外周血循環(huán)腫瘤細胞檢測在慢性阻塞性肺疾病患者肺癌篩查及預(yù)后判斷中的價值*

和建武，郭春麗，程西安，羅 祥

陜西省銅川市人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，陜西銅川 727000

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一種以氣流受限、肺功能下降為主要特征的肺部疾病，一般氣流阻塞呈現(xiàn)不完全可逆性、進展性發(fā)展，常發(fā)生于老年患者，具有較長的病程和較高的致殘率、致死率[1-3]。該病病因較復(fù)雜，與顆粒物吸入、有毒氣體吸入、肺部感染等有關(guān)，一般患者僅出現(xiàn)咳嗽、氣短、多痰、喘息、肺啰音、繼發(fā)性肺部感染等非特異性臨床表現(xiàn)[4-5]。肺癌是臨床中常見的惡性腫瘤之一，流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，近年來肺癌的發(fā)病率和病死率均呈現(xiàn)逐年遞增的趨勢，肺癌也是癌癥主要死因，嚴重危害人類的健康和生命[6-8]。COPD患者的肺癌發(fā)病率高達16.7‰，且肺癌早期無明顯癥狀，待出現(xiàn)明顯癥狀后往往已處于晚期，嚴重影響患者的臨床療效和生命安全，因此，對COPD患者進行早期肺癌的篩查具有重要意義。外周血循環(huán)腫瘤細胞(CTCs)檢測是一種抽取惡性腫瘤患者的外周血，檢查腫瘤細胞的方法。惡性腫瘤發(fā)展的過程中，有可能通過血液傳播出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，因此，外周血中可能存在腫瘤細胞，檢測CTCs有利于腫瘤轉(zhuǎn)移患者的診斷，并且對判斷腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移都有幫助。CTCs檢測方法為細胞計數(shù)法，包括免疫細胞化學(xué)法、流式細胞術(shù)及核酸檢測法。本研究探討了CTCs在COPD患者肺癌篩查及預(yù)后判斷中的價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2015年6月至2017年9月本院收治的55例COPD合并肺癌患者納入合并組，選擇同期收治的60例單純COPD患者納入COPD組。所有患者均符合《慢性阻塞性肺疾病全球倡導(dǎo)(2017版)》[9]診斷標準，合并組患者均同時接受了支氣管鏡肺部活檢、經(jīng)皮穿刺肺活檢、痰細胞檢測、淋巴結(jié)活檢。排除有嚴重肝腎功能障礙、循環(huán)系統(tǒng)紊亂、腦梗死、精神類疾病、認知功能障礙的患者，剔除臨床病歷資料不全及失訪患者。所有患者均有咳嗽、多痰和喘息等一般性臨床癥狀，25例(21.74%)出現(xiàn)胸痛癥狀(合并組17例，COPD組8例)，54例(46.96%)出現(xiàn)發(fā)熱癥狀(合并組31例，COPD組23例)，42例(36.52%)出現(xiàn)痰中帶血(合并組28例，COPD組14例)。經(jīng)胸部X線片或CT檢查，主要表現(xiàn)為局限性肺不張、阻塞性肺炎、片狀陰影等。兩組患者的一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。所有患者均自愿參與本研究，并簽署了知情同意書。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(2021143)。

表1 兩組一般資料比較

1.2儀器與試劑 免疫熒光顯微鏡、0.1%Triton X-100通透胞膜、肺腺癌A549細胞株(北京天沃科技發(fā)展有限公司)、鼠抗人細胞角蛋白(廣譜)單克隆抗體(P-CK，上海田源生物技術(shù)有限公司)、4,6-二脒基-2-苯基吲哚(北京索萊寶科技有限公司)、4%多聚甲醛、磷酸鹽緩沖液、5%牛血清蛋白。

1.3方法

1.3.1CTCs檢測 采集患者外周靜脈血6 mL(舍去穿刺后前2 mL血液)，加入肝素后采用密度梯度離心法收集腫瘤細胞。分離環(huán)狀乳白色單核細胞層，磷酸化，再次進行離心。將單個核細胞懸液均勻涂在載玻片上，室溫靜置30 min，4%多聚甲醛固定，10 min后以0.1%Triton X-100通透胞膜進行磷酸鹽緩沖液沖洗(15 min)，以5%牛血清蛋白封閉， 采用P-CK和4,6-二脒基-2-苯基吲哚進行染色，在免疫熒光顯微鏡視野下觀察細胞情況。

1.3.2CTCs陽性判定標準 細胞呈現(xiàn)橢圓、圓形或長形，細胞核質(zhì)比明顯大于血細胞，可同時被P-CK和4,6-二脒基-2-苯基吲哚染色，熒光下細胞形態(tài)完整，呈現(xiàn)藍色和綠色熒光即判定為陽性。

1.3.3腫瘤分期 參照國際抗癌協(xié)會修訂的《最新國際肺癌TNM分期診斷標準(第7版)》[10]標準對合并組患者腫瘤進行分期。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者CTCs陽性表達情況比較 COPD組患者的CTCs陽性表達率為0，合并組患者的CTCs陽性表達率為85.45%(47/55)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2.2各種檢測方式對合并組患者肺癌確診情況比較 合并組中，經(jīng)支氣管鏡肺部活檢診斷為肺癌患者37例(67.27%)，經(jīng)皮穿刺肺活檢診斷4例(7.27%)，痰細胞檢測診斷6例(10.91%)，淋巴結(jié)活檢診斷8例(14.55%)。各種方式的檢出率均明顯低于CTCs陽性表達率(85.45%)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2.3不同特征COPD合并肺癌患者CTCs陽性表達情況比較 不同性別、年齡、病理分型COPD合并肺癌患者的CTCs陽性表達例數(shù)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但不同的TNM分期、遠處轉(zhuǎn)移情況COPD合并肺癌患者的CTCs陽性表達例數(shù)比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同特征COPD合并肺癌患者CTCs陽性表達情況比較(n)

