阿膠對(duì)去卵巢小鼠雌激素的影響

★ 張曉雙 白璐（.陜西中醫(yī)藥大學(xué) 陜西 咸陽 7046；.西安市第一醫(yī)院藥學(xué)部 西安 7000)

阿膠是馬科動(dòng)物驢及其他驢皮經(jīng)煎煮濃縮制成的固體膠［1］，阿膠性甘，平，歸肺、肝、腎經(jīng)。阿膠藥理作用廣泛，有抗氧化、抗疲勞、提高免疫力、促進(jìn)造血、抑制癌細(xì)胞、止血等。兩千多年來，阿膠作為一種保健食品和傳統(tǒng)中藥被廣泛應(yīng)用于養(yǎng)生和臨床治療，常用于治療婦科疾病，如陰道出血、痛經(jīng)、崩漏、不孕、月經(jīng)先期、復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、多囊卵巢綜合征、宮頸癌等［2］。臨床發(fā)現(xiàn)阿膠具有一定的雌激素樣作用。本課題組研究發(fā)現(xiàn)阿膠能提高正常小鼠的子宮系數(shù)，提高小鼠血清E2含量，降低小鼠血清LH和FSH的含量，使小鼠子宮內(nèi)膜增厚，子宮腔增大，腺體數(shù)目增多，表明阿膠對(duì)正常小鼠具有一定的雌激素樣作用［3］。本實(shí)驗(yàn)是在前期研究基礎(chǔ)上，考察阿膠對(duì)去卵巢小鼠雌激素的影響。

1 方法和材料

1.1 試藥

阿膠（蘭州佛慈制藥股份有限公司，批號(hào)：19A55）；戊酸雌二醇片（補(bǔ)佳樂）（法國拜耳公司，批號(hào)：283A）；Mouse Elisa E2kit，96t（森貝伽生物科技有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20191025）。

1.2 動(dòng)物

雌性未孕小鼠，體重（20±2）g，購自成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（川）2015-030。

1.3 儀器

GB-204電子天平（瑞士梅特勒）；Forma-86 ℃ ULT Freezer（美國熱電Forma）；KDC-160HR 高速冷凍離心機(jī)（安徽科大創(chuàng)新股份有限公司）；NOVAPHTHTM全波段酶標(biāo)儀（美國Bio-Rad公司）。

1.4 方法

選取健康雌性未孕小鼠，將小鼠腹位固定，腹腔注射10%水合氯醛溶液0.4 mL/10 g麻醉。在軀干下1/3，離開脊柱兩側(cè)各1～2 cm 處作縱形切口，長約1 cm，用鑷子拉出脂肪團(tuán)，可找到一團(tuán)細(xì)線狀不規(guī)則呈肉色的組織即為卵巢，下接粗大管狀組織為子宮角，結(jié)扎，剪去卵巢及余線，假手術(shù)組只切除卵巢附近的脂肪，不切除卵巢，將組織推回腹腔，縫合切口，肌肉注射青霉素鈉注射液4×104U/只，每日1次，連續(xù)一周，預(yù)防感染。逐只進(jìn)行陰道涂片檢查，每天 1次，選取連續(xù)5 d為間情期小鼠供實(shí)驗(yàn)用。按造模成功的小鼠體重隨機(jī)分成模型對(duì)照組、阿膠高劑量組（16 g/kg）、阿膠中劑量組（8 g/kg）、阿膠低劑量組（4 g/kg）和補(bǔ)佳樂（0.4 mg/kg）組，每組10只，灌胃體積20 mL/kg，假手術(shù)組給予等體積生理鹽水，連續(xù)灌胃30 d。末次灌胃24 h后，小鼠稱體質(zhì)量，采取摘眼球取血，室溫靜置30 min后3 000 r/min離心15 min，分離血清，Elisa法測(cè)定血清雌二醇（E2）的水平。仔細(xì)分離子宮，稱重計(jì)算子宮系數(shù)。子宮系數(shù)=子宮濕重（mg）/小鼠體重（g）×10×100%。取小鼠新鮮的子宮組織經(jīng)4%多聚甲醛固定48 h后，常規(guī)脫水，石蠟包埋切片，行蘇木精-伊紅染色。在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用 SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所有數(shù)據(jù)用（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 阿膠對(duì)去卵巢小鼠子宮系數(shù)的影響

與假手術(shù)組相比，模型組小鼠體質(zhì)量明顯增加，子宮重量和子宮系數(shù)顯著降低（P＜0.01），與模型組相比，阿膠三個(gè)劑量組和補(bǔ)佳樂組小鼠體質(zhì)量明顯減輕（P＜0.01），阿膠高劑量組、中劑量組和補(bǔ)佳樂組子宮重量和子宮系數(shù)顯著增加（P＜0.01），阿膠低劑量組小鼠子宮重量和子宮系數(shù)有增高的趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

表1 阿膠對(duì)去卵巢小鼠子宮系數(shù)的影響（±s，n=10）

表1 阿膠對(duì)去卵巢小鼠子宮系數(shù)的影響（±s，n=10）

注：與假手術(shù)組比較，##P＜0.01；與模型組比較，**P＜0.01。

組別 劑量/（g·kg-1）體質(zhì)量/g子宮重量/g子宮系數(shù)/（mg·10 g-1）假手術(shù)組 - 36.6±3.66 0.16±0.01 0.44±0.06模型組 - 42.2±3.39## 0.05±0.01## 0.12±0.04##阿膠高劑量組 16 37.7±2.41** 0.09±0.02** 0.24±0.04**阿膠中劑量組 8 38.0±2.49** 0.08±0.02** 0.20±0.04**阿膠低劑量組 4 38.1±2.13**0.06±0.01 0.15±0.04補(bǔ)佳樂組 0.4×10-3 35.1±1.97** 0.21±0.04** 0.59±0.10**

