CCAAT 增強子結(jié)合蛋白γ、肺耐藥相關(guān)蛋白在卵巢癌中的表達(dá)及與患者預(yù)后的關(guān)系

趙曉娟，魏珂，董菲，樊雅芝，靳新星

咸陽市第一人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 咸陽 712000

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見惡性腫瘤之一，據(jù)流行病學(xué)統(tǒng)計，2018年卵巢癌新發(fā)病例5.21萬例，死亡2.25萬例，居婦科腫瘤首位。由于卵巢位于盆腔、體積小、早期癥狀不明顯，發(fā)現(xiàn)一般為晚期，且腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)擴散轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致治療難度增高。隨著科技的進(jìn)步，基因芯片、蛋白質(zhì)芯片及轉(zhuǎn)錄學(xué)等技術(shù)開始出現(xiàn)于大眾視野，加快了腫瘤生物標(biāo)志物研究的發(fā)展。目前卵巢癌檢查方法包括陰道超聲聯(lián)合血清糖類抗原125（carbohydrate antigen 125，CA125）檢測[1]。影響卵巢癌預(yù)后的危險因素有很多，其中包括CCAAT增強子結(jié)合蛋白γ（CCAAT enhancer binding protein gamma，CEBPG）及肺耐藥相關(guān)蛋白（lung resistance protein，LRP）。CEBPG即C/EBPγ基因，為C/EBP家族（C/EBPα、C/EBPβ、C/EBPγ、C/EBPδ等）成員；CEBPG蛋白能與CCAAT區(qū)多種病毒增強子相結(jié)合，并能與C/EBP中的每一位成員形成異二聚體，其中CEBPG在多種組織中廣泛表達(dá)[2]。LRP是化療敏感卵巢癌患者預(yù)后評估中一項非常重要的指標(biāo)[3]。國內(nèi)外文獻(xiàn)關(guān)于CEBPG與LRP在卵巢癌中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系分析研究較少[4]。本研究旨在觀察CEBPG及LRP在卵巢癌中的表達(dá)情況，分析預(yù)后的相關(guān)因素，為卵巢癌發(fā)生和預(yù)后判斷提供參考，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年4月至2019年4月咸陽市第一人民醫(yī)院收治的卵巢癌患者作為卵巢癌組，取其卵巢癌組織標(biāo)本。納入標(biāo)準(zhǔn)：①于本次治療前未進(jìn)行過相關(guān)治療；②經(jīng)病理檢查確診為卵巢癌；③病歷資料齊全。排除標(biāo)準(zhǔn)：①腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移；②伴心、肝、腎等重要器官功能障礙；③意識不清晰，無法正常交流；④存在免疫性疾病、血液系統(tǒng)疾病、嚴(yán)重感染；⑤未能接受隨訪。根據(jù)納入、排除標(biāo)準(zhǔn)，共納入71例卵巢癌患者，年齡32～69歲，平均（43.23±7.52）歲；國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）分期[5]：Ⅰ～Ⅱ期36例，Ⅲ～Ⅳ期35例；病理分級：Ⅰ～Ⅱ級34例，Ⅲ～Ⅳ級37例；組織學(xué)類型：漿液性46例，非漿液性25例。另選取同期于咸陽市第一人民醫(yī)院進(jìn)行附件切除的49例子宮肌瘤患者為對照組，取其正常卵巢組織。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)病理檢查確診為非癌變；②臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在心、肝、腎等重要器官功能障礙；②存在免疫性疾病、血液系統(tǒng)疾病、嚴(yán)重感染；③未能接受隨訪。49例患者，年齡31～68歲，平均（41.97±7.11）歲。兩組患者年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批通過，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

LRP及CEBPG均采用免疫組織化學(xué)法進(jìn)行檢測。具體操作步驟：標(biāo)本均由中性甲醛固定，石蠟包埋并進(jìn)行切片，使用二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水，通過H2O2（3%）阻斷滅活內(nèi)源性過氧化物10 min。采用蒸餾水重復(fù)洗2次，放于檸檬酸修復(fù)液中3 min。正常羊血清工作液封閉，37℃10 min。滴加一抗置于4℃左右環(huán)境下過夜儲存，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）代替一抗作為陰性對照，過夜后置于室溫5 min，加生物素標(biāo)記的兔二抗，置37℃室溫30 min，二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色30 s左右，蘇木素復(fù)染1～2 s，常規(guī)脫水，透明，干燥，封片，光鏡下進(jìn)行觀察。

陽性標(biāo)準(zhǔn)為在細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或褐色顆粒，根據(jù)陽性細(xì)胞百分比、染色強度判定結(jié)果。①染色強度：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。②陽性細(xì)胞百分比：從每張切片中隨機選取5個高倍視野并計算、觀察陽性細(xì)胞數(shù)，陽性細(xì)胞百分比（%）=陽性細(xì)胞數(shù)/觀察細(xì)胞數(shù)×100%。無陽性細(xì)胞為0分，陽性細(xì)胞＜10%為1分，10%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。總積分為上述2項評分的乘積，總積分＞4分為陽性。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察CEBPG及LRP在不同組織中的表達(dá)情況，并進(jìn)行對比分析。隨訪71例卵巢癌患者2年，將不同預(yù)后患者年齡、FIGO分期、病理分級、組織學(xué)類型、CEBPG、LRP及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況進(jìn)行比較，進(jìn)一步分析預(yù)后的影響因素。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；影響因素分析采用多元Logistic回歸分析；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CEBPG及LRP 表達(dá)情況的比較

