艾滋病患者結核桿菌感染與其免疫功能及HIV載量的關系

王新霞 吳曉美 童涌

[摘要] 目的 探討艾滋病（AIDS）患者結核桿菌感染與其免疫功能及艾滋病病毒（HIV）載量的關系。方法 選取2018年6月至2020年1月浙江大學醫學院附屬湖州醫院 湖州市中心醫院感染科收治的78例AIDS患者作為研究對象，所有患者入院后均完成首段尿、靜脈血等樣本采集，采用培養法和PCR法檢測結核桿菌。根據患者是否發生感染分為觀察組（n=38）和對照組（n=40）。采用流式細胞儀測定兩組CD4+免疫功能水平;采用病毒載量分析儀測定兩組HIV載量;對AIDS結核桿菌感染與患者免疫功能及HIV載量進行相關性分析，分析AIDS患者的結核桿菌感染類型及構成比、兩組AIDS患者結核桿菌感染下CD4+T細胞水平、細胞因子水平、HIV載量，并完成結核桿菌感染與其免疫功能及HIV載量關系分析。結果 38例伴有結核桿菌感染AIDS患者，排在前兩位的分別為肺結核和頸淋巴結核，分別占36.84%和28.95%;觀察組結核桿菌感染患者CD4+T細胞中<50 mm3、50～199 mm3病例數高于對照組非感染者（P<0.05）;200～349 mm3、≥350 mm3病例數低于對照組非感染者（P<0.05）;觀察組HIV載量中<1000 copy/ml、1000～4999 copy/ml病例數低于對照組（P<0.05）;≥10 000 copy/ml病例數高于對照組（P<0.001）;相關性分析結果表明，AIDS患者結核桿菌感染率與患者免疫功能CD4+T水平呈負相關（P<0.05）;與HIV載量呈正相關（P<0.05）。結論 結核桿菌感染能影響AIDS患者免疫功能，且與HIV載量存在相關性，積極采取有效的措施能提高機體免疫，對降低結核桿菌感染率具有重要的意義。

[關鍵詞] 艾滋病;結核桿菌感染;免疫功能;艾滋病病毒;相關性分析

[中圖分類號] R512.9? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2022）06-0008-04

[Abstract] Objective To investigate the relationship between mycobacterium tuberculosis infection and the immune function and human immunodeficiency virus （HIV） load in patients with acquired immunodeficiency syndrome （AIDS）. Methods A total of 78 AIDS patients in the department of infectious diseases of Huzhou Hospital Affiliated to Zhejiang University School of Medicine， Huzhou Central Hospital from June 2018 to January 2020 were selected as the subjects. After admission， the first-void urine， venous blood sample and other samples were collected from all patients， and the mycobacterium tuberculosis was detected by culture method and polymerase chain reaction （PCR） method. The patients were divided into the observation group （n=38） and the control group （n=40） according to whether infection occurred or not. The levels of CD4+ immune function in both groups were measured by flow cytometer， and the HIV load in both groups was measured by viral load analyzer. Correlation analysis of AIDS Mycobacterium tuberculosis infection with immune function and HIV load in patients， and the type and composition ratio of mycobacterium tuberculosis infection in AIDS， the level of CD4+ T cells under mycobacterium tuberculosis infection in AIDS in both groups， the cytokine level， and HIV load were also analyzed. In addition， the analysis of the relationships between mycobacterium tuberculosis infection and the immune function and HIV load were completed. Results In 38 AIDS patients with mycobacterium tuberculosis infection， the top two were pulmonary tuberculosis and cervical lymphatic tuberculosis， accounting for 36.84% and 28.95%， respectively. The number of cases with CD4+ T-cell count <50 mm3 and 50-199 mm3 in patients with mycobacterium tuberculosis infection in the observation group was higher than that in non-infected patients in the control group （P<0.05）. The number of cases with CD4+ T-cell count 200-349 mm3 and≥350 mm3 in patients with mycobacterium tuberculosis infection in the observation group was lower than that in non-infected patients in the control group （P<0.05）. The number of cases with HIV load < 1000 copy/ml and （1000-4999） copy/ml in the observation group was lower than that in the control group（P<0.05）. The number of cases with HIV load ≥10 000 copy/ml in the observation group was higher than that in the control group （P<0.05）. The results of SPSS Pearson correlation analysis showed that the rate of mycobacterium tuberculosis infection in AIDS was negatively correlated with the CD4+T level of patients immune function （P<0.05）， and positively correlated with HIV load （P<0.05）. Conclusion Mycobacterium tuberculosis infection in AIDS can affect the immune function of patients， and there is a correlation with HIV load， so it is important to actively take effective measures to improve the immunity of the body to reduce the rate of mycobacterium tuberculosis infection.

