食欲刺激素對(duì)乙酸致大鼠胃損傷的保護(hù)作用及機(jī)制

袁 月，姜?jiǎng)ィ?波，王貴彬，張建軍

（中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥物研究所，新藥作用機(jī)制研究與藥效評(píng)價(jià)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100050）

胃穿孔是胃潰瘍最嚴(yán)重的病變階段，該階段的胃體組織被胃酸及胃蛋白酶腐蝕出現(xiàn)孔洞樣損傷，造成胃內(nèi)容物流出，從而誘發(fā)腹腔炎和全身炎癥反應(yīng)，繼而可能引起中毒反應(yīng)導(dǎo)致死亡。臨床上主要通過(guò)給予質(zhì)子泵抑制劑抑制胃酸分泌，同時(shí)配合抗炎藥物和飲食結(jié)構(gòu)的調(diào)理，從而間接促進(jìn)胃體的自我修復(fù)，對(duì)于病情嚴(yán)重患者也會(huì)采取手術(shù)縫合，目前缺少直接促進(jìn)胃損傷組織修復(fù)的藥物[1]。

食欲刺激素（ghrelin）是一種胃源性含28個(gè)氨基酸的肽，最早發(fā)現(xiàn)于嚙齒類動(dòng)物和人類胃底組織，是生長(zhǎng)素促分泌受體（growth hormone secretagogue receptor，GHS-R）的內(nèi)源性配體。生物體內(nèi)的食欲刺激素有酰化和未酰化2種存在形式，目前研究較多的是酰化食欲刺激素的生理活性[2]。酰化食欲刺激素作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的GHS-R，能劑量依賴性地促進(jìn)生長(zhǎng)激素的釋放及胃腸蠕動(dòng)和攝食行為的發(fā)生[3]。除調(diào)節(jié)正常生理活動(dòng)外，食欲刺激素還有眾多病理保護(hù)作用。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，食欲刺激素對(duì)缺血引起的大腦[4]、心[5]和腎[6]等的組織損傷有顯著保護(hù)作用，同時(shí)還具有十分顯著的抗炎作用，對(duì)膿毒癥引起的大鼠肺損傷有較好的保護(hù)作用[7]。此外食欲刺激素不僅對(duì)乙醇誘導(dǎo)的急性胃損傷具有保護(hù)作用[8]，還能促進(jìn)乙酸誘導(dǎo)的大鼠胃潰瘍和十二指腸潰瘍的愈合和恢復(fù)[9]，但其機(jī)制尚未完全闡明。

本實(shí)驗(yàn)室前期實(shí)驗(yàn)表明，通過(guò)漿膜下注射乙酸誘發(fā)大鼠胃穿孔樣損傷模型，連續(xù)ip給予食欲刺激素30 μg·kg-1能夠有效促進(jìn)乙酸誘導(dǎo)的大鼠胃潰瘍的愈合，本研究通過(guò)系統(tǒng)性觀察食欲刺激素對(duì)乙酸致大鼠慢性胃潰瘍愈合過(guò)程的作用，檢測(cè)其對(duì)大鼠胃組織損傷修復(fù)過(guò)程中炎癥因子和促血管生成因子的影響，探究其對(duì)乙酸誘導(dǎo)的大鼠胃損傷修復(fù)作用的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、試劑和儀器

雄性Wistar大鼠，體重為200～220 g，采購(gòu)自斯貝福生物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)：SCXK（京）2019-0010，動(dòng)物合格證號(hào)：110324201102363727。實(shí)驗(yàn)期間（除手術(shù)造模時(shí)間外）動(dòng)物飼養(yǎng)于含有柔軟木屑的鼠籠，標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，飲水自由，室溫恒定（21～23℃），濕度為20%～25%，12 h晝夜交替。本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)獲中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