2.2 阿膠對(duì)去卵巢小鼠血清E2含量的影響

與假手術(shù)組比較，模型組小鼠血清E2濃度明顯降低（P＜0.01）。與模型組相比，阿膠高劑量組、中劑量組和補(bǔ)佳樂組小鼠血清E2濃度明顯升高（P＜0.05，P＜0.01）。見表2。

表2 阿膠對(duì)去卵巢小鼠血清E2含量的影響（±s，n=10）

表2 阿膠對(duì)去卵巢小鼠血清E2含量的影響（±s，n=10）

注：與假手術(shù)組比較，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別 劑量/（g·kg-1） E2 /（ng·L-1）假手術(shù)組 - 52.20±10.57##模型組 - 20.20±4.87阿膠高劑量組 16 33.30±4.00**阿膠中劑量組 8 29.80±9.82*阿膠低劑量組 4 25.60±6.70補(bǔ)佳樂組 0.4×10-3 78.20±16.54**

2.3 阿膠對(duì)去卵巢小鼠子宮病理學(xué)的影響

與假手術(shù)組比較，模型組小鼠子宮明顯萎縮、子宮體積變小；顯微鏡下觀察可見小鼠子宮內(nèi)膜變薄，宮腔變細(xì)，腺體減少。與模型組比較，阿膠高、中、低劑量組和補(bǔ)佳樂組小鼠的子宮均有不同程度的改善，子宮體積增大；阿膠高劑量組和補(bǔ)佳樂組小鼠的子宮內(nèi)膜明顯增厚，子宮腺體增多，宮腔體積明顯擴(kuò)大，阿膠中、低劑量組子宮內(nèi)膜也有所恢復(fù)。見圖1。

圖1 阿膠對(duì)去卵巢小鼠子宮組織病理學(xué)的影響（HE染色，×100）

3 結(jié)論

雌激素是人體內(nèi)重要的類固醇激素，雌激素主要包括雌二醇（estradiol），它的生理功效最強(qiáng)，其次為雌酮和雌三醇。雌激素在體內(nèi)含量的變化影響生殖系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、骨骼系統(tǒng)等［4］。卵巢是雌激素的主要來源。婦女進(jìn)入絕經(jīng)期后，體內(nèi)雌激素水平將會(huì)快速下降，導(dǎo)致更年期綜合癥、骨質(zhì)疏松癥、老年性癡呆和心血管疾病等。更年期婦女采用雌激素替代療法（estrogen replacement therapy，ERT）來治療或預(yù)防這些絕經(jīng)期易出現(xiàn)的癥狀。但長期應(yīng)用雌激素易產(chǎn)生高血壓、水腫等副作用，并增加乳腺癌及子宮內(nèi)膜癌等婦科腫瘤的發(fā)病危險(xiǎn)。因此人們一直致力于尋求雌激素替代物，期望這種替代物既能發(fā)揮雌激素對(duì)心腦血管等系統(tǒng)的保護(hù)作用，緩解更年期綜合癥，同時(shí)又能避免上述副作用，這類物質(zhì)即被稱為選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑［5］。

阿膠始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，屬于膠類中藥，具有補(bǔ)血滋陰、潤燥、止血、增強(qiáng)機(jī)體抗病能力等功效，可單獨(dú)組方用于疾病的治療，也可與其他藥物進(jìn)行配伍。眾多治療經(jīng)、孕、產(chǎn)、雜等婦科疾病的方劑中均有配伍阿膠，阿膠補(bǔ)血、止血、滋陰、安胎功效被普遍應(yīng)用，并獲得了很好的療效，阿膠治療不孕癥，能增加患者子宮膜厚度并改善子宮內(nèi)膜容受性，有利于胚胎著床［6］；阿膠可抑制卵巢顆粒細(xì)胞凋亡，改善卵巢功能［7］；阿膠能增加誘導(dǎo)排卵助孕周期子宮內(nèi)膜的厚度，加速子宮內(nèi)膜的增長并改善子宮動(dòng)脈血供［8］。本研究采用卵巢切除的方法致使小鼠體內(nèi)雌激素水平急劇下降，對(duì)體重、子宮系數(shù)和子宮形態(tài)都產(chǎn)生影響，然后給予阿膠考察其改善作用。通過與陽性對(duì)照藥補(bǔ)佳樂的對(duì)比觀察發(fā)現(xiàn)，阿膠對(duì)去卵巢小鼠具有擬雌激素樣作用。本研究結(jié)果表明，與模型組相比，阿膠高、中、低劑量組和補(bǔ)佳樂組體重明顯降低，阿膠高劑量組、中劑量組和補(bǔ)佳樂組子宮系數(shù)、血清雌二醇（E2）的含量明顯升高。阿膠各組和補(bǔ)佳樂組具有促進(jìn)子宮生長發(fā)育的作用，子宮內(nèi)膜增厚，子宮腔增大，腺體數(shù)目增多。以上研究結(jié)果表明阿膠對(duì)去卵巢小鼠具有一定的雌激素樣作用。阿膠中檢測(cè)和分離出來的成分主要包括氨基酸、明膠、多糖、揮發(fā)性物質(zhì)、無機(jī)物等，但目前阿膠中的哪部分有效成分參與了雌激素樣作用尚不清楚，阿膠調(diào)節(jié)女性體內(nèi)雌激素樣作用的機(jī)制及其有效成分還有待于進(jìn)一步研究。