2.4不同CTCs表達情況患者預(yù)后情況比較 合并組中，CTCs陽性表達患者47例，平均生存周期為(7.36±1.85)個月，CTCs陰性表達患者8例，平均生存周期為(13.54±2.34)個月，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。CTCs整體陰性患者(COPD組60例與合并組中CTCs陰性表達患者8例)的平均生存周期為(20.76±4.24)個月，CTCs陽性表達COPD合并肺癌患者的平均生存周期也明顯短于CTCs整體陰性患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

3 討 論

近年來，隨著人口老齡化進程加快，人們生活及飲食習(xí)慣改變，以及環(huán)境的變化等因素影響，各類慢性疾病的患病率不斷升高，COPD作為一種嚴重威脅患者生活質(zhì)量、耗費醫(yī)療資源的肺部疾病，目前已成為臨床上第三大致死疾病[11-13]。肺癌是起源于支氣管黏膜或腺體癌變的惡性腫瘤，患者預(yù)后往往較差。有研究證實，肺癌與COPD的并發(fā)主要與患者存在吸煙史或有長期刺激性氣體(顆粒物)暴露史等有關(guān)，也與COPD造成的肺纖維化和上皮組織過度增生、患者長期使用激素類藥物等造成機體免疫抑制等有關(guān)[14-16]。臨床發(fā)現(xiàn)，由于CT、X線片、組織活檢等傳統(tǒng)檢測方式對肺癌早期檢測具有一定的局限性，且其結(jié)果受到影像學(xué)檢查醫(yī)務(wù)工作人員或病理科醫(yī)生的影響，加之肺癌早期不具有特異性表現(xiàn)，大多數(shù)COPD合并肺癌的患者在采用傳統(tǒng)檢測方法確診時常為肺癌晚期，且因為COPD進展導(dǎo)致患者肺功能差,一般難以行手術(shù)治療，使患者錯過最佳治療期，嚴重影響患者的預(yù)后[17-18]。因此，尋求一種特異度高的早期篩查肺癌手段具有重要臨床意義。

CTCs是游離于外周血中所有腫瘤細胞的統(tǒng)稱。研究證實，除了從已形成的實體瘤病灶(原發(fā)灶、轉(zhuǎn)移灶)脫落入血外，腫瘤細胞在形成實體瘤病灶之前便有可能進入血液系統(tǒng)中[19]，提示CTCs的存在往往要早于影像學(xué)表現(xiàn)或臨床癥狀的出現(xiàn)。CTCs檢測可以檢測出已經(jīng)進入血液循環(huán)系統(tǒng)的腫瘤細胞，且該技術(shù)對腫瘤特有的抗原、基因、蛋白等進行捕捉、判定，可檢測出在血液中游離的腫瘤細胞究竟是哪個部位的，這意味著該技術(shù)能檢測出游離在血液中所有種類的腫瘤細胞，對于腫瘤細胞的極早期篩查有不可忽視的作用。通過檢查人血液中是否存在CTCs，可在腫瘤萌芽階段就發(fā)現(xiàn)腫瘤，從而保證患者得到早期治療，改善預(yù)后。

外周血CTCs檢測與傳統(tǒng)檢測方法比較，是一種取材方便、對患者機體損傷小、特異度低、指標清晰的新型腫瘤檢測方式。目前，已有研究發(fā)現(xiàn)外周血CTCs檢測在腫瘤的臨床診斷、病情監(jiān)測、發(fā)現(xiàn)早期轉(zhuǎn)移等方面具有重要意義，若CTCs陽性則提示患者預(yù)后差[19-20]。本研究結(jié)果也驗證了上述研究結(jié)論，CTCs陽性表達的COPD合并肺癌患者的平均生存周期[(7.36±1.85)個月]短于CTCs陰性表達的COPD合并肺癌患者[(13.54±2.34)個月]，也明顯短于CTCs整體陰性表達患者的平均生存周期[(20.76±4.24)個月]，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；COPD組的CTCs陽性表達率為0，合并組的CTCs陽性表達率為85.45%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。這提示COPD患者若出現(xiàn)CTCs陽性表達，患者有較大的概率并發(fā)肺癌，且患者的預(yù)后情況較差。本研究還發(fā)現(xiàn)，腫瘤分期Ⅳ期及有遠處轉(zhuǎn)移COPD合并肺癌患者的CTCs陽性表達例數(shù)明顯多于腫瘤分期Ⅲ期及無遠處轉(zhuǎn)移COPD合并肺癌患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，進一步表明CTCs可以提示患者的病情和預(yù)后情況。

綜上所述，CTCs在對COPD患者肺癌篩查中可作為重要參考指標，且可反映患者遠處轉(zhuǎn)移情況，對患者病情評估和預(yù)后判斷具有重要的指導(dǎo)意義，CTCs陽性表達提示患者預(yù)后較差。