重組大鼠O-酰基化食欲刺激素（AS-24160，美國(guó)AnaSpec有限公司），使用時(shí)溶于注射用生理鹽水；免疫組化高效試劑盒（abs957，美國(guó)Absin公司）；RIPA裂解液（P0013B，碧云天生物技術(shù)研究所）；蛋白濃度測(cè)定試劑盒（CW0014S，康為世紀(jì)生物技術(shù)有限公司）；山羊抗大鼠誘導(dǎo)型NO合酶（inductible NO synthase，iNOS）多抗（MAB9502）、山羊抗兔內(nèi)皮型NO合酶（endothelial NO synthase，eNOS）多抗（NB300-500）和山羊抗兔增殖核抗原（prolif-erating cell nuclear antigen，PCNA）多抗（P12004）以及白細(xì)胞介素1β（IL-1β）（RLB00）、腫瘤壞死因子 α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）（RTA00）和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）（RRV00）ELISA試劑盒均購(gòu)于美國(guó)R&D System；NO合酶（NO synthase，NOS）活性檢測(cè)試劑盒（A014-1-2，南京建成生物試劑有限公司）；5×上樣緩沖液和ECL超敏顯色劑（P1010-500）購(gòu)于北京普利萊基因技術(shù)有限公司；山羊抗大鼠β肌動(dòng)蛋白抗體（北京博奧銳京公司）；辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記山羊抗兔IgG抗體（中山金橋公司）；辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記山羊抗大鼠IgG抗體（SA00001-1，美國(guó) proteintech 公司）；NaCl，KCl，Na2HPO4·12H2O和KH2PO4購(gòu)于北京國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

3-18 KS低溫高速離心機(jī)（德國(guó)Sigma公司）；MQX 200酶標(biāo)儀（美國(guó)BioTek公司）；JY96II超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）；Image Quant LAS 4000化學(xué)發(fā)光成像分析儀（美國(guó)GE公司）；DYY7C電泳儀（北京六一儀器廠）；手動(dòng)轉(zhuǎn)輪式切片機(jī)（萊卡生物有限公司）。

1.2 大鼠胃損傷模型的制備、分組和處理

24只Wistar大鼠禁食不禁水24 h后開始造模，2%戊巴比妥鈉（50 mg·kg-1，ip）進(jìn)行麻醉，在大鼠劍突下約1 cm位置，沿劍突方向縱向打開腹腔，開口約1 cm，直鑷將大鼠腺胃部分小心夾出，用微量注射器向漿膜下注射30 μL乙酸后將胃體小心送回，注射處形成清亮凸起，且針頭旋出后無(wú)明顯乙酸漏液即造模成功。手術(shù)縫合傷口，傷口周圍涂抹少許青霉素粉劑。假手術(shù)組12只大鼠只打開腹腔后縫合，不進(jìn)行乙酸注射。術(shù)后第2天造模成功大鼠隨機(jī)分成模型組和模型+食欲刺激素30 μg·kg-1組（ip，每日2次），假手術(shù)組和模型組ip給予同體積生理鹽水，每天9∶00 am稱量大鼠體重和進(jìn)食量。分別在給藥第3，6和9天后（D3，D6和D9），從各組隨機(jī)選擇4只，5%水合氯醛麻醉（50 mg·kg-1，ip）后摘眼球取血，置含肝素鈉EP管中，室溫靜置30 min后1000×g離心15 min，取血漿4℃保存。隨后打開大鼠腹腔，剪斷賁門和幽門后將胃體完整取出，沿胃大彎將胃體剪開，在生理鹽水中涮洗沖凈，大頭針固定胃組織，在受損組織旁置25 mm2正方形紙片，拍照記錄，統(tǒng)計(jì)潰瘍面積與正方形紙片面積比值。根據(jù)潰瘍創(chuàng)口面積，分別用直徑為32，16和8 mm的圓孔取材器，以潰瘍處為中心等面積取材，假手術(shù)組取相同位置處胃組織。ELISA檢測(cè)血漿IL-1β含量，NOS試劑盒檢測(cè)血漿iNOS活性。取出的胃組織一部分置于4%多聚甲醛中固定，用于免疫組化染色觀察PCNA陽(yáng)性細(xì)胞比例，另一部分用于ELISA測(cè)定組織中炎癥因子TNF-α和IL-1β及Western印跡法測(cè)定iNOS和eNOS蛋白表達(dá)。