[Key words] Acquired immunodeficiency syndrome; Mycobacterium tuberculosis infection; Immune function; Human immunodeficiency virus; Correlation analysis

艾滋病（acquired immune deficiency syndrome， AIDS）是一種危害性相對較大的傳染病，是因感染艾滋病病毒（human immunodeficiency virus， HIV）引起[1]。既往研究表明[2]，HIV屬于是一種能攻擊人體免疫系統的病毒，能將人體免疫系統中重要的CD4+淋巴細胞作為主要的攻擊目標，從而引起人體免疫功能喪失。AIDS患者免疫水平相對較低，機會接觸后感染率和發生率較高，且有感染、發病和康復過程緩慢特點[3]。同時，AIDS患者屬于特殊的群體，容易對患者心理產生影響，增加臨床防治難度。結核桿菌最早由德國細菌學家1882年首次分離獲得，該菌能侵犯人體全身系統，但是亦引起肺結核多見[4-5]。對于AIDS患者由于機體免疫水平較低，當機體感染結核桿菌后，將會增加結核病發生率。國內學者研究表明[6]，AIDS患者多以免疫為基礎發揮重要作用，能提高具有免疫活性的細胞因子，但臨床對于結核桿菌感染與免疫功能、HIV載量的關系研究較少。因此，本研究以AIDS患者為對象，探討AIDS結核桿菌感染與患者免疫功能及HIV載量的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年6月至2020年1月浙江大學醫學院附屬湖州醫院 湖州市中心醫院感染科AIDS患者78例作為研究對象，根據患者是否發生結核菌感染分為觀察組和對照組。觀察組38例，年齡19～62歲，平均（47.98±5.61）歲;病程1～6年，平均（3.06±0.43）年;性傳播28例，血液傳播6例，其他4例。同期住院的無結核桿菌感染的AIDS患者共40例作為非感染組，年齡20～63歲，平均（48.11±5.65）歲;病程1～7年，平均（3.11±0.44）年;性傳播32例，血液傳播6例，其他2例。納入標準：①符合AIDS診斷標準者[7];②完成結核桿菌檢測者;③完成HIV載量測定及T淋巴細胞水平測定者。排除標準：①合并精神異常、凝血功能異常或器質性疾病者;②合并其他感染性疾病、自身免疫系統疾病或異位妊娠者;③合并急性闌尾炎、卵巢黃體囊腫破裂或伴有彌漫性腹膜炎者。本研究獲得醫院倫理委員會批準，患者/家屬均簽署同意書。

1.2 方法

1.2.1 標本采集? 所有患者入院后均完成結核桿菌檢測;同時，患者入院后次日早晨取空腹全血2～3 ml，并將其放置在EDTA-K3抗凝管中，4 h內送實驗室，完成免疫功能、HIV載量測定[8]。

