白芷微型飲片制備工藝優化△

李麗，張超，張凡，賈天柱，高慧

遼寧中醫藥大學 藥學院，遼寧 大連 116600

中藥飲片的炮制歷史悠久，“飲片”一詞最早出現在南宋著名學者周密的《武林舊事》中：“熟藥圓散，生藥飲片”，并一直沿用至今[1]。飲片有廣義、狹義之分。廣義飲片是在中醫藥理論指導下，將中藥材凈制、切制或炮炙成一定規格，供中醫臨床調劑及中成藥生產的配方原料。狹義飲片是指切制成一定形狀的、專供湯劑用的配方原料[2]。湯劑是中醫臨床用藥的最主要形式，專供湯劑用的狹義中藥飲片是中醫臨床處方藥，最能體現中醫用藥辨證施治的特點。但是長久以來，作為中藥應用于臨床的最終形式，飲片一直以粗放、傳統的形式呈現，存在調劑困難、煎煮費時費力、不易攜帶等問題，人們不斷地對傳統中藥飲片進行改革，出現了中藥配方顆粒、破壁飲片等形式，在解決傳統飲片問題的同時，又帶來了等效性、調配折算等問題[3]。針對上述問題，遼寧中醫藥大學賈天柱教授提出了“微型飲片”的概念，其是一種新型飲片，從“形”上進行改進，將傳統飲片化大為小，提高飲片有效成分的煎出率、流動性，具備“規格劃一、流動可調”的特點，便于智能調劑和煎煮，且最大限度地保留傳統飲片的特色[4]。

本研究以藥食同源藥材白芷為研究對象，對其微型飲片的切制工藝進行優化。白芷為傘形科植物白芷Angelica dahurica（Fisch.ex Hoffm.）Benth.et Hook.f.或杭白芷A.dahurica（Fisch.ex Hoffm.）Benth.et Hook.f.var.formosana（Boiss.）Shan et Yuan 的干燥根，味辛，性溫，歸胃、大腸、肺經，具有解表散寒、祛風止痛、宣通鼻竅、燥濕止帶、消腫排膿的功效，常用于感冒頭痛、眉棱骨痛、鼻塞流涕、鼻鼽、鼻淵、牙痛、帶下、瘡瘍腫痛等疾病[5]。現代研究表明，白芷中主要含有歐前胡素、異歐前胡素等香豆素類及揮發油成分，其中，歐前胡素具有抗炎、鎮痛、抗過敏、抗腫瘤等藥理作用[6?9]。

臨床一般使用白芷飲片規格為厚片，厚度為2～4 mm[10]。本研究選擇白芷藥材，分別按照傳統飲片、微型飲片的規格，制備傳統白芷飲片與微型飲片，比較兩者在煎膏率和煎液中歐前胡素含量的差異，證明微型飲片入煎劑的優勢，并進一步優選白芷微型飲片制備工藝。

1 材料

1.1 儀器

E2695 型液相色譜泵、2998 型光電二極管檢測器（PDA，美國Waters公司）；FA1004B 型電子天平（上海精密科學儀器有限公司）；AE240 型分析天平（瑞士Mettler?Toledo 公司）；Q 型超純水儀（美國Millipore 公司）；KQ?250DB 型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；DZKW?D?2 型電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫療儀器有限公司）；WGL?125B 型電熱鼓風干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司）；170319 型細集料流動時間測定儀（紹興市上虞越達儀器廠）；DHF?200型粉碎機（溫嶺市林大機械有限公司）。

1.2 試藥

對照品歐前胡素（中國食品藥品檢定研究院，批號：110826?200307，純度＞98%）；乙腈、甲醇均為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純。

白芷藥材購于河北安國藥材市場（批號：202008?1），經遼寧中醫藥大學翟延君教授鑒定為白芷Angelica dahurica（Fisch.ex Hoffm.）Benth.et Hook.f.的干燥根，歐前胡素的含量符合《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）2020 年版不得少于0.08%的規定。自行切制白芷傳統飲片、微型飲片，見圖1。

圖1 白芷藥材、傳統飲片、微型飲片

2 方法與結果

2.1 歐前胡素含量測定

2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取歐前胡素對照品適量，置于5 mL量瓶中，用乙腈稀釋并定容，配制成質量濃度為0.582 mg·mL-1的對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備 取本品粉末（過三號篩）約0.4 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇45 mL，超聲處理（300 W，50 kHz）1 h，取出，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，4 ℃保存備用。

