種公牛包皮沖洗對精液中細菌數量影響的研究

鄧福金，周國權，李博平，杜學海

（遼寧省農業發展服務中心，遼寧 沈陽 110032）

精液中細菌數量是衡量牛冷凍精液質量的一項重要指標。我國牛冷凍精液國家標準規定，每劑量精液中細菌數不得超過800 個[1]。為達這一標準，必須嚴格把握采精環節。精液中產生細菌的主要原因為公牛生殖器官疾病，也與采精、凍精生產過程有關。公牛包皮內含大量腸球菌、葡萄球菌、大腸桿菌等，是公牛精液中細菌的主要來源[2]。精液中細菌數過多，不僅可造成精子活力降低、生存時間縮短，并且極易造成胚胎早期死亡，甚至引發母牛繁殖障礙[3]。采精時對公牛陰莖包皮的清洗至關重要[4]，若采精前沖洗包皮，可在一定程度上防止細菌污染[5]。但也有研究顯示，采精前不必為每頭公牛沖洗包皮，清洗不當更可能傳播疾病[6]。因此，本研究在冬春兩季開展采精前沖洗包皮對精液內細菌數量變化影響的對比試驗，以期為種公牛站精液生產提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

采精公牛來自遼寧省牧經種牛繁育中心有限公司。

1.2 試劑與儀器

儀器：BCX-200包皮沖洗裝置，購自日本富士平工業株式會社；IS4 型細管灌封噴碼一體機、ACCUCELL 精液密度測定儀、TMS-160MHS細管精液冷凍儀，均購自法國IMV公司；DHP-9162恒溫培養箱，購自北京永光明醫療器械廠；SW-CJ-1D 超凈化工作臺，購自蘇州凈化儀器廠；DZKW-D-5-6 恒溫水浴箱，購自北京永光明醫療器械廠；YP-B2002 天平，購自江蘇省常州萬得天平儀器廠；LDZX-30KBS 電熱壓力蒸氣滅菌器，購自上海申安醫療器械廠；細管剪，購自法國IMV 公司。0.25 mL 細管、細管專用推針（自制）、平皿（直徑90 mm）、酒精燈、記號筆等。

試劑：Bioxcell 稀釋液（法國IMV 公司）、02-75營養瓊脂培養基（北京奧博星生物科技有限責任公司）、75%酒精。

1.3 試驗方法

1.3.1 試驗時間

選擇冬季（2020 年12 月—2021 年2 月）、春季（2021 年4月—6月）進行。試驗期共6個月。

1.3.2 試驗設計

14 頭種公牛，分對照組和試驗組，每組選擇7 頭采精公牛。冬春兩季各開展1次試驗，每次試驗每頭公牛重復檢測3 次，即每月進行1 次檢測。對照組公牛采精前采用包皮沖洗機，約38 ℃溫水沖洗包皮及陰毛周圍污物，停留20 min，水滴淋干后進行采精；試驗組公牛采精前不沖洗包皮，牽入采精場直接采精。

1.3.3 凍精生產

凍精按照DB21/T 3006—2018 進行[7]。精液采集后分別對其活力、密度、采精量進行檢查；根據精液的活力、密度、每劑量有效精子數稀釋精液，常溫下灌裝，封口，4～5 ℃低溫柜中降溫、平衡3～4 h，低溫柜中碼簾上架，全自動冷凍儀中冷凍。冷凍完成后，每頭牛抽取2支細管凍精進行檢測。

1.3.4 細菌檢測

超凈化工作臺內點燃酒精燈，平皿標記樣品編號。細管凍精37 ℃水浴解凍，酒精棉球擦拭整支細管，剪掉超聲波封口端，細管推針將整支細管的精液（0.18～0.20 mL）注入平皿；注入10～15 mL 保溫至46～50 ℃的營養瓊脂培養基至平皿，轉動平皿使其與精液混合均勻，并做一空白對照。瓊脂凝固后翻轉平板，（36±1）℃培養（48±2）h，平皿內菌落數計數法參考國家標準（GB 4143—2008）。

式中：B為細菌數；n1為第一次試驗樣品中細菌數；n2為第二次試驗樣品中細菌數；n3為第三次試驗樣品中細菌數。

1.4 數據統計與分析

數據采用Excel進行初步處理，采用GraphPad Prism 5軟件進行統計學分析，組內差異采用單因素方差分析（One-way ANOVA），組間差異采用獨立樣本t 測驗比較。結果以“平均值±標準差”表示，P＜0.05表示差異顯著。

2 結果與分析

2.1 冬季采集精液中細菌數量變化（見表1）

表1 冬季采集精液中細菌數量變化Tab.1 Changes in the number of bacteria in semen collected in winter 單位：個/支

由表1 可知，對照組細菌數量為1.7～10.3 個/支，組內個體間細菌數量差異顯著；樣本2、6細菌數量顯著高于其他組（P＜0.05）。試驗組細菌數量為2.0～12.7個/支，組內個體間細菌數量差異顯著；樣本4的細菌數量顯著高于其他組（P＜0.05）。