1.3 免疫組化染色法檢測(cè)胃潰瘍周圍黏膜組織中PCNA陽(yáng)性細(xì)胞比例

取1.2分組處理獲得的胃潰瘍周圍組織浸泡于4%多聚甲醛中固定，每天更換一次多聚甲醛溶液，石蠟包埋，切片機(jī)切片（6 μm厚），按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn)。顯微鏡目鏡放大倍數(shù)10，物鏡20倍下觀察染色結(jié)果，采用DSCapture成像軟件拍照記錄（曝光時(shí)間61 ms，增益4，伽馬0），根據(jù)染色細(xì)胞情況定性判定PCNA陽(yáng)性細(xì)胞比例。

1.4 NOS試劑盒檢測(cè)血漿中iNOS活性

1.2分組處理大鼠的血漿，PBS稀釋2倍后，每孔100 μL置于96孔板中，按NOS檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作，酶標(biāo)儀530 nm測(cè)定吸光度（A530nm），根據(jù)說(shuō)明書方法計(jì)算血漿中iNOS活性。

1.5 ELlSA測(cè)定血漿中l(wèi)L-1 β及胃潰瘍組織勻漿中TNF- α，lL-1 β和VEGF含量

1.2分組處理大鼠的血漿，PBS稀釋5倍后，按ELISA試劑盒說(shuō)明操作檢測(cè)IL-1β含量。取潰瘍周圍胃組織，按照組織（mg）∶PBS（μL）=1∶10的比例在大鼠胃潰瘍周圍組織塊中加入預(yù)冷PBS，用眼科小剪將組織剪成碎塊，然后在冰上用組織勻漿機(jī)進(jìn)行破碎制成10%組織勻漿，5000×g，4℃離心15 min，取上清，BCA法測(cè)定上清中總蛋白含量。將上清用PBS分別稀釋為1×，5×，10×溶液，按試劑盒說(shuō)明書分別檢測(cè)TNF-α，IL-1β和VEGF含量。

1.6 Western印跡法檢測(cè)胃潰瘍周圍組織中iNOS和eNOS蛋白表達(dá)

1.2分組處理大鼠的胃潰瘍周圍組織按1∶10（m∶V）加含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的RIPA強(qiáng)裂解液，于冰上用剪刀將組織剪碎，勻漿后超聲破碎，靜置30 min，12 000×g，4℃離心20 min，取上清。BCA法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度，用裂解液將蛋白終濃度稀釋至8 g·L-1，加1/4體積的5×緩沖液后，98℃處理5 min，冷卻至室溫后分裝，每孔分別取40 μg蛋白質(zhì)樣品上樣，用10%SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白，電轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，5%脫脂牛奶室溫封閉1 h后，分別用一抗（抗iNOS 1∶200；抗eNOS 1∶500）4℃搖床孵育過(guò)夜，辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記二抗（1∶5000）室溫孵育1 h，采用 ECL顯色液顯色。通過(guò)Image J軟件對(duì)蛋白條帶的積分吸光度進(jìn)行分析，以大鼠胃潰瘍周圍組織中目的蛋白（iNOS和eNOS）與內(nèi)參蛋白積分吸光度值的比值表示目標(biāo)蛋白表達(dá)水平。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)用±s表示，采用Photoshop像素比值統(tǒng)計(jì)潰瘍面積，GraphPad Prism 8.0統(tǒng)計(jì)生化指標(biāo)數(shù)據(jù)，不同組間比較采用two way-ANOVA分析處理，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 外源性食欲刺激素對(duì)乙酸致胃損傷大鼠體重和攝食量的影響

造模后D1～D9，假手術(shù)組大鼠體重從（222.8±2.7）g上升至（307.3±1.6）g，模型組大鼠從（217.6±3.3）g上升至（288.0±2.1）g，模型+食欲刺激素組從（216.5±2.4）g上升至（295.0±1.9）g。在同一天中，各組間無(wú)顯著性差異（圖1A）。

Fig.1 Effect of ghrelin on body mass（A）and food intake(B)of rats with gastric injury induced by acetic acid.Wistar rats were microinjected with 30 μL acetic acid into the gastric membrane to establish a model before being randomly separated into the model and model+ghrelin group.The abdomens of rats in the sham group were opened and sutured without gastric ulcer induction.After operation，rats in the model+ghrelin group were given continuous intraperitoneal injection of ghrelin（30 μg·kg-1，twice per day），while the model and sham groups were given the same amount of saline.Body mass and food intake were measured everyday on 9∶00 am from one day before model induction（D-1）.±s，n=4.＊P＜0.05，compared with the sham group；#P＜0.05，compared with the model group.