2.1.3 色譜條件 ECOSIL C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫：28 ℃；流速：0.8 mL·min-1；檢測波長：254 nm；流動相：乙腈?水（65∶35）；進樣量20 μL。色譜圖見圖2。

圖2 歐前胡素對照品及供試品高效液相色譜圖

2.1.4 線性關系考察 精密吸取對照品儲備液0.062 5、0.125 0、0.250 0、0.500 0、1.000 0、2.000 0、4.000 0 mL，分別置于10 mL 量瓶中，用乙腈定容至刻度，搖勻，即得系列質量濃度的對照品溶液，在2.1.3項下色譜條件下每個質量濃度對照品進樣3次，每次20 μL。以對照品溶液質量濃度為橫坐標（X），以峰面積為縱坐標（Y），建立回歸方程：Y=1×108X+125 755（r=0.999 6），在0.003 637 5～0.232 800 0 mg·mL-1線性關系良好。

2.1.5 精密度試驗 精密吸取同一供試品溶液按2.1.3 項下方法操作，連續進樣6 次，每次進樣量為20 μL，記錄待測物峰面積，結果歐前胡素峰面積的RSD為0.95%，表明儀器精密度良好。

2.1.6 重復性試驗 精密稱取同一白芷樣品粉末6份，按照2.1.2 項下方法制備供試品溶液，并按2.1.3 項下色譜條件進行分析，結果歐前胡素含量的RSD為0.83%，表明該方法重復性良好。

2.1.7 穩定性試驗 精密吸取白芷供試品溶液適量，室溫放置，分別于0、2、4、8、12、24 h，按2.1.3 項下色譜條件進樣分析，記錄各自峰面積，結果歐前胡素峰面積的RSD 為1.16%，表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.1.8 加樣回收率試驗 取已知含量的白芷樣品粉末6份，每份約0.2 g，精密稱定，分別精密加入歐前胡素對照品1 mL，對照品溶液的濃度為0.380 6 mg·mL-1，按照2.1.2項下方法制備供試品溶液，并按2.1.3項下色譜條件進行分析，結果見表1。

表1 歐前胡素加樣回收率試驗結果

2.2 傳統飲片與微型飲片煎膏率的測定

分別取白芷傳統飲片、微型飲片樣品各5 g，精密稱定，加10 倍量冷水浸泡40 min，直火加熱，水沸后改用文火煎煮30 min，濾過，藥液備用；藥渣加8 倍量水，繼續煎煮，水沸后改用文火煎煮20 min，濾過，合并2 次藥液，定容至100 mL 量瓶中，混勻。精密量取上述煎煮液50 mL 置于質量恒定的蒸發皿中，于沸水浴上濃縮至干，然后置于烘干箱中105 ℃烘至質量恒定，記錄煎膏質量并按公式（1）計算煎膏率[11]。結果顯示，白芷微型飲片的煎膏率高于傳統飲片的煎膏率。

2.3 飲片制備成品率的測定

白芷藥材低溫干燥，控制含水量＜8%。取干燥后飲片100 g，清水悶潤至軟后進行切制，樣品干燥后，控制含水量＜8%，稱定成品飲片的質量并按公式（2）計算成品率[11?12]。

2.4 飲片的流動性考察

飲片流動時間越短，摩擦力越小、流動性越好。每次稱取白芷微型飲片100 g，采用細集料流動時間測定儀，記錄打開閥門到樣品全部流出測定儀的時間，即為樣品的流動時間，每個樣品測定10次[13?14]。

2.5 飲片切制工藝優選

2.5.1 正交試驗設計與方法 根據實驗前期文獻調研及初步預試驗研究，確定烘制時間（A）、飲片粒徑（B）、干燥溫度（C）為考察因素，每個因素設定3個水平，不考慮交互作用，選用L9（34）正交設計試驗，進行微型飲片炮制工藝的優化，白芷微型飲片制備工藝正交試驗因素水平見表2。

表2 白芷微型飲片制備工藝正交試驗因素水平

本試驗的結果采用綜合評分法進行評價，根據各指標在微型飲片制備工藝及成品質量的貢獻大小設計權重。各組試驗以成品率最高的計為10 分，其相應計分為E×10/最高成品率值；以煎膏率最高者計為30 分，相應計分為F×30/最高煎膏率；以有效成分歐前胡素含量的最高值計為30 分，其他各組相應計分為G×30/歐前胡素最高含量；以流動時間最快得分計為30 分，其相應計分為30×流動時間最快值/H。按公式（3）計算綜合評分（P）。