試驗結果表明，公牛沖洗包皮與否，組內個體間細菌數量均存在較大差異。

2.2 春季采集精液中細菌數量變化（見表2）

表2 春季采集精液中細菌數量變化Tab.2 Changes in the number of bacteria in semen collected in spring 單位：個/支

由表2 可知，對照組細菌數量為0.3～3.3 個/支，組內個體間細菌數量差異不顯著（P＞0.05）。試驗組細菌數量為2.0～8.3 個/支，組內個體間細菌數量差異顯著（P＜0.05）；樣本1、3細菌數量顯著低于其他組（P＜0.05）。

2.3 不同季節種公牛包皮沖洗與否對精液中細菌數量的

影響（見表3）

由表3可知，不同季節采精，對照組與試驗組細菌數量均無顯著差異（P＞0.05）。試驗組平均細菌數量大于對照組，即不沖洗包皮采集精液中細菌數量多于沖洗包皮，但兩組的細菌數量均低于國家標準要求。

表3 不同季節種公牛包皮沖洗與否對精液中細菌數量的影響Tab.3 Influence of washing foreskin of bulls in different seasons on the number of bacteria in semen 單位：個/支

3 討論

公牛包皮內含大量細菌，采精時對公牛包皮沖洗與否可影響細菌的混入程度。本試驗結果表明，種公牛采精前包皮沖洗與否對精液中細菌數量無顯著影響，與康年登等[8]、郝愛玲等[9]研究結果不一致。組內個體間差異極顯著，但同一頭牛不同批次間差異不大，原因可能是不同的牛其包皮、陰筒、牛體衛生等條件不同，而同一頭牛不同批次間在正常情況下其衛生條件是相對穩定的，此結果與陸漢希[10]研究結論一致。試驗組與對照組比較無顯著差異，說明公牛包皮內衛生環境相對穩定，與包皮是否沖洗無顯著影響。公牛沖洗包皮與否，應根據氣候環境、牛體衛生、個體健康等情況考慮[11]。在氣候適宜的春、秋季節（夏季炎熱季節停采），公牛主要在室外活動，在保證環境衛生和牛體衛生的情況下，不必沖洗所有公牛包皮；在氣候寒冷的冬季，公牛大部分時間在舍內飼養，通風條件差，空氣濕度大、有害氣多，牛體衛生不便清潔，包皮和陰毛附著糞尿易滋生細菌，此時對公牛包皮的清洗至關重要。

自然交配時細菌可在公牛和母牛之間傳播，人工采集精液也不可能完全避免細菌污染。國家要求每頭牛每季度至少做一次凍精質量檢測，細菌數是主要檢查項目之一。通過凍精質量檢測報告，可動態監測精液中細菌數變化情況；精液中細菌數量顯著增多、接近800個時，應考慮沖洗公牛包皮。遼寧省牧經種牛繁育中心日常檢測結果中，2/3 的樣品細菌數為0，可能與稀釋液中加入過多抗生素有關；極個別樣品中細菌數超過800 個/支，原因為采精過程中公牛陰莖觸及不潔臺牛后軀，與公牛是否沖洗包皮無關。除非存在特別污染問題，一般情況下不必對所有精液樣品作細菌培養，每隔4～6 個月隨機抽取20～30 個精液樣品作細菌檢查是適宜的做法，不僅保證精液質量，還能夠發現公牛是否患病，改進采精技術，改善衛生條件。

公牛衛生狀況好，精液污染的風險也隨之降低。因此，應保持日常的環境與牛體衛生。牛舍保持清潔干燥；堅持每天刷拭牛體，夏季結合水刷，冬季干刷。定期修剪公牛陰毛，長度以1.5～2.0 cm 為宜。若部分公牛包皮容易藏垢，則每次采精時必須沖洗干凈。采精前保持采精場所衛生，地面灑水降塵，清潔公牛和臺牛體表的浮塵、污物，尤其對公牛下腹部、臺牛臀部進行清洗，刷刨，達到全身被毛無污染、無灰土，保證牛群處于最佳采精的狀態。為需要沖洗包皮種公牛沖洗時，噴嘴不應直接接觸陰毛和包皮，更不可將噴嘴伸入包皮內，引起公牛包皮炎癥。無沖洗條件或清洗達不到要求的養殖場，則不提倡沖洗包皮；若沖洗不干凈反而會破壞包皮屏障功效，造成污染[12]。

4 結論

試驗僅對公牛一個月內不沖洗包皮采集的精液中細菌數變化進行研究，但更長時間的情況還需進一步試驗驗證。本次試驗選擇14頭公牛，檢驗樣本84頭份，精液中所含細菌數均遠低于國家標準要求的800 個/支。試驗結果表明，在保證環境衛生和牛體衛生的條件下，種公牛采精前沖洗包皮與否對精液中細菌數無顯著影響。除非特殊需要，采精前不必為每頭公牛沖洗包皮，操作不當可能增加傳播疾病的風險。