手術(shù)造模前各組大鼠日均攝食量相近。造模后D2～D5，模型+食欲刺激素組大鼠日均攝食量顯著高于模型組和假手術(shù)組（P＜0.05），而在造模后D7～D9假手術(shù)組日均攝食量最高，但在造模后的整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，模型+食欲刺激素組大鼠日均攝食量整體高于模型組（圖1B）。

2.2 外源性食欲刺激素對(duì)乙酸致大鼠胃潰瘍的促愈合作用

胃展開觀察結(jié)果顯示（圖2），假手術(shù)組大鼠胃組織健康完整，模型組大鼠D3胃組織可見穿孔樣胃潰瘍，D6潰瘍處基底組織基本形成，但潰瘍面積未見縮小，D9潰瘍創(chuàng)口面積開始縮小。模型+食欲刺激素組D3大鼠胃組織可見明顯凹陷狀胃潰瘍，但潰瘍處基底組織已形成。模型+食欲刺激素組大鼠胃潰瘍面積相對(duì)于同一時(shí)間點(diǎn)模型組均顯著縮小（D6，P＜0.05；D9，P＜0.01），D9胃潰瘍基本痊愈。

Fig.2 Effect of ghrelin on healing of gastric ulcer induced by acetic acid.See Fig.1 for the rat treatment.Rat gastrics in each group were taken out and unfolded after 3，6 and 9 d of saline or ghrelin administration（D3，D6 and D9）.A：tissue morphology of rat stomach；B：statistical analysis of ulcer areas.±s，n=4.＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，compared with the model group on the same day.

2.3 外源性食欲刺激素對(duì)胃潰瘍周圍黏膜組織中PCNA陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的影響

免疫組化染色結(jié)果顯示（圖3），假手術(shù)組大鼠胃黏膜組織細(xì)胞連接緊密，并均勻分布少量PCNA陽(yáng)性細(xì)胞。模型組大鼠D3胃黏膜組織黏膜形態(tài)疏松，無(wú)PCNA陽(yáng)性細(xì)胞，D6靠近基底組織附近的黏膜出現(xiàn)較多PCNA陽(yáng)性細(xì)胞，D9 PCNA陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)進(jìn)一步增加，但黏膜層細(xì)胞形態(tài)仍較為疏松。模型+食欲刺激素組大鼠D3胃黏膜靠近基底層出現(xiàn)較多PCNA陽(yáng)性細(xì)胞，D6 PCNA陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)進(jìn)一步增加，且集中于黏膜表層，D9 PCNA陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)繼續(xù)增加，胃黏膜細(xì)胞排列均勻。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，模型+食欲刺激素組PCNA陽(yáng)性細(xì)胞比例整體水平高于同時(shí)間模型組。

Fig.3 Effect of ghrelin on proliferating cell nuclear antigen（PCNA）positive cells in gastric mucosa of rats with gastric injury induced by acetic acid.See Fig.1 for the rat treatment and Fig.2 for the taking out of rat gastrics.Margin of gastric ulcer was taken via round-hole sampling instrument.Arrows show PCNA positive cells.

2.4 外源性食欲刺激素對(duì)模型大鼠血漿中l(wèi)L-1 β含量和iNOS活性的影響

ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示（圖4A），假手術(shù)組大鼠血漿中IL-1β含量在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間保持較低水平（＜100 ng·L-1），D3和D6模型組大鼠血漿中IL-1β含量（＞300 ng·L-1）顯著高于假手術(shù)組（P＜0.01）。模型+食欲刺激素組大鼠D3和D6血漿中IL-1β含量與同時(shí)間模型組相比顯著降低（P＜0.01）。各組大鼠D9血漿中IL-1β含量無(wú)顯著差異。

Fig.4 Effect of ghrelin on interleukin-1 β (lL-1 β） concentration(A)and inducible NO synthase（iNOS）activity(B)in rat plasma via ELlSA and nitric oxide synthase（NOS）kits，respectively.See Fig.1 for the rat treatment.Rat plasma was collected 3，6 and 9 d after administration（D3，D6，D9）in each group.x±s，n=4.＊＊P＜0.01，compared with the sham group on the same day；##P＜0.01，compared with the model group on the same day.