卵巢癌組織中CEBPG、LRP陽性表達(dá)率均明顯高于正常卵巢組織，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。（表1）

表1 正常卵巢組織及卵巢癌組織中CEBPG、LRP表達(dá)情況的比較[n（%）]

2.2 卵巢癌患者預(yù)后影響因素的單因素分析

隨訪2年后，71例患者生存55例（77.46%），死亡16例（22.54%）。生存與死亡患者組織學(xué)類型、CEBPG表達(dá)、LRP表達(dá)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；生存與死亡患者年齡、FIGO分期及病理分級比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。（表2）

表2 卵巢癌患者預(yù)后影響因素的單因素分析（n=71）

2.3 卵巢癌患者預(yù)后影響因素的多因素分析

經(jīng)Logistic回歸模型分析得出，組織學(xué)類型為漿液性、CEBPG陽性、LRP陽性、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均為卵巢癌患者預(yù)后的獨立危險因素（P＜0.05）。（表3）

表3 卵巢癌患者預(yù)后影響因素的多因素分析

3 討論

卵巢癌好發(fā)于中年女性，但發(fā)病逐漸呈現(xiàn)年輕化，大多數(shù)卵巢癌患者就診時已處于中晚期，且初始治療后的患者兩三年內(nèi)會出現(xiàn)復(fù)發(fā)，嚴(yán)重威脅女性身體健康。

CEBPG為C/EBP家族成員，基因定位于19q13.11上，它是參與組織發(fā)育、分化及凋亡過程中重要的轉(zhuǎn)錄因子；LRP基因定位于16號染色體p13.1～p11.2，主要分布于機體與外界相通的巨噬細(xì)胞及分泌性器官等當(dāng)中[6-7]。本研究中，卵巢癌組織中CEBPG、LRP陽性表達(dá)率均明顯高于正常卵巢組織，與既往文獻(xiàn)相符[8]；說明CEBPG及LRP與卵巢癌之間存在著密切的聯(lián)系。另一方面，生存與死亡患者組織學(xué)類型、CEBPG表達(dá)、LRP表達(dá)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；生存與死亡患者年齡、FIGO分期及病理分級比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。提示CEBPG、LRP可能在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用，參與了部分腫瘤浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等惡性進(jìn)程[9-10]。

卵巢癌分為上皮癌和生殖細(xì)胞癌兩種類型，卵巢上皮癌是最常見的類型，上皮癌起源于卵巢上皮組織，卵巢漿液性腫瘤起源于卵巢表面上皮-間充質(zhì)，其中漿液性癌是惡性腫瘤，容易發(fā)生轉(zhuǎn)移，危及患者的生命，說明組織學(xué)類型是卵巢癌的影響因素之一[11-12]。大多數(shù)卵巢癌晚期會出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，是腫瘤轉(zhuǎn)移的危險信號，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移作為卵巢癌轉(zhuǎn)移的常見模式，其中腫脹的腹膜后淋巴結(jié)往往會抑制大靜脈，造成腳或腿一側(cè)的血流障礙與水腫，長期水腫會導(dǎo)致重要器官功能衰竭，由此可見淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對卵巢癌具有深遠(yuǎn)影響[13]。本研究經(jīng)Logistic回歸模型分析得出：組織學(xué)類型為漿液性、CEBPG陽性、LRP陽性、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均為卵巢癌患者預(yù)后的獨立危險因素，進(jìn)一步證實組織學(xué)類型、CEBPG表達(dá)、LRP表達(dá)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與患者的預(yù)后密切相關(guān)。此外，據(jù)國外文獻(xiàn)提及，不同腫瘤標(biāo)志物的靈敏度與組織學(xué)類型有著密切聯(lián)系，不同組織學(xué)類型的卵巢癌包含諸多特殊的高表達(dá)基因，其中包括CEBPG、LRP，推測CEBPG、LRP在卵巢癌中通過調(diào)節(jié)DNA修復(fù)基因，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生發(fā)展[14]。此外，據(jù)研究指出，CEBPG與腫瘤及其對化療藥物的耐藥存在聯(lián)系，LRP為順鉑耐藥最有價值的預(yù)測指標(biāo)之一，其在卵巢癌中呈陽性表達(dá)，側(cè)面顯示卵巢癌多藥耐藥的機制較為復(fù)雜，且二者聯(lián)合可全面客觀篩查不同耐藥機制的高效低毒藥物，因此檢測CEBPG、LRP在卵巢癌中的表達(dá)對篩選化療藥物、提供逆轉(zhuǎn)耐藥靶點、判斷預(yù)后有重要意義[15]。本研究不足之處在于樣本數(shù)量較少，后續(xù)將增大樣本量進(jìn)一步驗證。

綜上所述，CEBPG及LRP在卵巢癌中表達(dá)增高，且與卵巢癌患者的預(yù)后有著密切的聯(lián)系，CEBPG、LRP的表達(dá)可作為預(yù)測卵巢癌患者預(yù)后的分子標(biāo)志物和治療的潛在靶點。