其中，E為成品率，F為煎膏率，G為活性成分歐前胡素的含量，H為流動時間。

2.5.2 正交試驗結果 按照正交設計進行試驗，白芷微型飲片制備工藝正交試驗安排及試驗測定結果見表3，方差分析結果見表4。

表3 白芷微型飲片制備工藝正交試驗設計與結果

表4 白芷微型飲片制備工藝方差分析結果

根據試驗結果可知，影響綜合得分因素依次為B＞A＞C，即粒徑大?。竞嬷茣r間＞干燥溫度，其中，A、B對白芷微型飲片的制備工藝的影響差異有統計學意義，而C 對白芷微型飲片的制備工藝的影響差異無統計學意義，可確定白芷微型飲片的制備工藝為A2B1C2，即白芷切制成1～2 mm 的小方塊，在60 ℃條件下烘制10 h。

2.5.3 最佳工藝驗證實驗 稱取3 份生白芷樣品各100 g，以最佳工藝方法切制，并按2.1～2.4 項下方法測定白芷微型飲片中的歐前胡素含量、煎膏率、成品率及流動時間。結果見表5。

表5 白芷微型飲片制備工藝驗證實驗結果

結果表明，3份樣品中成品率、煎膏率、歐前胡素含量均較高且流動時間較短，表明該工藝切實可行。

2.6 傳統飲片與微型飲片揮發油得率及水煎液中歐前胡素含量的測定

精密吸取2.2項下煎煮液50 mL，水浴揮干，加入90%甲醇25 mL，使之溶解，0.22 μm 微孔濾膜濾過，取續濾液，按照2.1.3 項下色譜條件進行測定。按照《中國藥典》2020 年版（四部）附錄2204揮發油提取方法（甲法）操作提取白芷飲片揮發油，并按公式（4）計算揮發油得率[15]。結果顯示，微型飲片與傳統飲片揮發油得率相差不大，微型飲片水煎液中歐前胡素含量高于傳統飲片。

3 討論

中藥臨床多用湯劑[16]，因此，本實驗采用水煎煮法比較有效成分在水煎液中的含量及其煎膏率，最大程度保證與臨床煎藥習慣相契合，提高臨床用藥的針對性。《中國藥典》2020年版中將歐前胡素作為白芷藥材指標性成分，因此，本研究對比了白芷飲片水煎液中的歐前胡素的含量及煎膏率。結果表明，微型飲片的有效成分煎出率和煎膏率均顯著增加，即微型飲片較傳統飲片粒徑小，同質量飲片與提取溶劑的接觸面積增大，有效成分提取更完全，從而大大提高了水煎液煎出率。同時，因為微型飲片遠比細粉粗，依然可以保持中藥固有的藥效學基礎，充分體現了微型飲片的合理性與可行性[17]。本研究亦對比了微型飲片與傳統飲片所含揮發油含量差異，采用《中國藥典》2020年版揮發油提取方法（甲法），結果表明，兩者含量差異無統計學意義，即微型飲片并未因飲片粒徑小而造成揮發性成分含量的降低。

本研究中對飲片中有效成分歐前胡素的含量進行測定，采用的《中國藥典》2020 年版規定的提取方法，即用甲醇超聲提取，所測飲片中歐前胡素質量分數為0.12%，同時，也對水煎液中歐前胡素的含量進行測定，僅為0.005 2%，推測是由于歐前胡素水溶性較差所致。

實驗結果表明，白芷微型飲片的流動性明顯優于傳統飲片，可以提高調劑人員工作效率，為患者和醫護人員節省更多的時間，更有利于相關調劑設備的研發。同時，本研究通過正交試驗的方法對白芷微型飲片的最佳制備工藝進行驗證，也證明了該工藝確實可行，可用于工業化生產的需求。

微型飲片作為一種新型飲片，還需要制訂相關質量控制標準，未來將進一步對微型飲片質量標準、藥理、藥效等方面與傳統飲片進行對比研究，從而為微型飲片的安全性及臨床應用提供數據支持，以促進中藥飲片行業的蓬勃發展。