NOS活性測(cè)定結(jié)果表明（圖4B），在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，模型組大鼠血漿iNOS活性均顯著高于假手術(shù)組（P＜0.01）。雖觀察到D3模型組與模型+食欲刺激素組大鼠血漿中iNOS活性水平無(wú)差異，但D6和D9模型+食欲刺激素組大鼠血漿iNOS活性顯著性降低（P＜0.01）。

2.5 外源性食欲刺激素對(duì)大鼠胃潰瘍周圍組織中l(wèi)L-1 β，TNF- α和VEGF含量及iNOS和eNOS蛋白表達(dá)水平的影響

ELISA檢測(cè)結(jié)果表明（圖5），與假手術(shù)組相比，模型組大鼠胃潰瘍周圍組織中IL-1β（＞300 ng·g-1）和TNF-α（＞100 ng·g-1）含量均顯著增加（D3和D6，P＜0.01），VEGF含量顯著降低（D3，D6和D9，P＜0.01）。與模型組相比，模型+食欲刺激素組大鼠損傷周圍胃組織中IL-1β含量顯著降低（D3和D6，P＜0.01）。TNF-α變化趨勢(shì)與IL-1β相似，相比于同時(shí)間模型組，模型+食欲刺激素組大鼠潰瘍周圍胃組織中TNF-α含量同樣顯著下降（D3和D6，P＜0.01）；D9各組大鼠受損胃組織中IL-1β和TNF-α含量無(wú)顯著差異。與模型組相比，模型+食欲刺激素組大鼠胃潰瘍周圍組織中VEGF含量在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間顯著增加（P＜0.01）。

Fig.5 Effect of ghrelin on content of lL-1 β（A），tumornecrosis factor- α（TNF- α）（B）and vascular endothelial growth factor（VEGF）（C）in lesion areas via ELlSA.See Fig.1 for the rat treatment and Fig.2 for collection of rat gastrics.±s，n=4.＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，compared with the sham group on the same day；#P＜0.05，##P＜0.01，compared with the model group on the same day.

Western印跡結(jié)果顯示（圖6），與假手術(shù)組相比，模型組胃潰瘍周圍胃組織中iNOS蛋白表達(dá)水平在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間顯著增加（P＜0.01），eNOS表達(dá)水平先顯著降低（D3，P＜0.05），后顯著增加（D9，P＜0.01）。與模型組相比，模型+食欲刺激素組大鼠受損部位周圍胃組織中iNOS蛋白表達(dá)水平顯著降低（D3，P＜0.01；D6，P＜0.05；D9，P＜0.01），eNOS蛋白表達(dá)水平先提高（D3，P＜0.01），后降低（D9，P＜0.01），達(dá)到假手術(shù)組同水平。D6各組大鼠潰瘍周圍胃組織中eNOS蛋白表達(dá)水平無(wú)顯著差異。

Fig.6 Effect of ghrelin on protein levels of iNOS（A）and endothelial NO synthase（eNOS）(B)in lesion area via Western blotting.See Fig.1 for the rat treatment and Fig.2 for collection of rat gastrics.A2 and B2 were the semiquantitative results of A1 and B1,respectively.±s，n=4.＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，compared with the sham group on the same day；#P＜0.05，##P＜0.01，compared with the model group on the same day.

3 討論

本研究結(jié)果表明，外源性食欲刺激素能夠增加模型大鼠的攝食量，促進(jìn)乙酸誘導(dǎo)的大鼠胃損傷的修復(fù)，組織層面表現(xiàn)為促進(jìn)潰瘍處新生基底組織的形成，加速創(chuàng)口面積縮小；分子層面表現(xiàn)為一定程度抑制血漿及潰瘍周圍組織中IL-1β/iNOS通路和一定程度上促進(jìn)潰瘍周圍胃組織中VEGF/eNOS通路。

