jìn)行了組分純化和NMR 結(jié)構(gòu)鑒定，具體的1H?、13C?及2D?NMR（HMBC、DEPT）數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。化合物12 為從二氯甲烷中重結(jié)晶得到的無(wú)色晶體。經(jīng)高分辨質(zhì)譜分析，化合物12 的分子式為C38H42O9，m/z643.292 2［M+H］+。化合物12的1H?NMR 譜顯示在δ7.20～8.10 有10 個(gè)芳?xì)湫盘?hào)；δ5.20～6.50有6個(gè)烯氫信號(hào)或環(huán)上連氧氫信號(hào)。13C?NMR 譜顯示有34 個(gè)碳信號(hào)；DEPT 譜顯示化合物12 有6 個(gè)甲基碳、3 個(gè)亞甲基碳、14 個(gè)次甲基碳和11 個(gè)季碳信號(hào)，提示化合物12 含有2 個(gè)單取代的苯環(huán)。13C?NMR 譜還顯示有5 個(gè)羰基碳信號(hào)，其中1 個(gè)酮羰基碳δ197.3（C?14），2 個(gè)乙酰氧基碳δ169.4、169.1，2 個(gè)苯甲酰基碳δ165.8、165.3，4個(gè)連氧的碳δ64.0（C?5）、78.4（C?7）、79.4（C?3）、91.8（C?15）。HMBC 圖譜（圖6）上可觀察到C?3 位質(zhì)子δH5.74 與δC47.7（C?1），δC165.8（C?1′），δC91.8（C?15）相關(guān)，提示C?3 位連接了苯甲酰氧基；C?5 位質(zhì)子δH6.36 與δC52.7（C?4），δC141.8（C?6），δC91.8（C?15），δC169.1（5?AcCO）相關(guān)，提示C?5 位連接了乙酰氧基；剩余的1 個(gè)乙酰氧基和1 個(gè)苯甲酰氧基連在C?7 和C?15 位，結(jié)合文獻(xiàn)［16?19］報(bào)道信息，C?15 位應(yīng)連接乙酰氧基，C?7 位應(yīng)連接苯甲酰氧基。此外，C?7 位質(zhì)子δH5.51 與δC64.0（C?5），δC141.8（C?6），δC28.6（C?8），δC31.3（C?9），δC119.5（C?17）相關(guān)；C?20位質(zhì)子δH1.78與δC142.5（C?12），δC135.3（C?13），δC197.3（C?14）相關(guān)；C?16 位質(zhì)子δH0.90與δC47.7（C?1），δC37.4（C?2），δC79.4（C?3）相關(guān)。以上數(shù)據(jù)顯示，化合物12 的2D?NMR 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的EFL2的數(shù)據(jù)一致[16?19]。

圖6 化合物12的化學(xué)結(jié)構(gòu)及主要HMBC（H→C）

表2 化合物12的13C-NMR、DEPT、1H-NMR及HMBC數(shù)據(jù)

4 討論

傳統(tǒng)提取分離是研究天然產(chǎn)物中化學(xué)成分的常用方法，而UPLC?MS/MS 是研究天然產(chǎn)物中復(fù)雜成分的有效方法[14]。本研究將兩者結(jié)合用于研究千金子中的活性成分，對(duì)乙酸乙酯提取部分進(jìn)行UPLC?MS/MS 分析，得到12 個(gè)成分，根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量、分子式以及各碎片離子的信息，并與文獻(xiàn)報(bào)道的千金子中已知二萜類(lèi)成分進(jìn)行比對(duì)，鑒定上述12 種千金子二萜成分。化合物1 和2 的質(zhì)譜信息中均含有m/z297，推測(cè)其含有母核A（脫除3 分子水后得m/z296 的片段）（圖7），根據(jù)脫除的2 個(gè)質(zhì)量單位為60 的中性小分子可知其均含2 個(gè)乙酰基，此外，化合物1 中含有1 個(gè)苯甲酰基，化合物2 中含有1 個(gè)苯乙酰基，檢索相關(guān)類(lèi)似物，發(fā)現(xiàn)含有此類(lèi)母核的化合物中，乙酰基均位于5 和15 位，再結(jié)合相對(duì)分子質(zhì)量判斷化合物1 為EFL25，化合物2 為EFL1。同理，化合物3 和5 的質(zhì)譜信息中均含有m/z299，推測(cè)其含有母核B（脫除2分子水后得相對(duì)分子質(zhì)量為298 的片段）（圖7），根據(jù)脫除的1 個(gè)質(zhì)量單位為60 的中性小分子可知其均含1 個(gè)乙酰基，此外，化合物3 中含有1 個(gè)苯乙酰基，化合物5 中含有1 個(gè)苯甲酰基，經(jīng)檢索相關(guān)類(lèi)似物，發(fā)現(xiàn)含有此類(lèi)母核的化合物中，苯乙酰基均出現(xiàn)于3位，故判斷化合物3為EFL13；苯甲酰基可位于3 位和15 位，故判斷化合物5 為EFL12 或其異構(gòu)體。化合物4、11 和12 的質(zhì)譜信息中均含有m/z279，推測(cè)其含有母核C 或F（脫除4分子水后得相對(duì)分子質(zhì)量為278的片段）（圖7），根據(jù)脫除的3 個(gè)質(zhì)量單位為60 的中性小分子可知化合物4 中含有3 個(gè)乙酰基和1 個(gè)苯甲酰基，經(jīng)檢索，含母核F的化合物中均不具有3個(gè)乙酰基，故化合物4的母核應(yīng)為C，結(jié)合相對(duì)分子質(zhì)量，判斷其為EFL7b；根據(jù)脫除的2 個(gè)質(zhì)量單位為122 的中性小分子可知化合物11 和12 中含有2 個(gè)苯甲酰基，經(jīng)檢索，含母核F的化合物含有2個(gè)苯甲酰基，且苯甲酰基分別位于3位和7位，結(jié)合相對(duì)分子質(zhì)量判斷化合物11 為EFL11，化合物12 為EFL2，且化合物11 和12在UPLC?MS中保留時(shí)間較長(zhǎng)，可能是因?yàn)楹?個(gè)苯甲酰基導(dǎo)致極性較小。化合物6～10 的質(zhì)譜信息中均含有m/z281，推測(cè)其含有母核D 或E（脫除3 分子水后得相對(duì)分子質(zhì)量280的片段）（圖7），根據(jù)脫除的中性小分子可知化合物6、9、10 中分別含有1個(gè)苯乙酰基、肉桂酰基、正己酰基，經(jīng)檢索，含母核D 的化合物中3 位可見(jiàn)苯乙酰基、肉桂酰基和正己酰基，故判斷化合物6、9、10 分別為EFL18、L7a 和L23；化合物7 和8 在UPLC?MS/MS 中具有相同的相對(duì)分子質(zhì)量和碎片離子信息，本文通過(guò)對(duì)照品比對(duì)將化合物8 鑒定為EFL3，將化合物7 鑒定為EFL17。NMR 技術(shù)廣泛用于化合物的結(jié)構(gòu)確證，本文也通過(guò)NMR 證實(shí)了UPLC?MS/MS 的鑒定結(jié)果，即化合物12 為EFL2。本文研究表明，基于對(duì)照樣品的UPLC?MS/MS 分析法結(jié)合傳統(tǒng)提取分離法是用于研究千金子乙酸乙酯提取部分化學(xué)成分的有效方法。

圖7 推測(cè)的12種成分所含的萜類(lèi)母核