當(dāng)胃組織發(fā)生穿孔樣損傷時(shí)，免疫炎癥因子IL-1β能夠通過(guò)激活巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞以及平滑肌細(xì)胞的NF-κB從而激活iNOS表達(dá)，iNOS表達(dá)的適度增加能夠增加創(chuàng)口處血流量，減少細(xì)菌附著，減輕炎癥反應(yīng)，有利于胃潰瘍組織營(yíng)養(yǎng)供給以及創(chuàng)傷修復(fù)[10]。但過(guò)量iNOS催化底物精氨酸生成大量NO，產(chǎn)生細(xì)胞毒效應(yīng)，促進(jìn)細(xì)胞凋亡[11]。因此IL-1β/iNOS的表達(dá)對(duì)創(chuàng)傷的恢復(fù)具有雙向性，創(chuàng)傷早期的IL-1β/iNOS表達(dá)增加有利于創(chuàng)傷組織的修復(fù)[12]，而創(chuàng)傷后期IL-1β/iNOS的持續(xù)高表達(dá)則不利于損傷修復(fù)[13]。VEGF是一種高度特異性的促進(jìn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)的細(xì)胞因子，其與eNOS對(duì)胃潰瘍受損組織中內(nèi)皮細(xì)胞的遷移、增殖和新生血管形成有重要促進(jìn)作用[14]。體外實(shí)驗(yàn)表明，VEGF對(duì)血管新生的促進(jìn)作用有賴于eNOS的表達(dá)[15]；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也表明，外源性VEGF對(duì)eNOS基因敲除小鼠的促創(chuàng)口愈合作用較弱[16]，可見該通路對(duì)胃潰瘍的愈合也可能有重要作用。

本研究結(jié)果顯示，大鼠胃漿膜下注射乙酸會(huì)引起大鼠胃部出現(xiàn)穿孔樣損傷，在胃潰瘍中前期（D3和D6），模型組大鼠血漿和潰瘍周圍胃組織中炎癥因子IL-1β和TNF-α含量顯著增加，且大鼠血漿中iNOS活性以及潰瘍周圍胃組織中iNOS表達(dá)在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間維持在較高水平，提示造模引起了胃穿孔，誘發(fā)了局部以及整個(gè)機(jī)體發(fā)生劇烈的炎癥反應(yīng)，而iNOS作為炎癥因子的下游通路之一可能對(duì)胃潰瘍的修復(fù)有重要影響。外源性食欲刺激素能夠在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間有效降低模型+食欲刺激素組大鼠血漿中IL-1β和胃潰瘍周圍胃組織中IL-1β和TNF-α含量，減輕胃潰瘍局部以及機(jī)體的炎癥反應(yīng)。相比模型組，模型+食欲刺激素組大鼠D6血漿中iNOS活性降低，并在整個(gè)潰瘍期間降低胃潰瘍周圍組織中iNOS蛋白的過(guò)表達(dá)。表明食欲刺激素能夠通過(guò)降低炎癥因子的過(guò)表達(dá)，并在在一定程度上抑制iNOS的表達(dá)和活性，在抑制細(xì)菌增殖的同時(shí)，不會(huì)過(guò)度影響血小板的黏附以及創(chuàng)口愈合。此外，模型組大鼠在整個(gè)胃潰瘍期間潰瘍周圍胃組織中VEGF含量維持低水平，D3胃潰瘍周圍組織中eNOS表達(dá)顯著降低，提示模型組大鼠潰瘍周圍組織中促組織修復(fù)因子整體表達(dá)水平較低。食欲刺激素能夠顯著促進(jìn)模型+食欲刺激素組大鼠胃潰瘍周圍組織中VEGF的表達(dá)，同時(shí)在造模前期（D3）促進(jìn)損傷組織中eNOS蛋白表達(dá)，表明食欲刺激素可能在造模前期通過(guò)促進(jìn)VEGF/eNOS通路，加速胃潰瘍處組織血管新生以及組織愈合。

由此可見，外源性食欲刺激素對(duì)乙酸致大鼠慢性胃損傷有顯著促修復(fù)作用，其作用機(jī)制可能與之對(duì)IL-1β/iNOS炎性通路的抑制和對(duì)VEGF/eNOS通路的促進(jìn)有關(guān)，通過(guò)抑制炎癥因子過(guò)表達(dá)，調(diào)節(jié)NO合成酶的穩(wěn)態(tài)表達(dá)，加速胃潰瘍?cè)缙趽p傷周圍組織血管新生，促進(jìn)胃潰瘍組織的愈合。因此，作為一種內(nèi)源性活性肽，食欲刺激素在胃保護(hù)作用領(lǐng)域具有較好的應(yīng)用前景。