1.2.2 結核桿菌檢測? ①涂片及培養法。對入組患者均完成清晨痰液的采集，標本獲取后對痰液給予離心沉淀法進行處理干預。由于結核桿菌的密度高于痰液，給予高速離心沉淀法收集分枝桿菌樣本，集菌后取一部分進行涂片;結核桿菌具有抗酸染色特點，進行涂片染色鏡檢，有助于提高鏡檢陽性率。涂片觀察后剩余的結核桿菌用于分離培養，取2 ml的菌液放置在無菌試管中，分別按順序加入酚紅指示劑、氫氧化鈉后搖晃均勻，15 min水浴，溫度37℃，采用硫酸中和到中性后，離心、取沉淀物，接種培養[9];②PCR法檢測。采用PCR法測定結核桿菌水平，具體方法如下：將標本從-20℃冰箱中取出，充分振蕩混合標本，5 min離心，速度15 000 r/pm，血清分離后去除上清，并加入裂解液30 ul，充分振蕩混勻后置入55℃下完成1 h水浴，再置入95℃下5 min保溫。離心1 min，速度10 000 r/pm，獲得PCR擴增用模板液，在提取膜與PCR反應過程中設置陽性與陰性對照。采用實時熒光定量PCR方法測定不同標本中結核桿菌水平，設置PCR參數：30℃ 10 min;42℃ 30 min;99℃ 5 min;5℃ 5 min，連續進行35個循環，72℃ 10 min延長，獲得最終產物并放入1.5%瓊脂凝膠電泳，β-actin為內對照（引物由海貝博生物公司提供）[10]。

1.2.3 免疫功能及HIV載量測定? ①免疫功能測定。取上述分離的血清標本，并將其放置在20～25℃冰箱中完成8 h檢測，采用流式細胞儀測定兩組CD4+免疫功能水平，儀器購自于美國BD Becton Dickinson公司，儀器型號：BD FACS Cali bur GH0156，試劑盒購自于武漢安特捷生物技術公司;根據測定結果（CD4+T細胞計數）分為<50 mm3、50～199 mm3、200～349 mm3、≥350 mm3[11];②HIV載量測定。取上述抽取的全血，在6 h內進行10 min離心，速度3 000 r/pm，血清分離后放置在-80℃冰箱中，備用。采用病毒載量分析儀測定兩組HIV載量，儀器購自于德國西門子公司，型號：Versant 440 Molecular system公司。根據HIV載量測定結果分為<1000、1000～4999、5000～9999、≥10 000 copy/ml四個階段[12]。

1.3 觀察指標及評價標準

1.3.1 感染部位? 記錄AIDS患者結核桿菌感染部位。

1.3.2 CD4+T細胞水平? 記錄觀察組與對照組結核桿菌感染下CD4+T細胞水平。

1.3.3 細胞因子水平? 記錄觀察組與對照組細胞因子IFN-γ及IL-4、TNF-α、IL-6及IL-10水平。

1.3.4 HIV載量? 記錄觀察組與對照組AIDS結核桿菌感染下HIV載量情況。

1.3.5 相關性分析? 對AIDS患者結核桿菌感染與其免疫功能及HIV載量進行相關性分析。

1.4統計學方法

采用SPSS 18.0統計學軟件對數據進行分析，計量資料采用均數±標準差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗，計數資料采用[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 AIDS結核桿菌感染部位及構成比

38例患者伴有結核桿菌感染，排在前兩位的分別為肺結核和頸淋巴結核，分別占36.84%和28.95%，見圖1。

2.2 AIDS患者結核桿菌感染下CD4+T細胞水平比較

觀察組結核桿菌感染患者CD4+T細胞中<50 mm3、50～199 mm3病例數高于對照組非感染者（P<0.05）;200～349mm3、≥350 mm3病例數低于對照組非感染者（P<0.05）。見表1。

2.3 AIDS患者結核桿菌感染與細胞因子水平比較

觀察組IFN-γ及IL-4高于對照組（P<0.05）;觀察組TNF-α、IL-6及IL-10與對照組比較，差異無統計學意義（P>0.05）。見表2。

2.4 AIDS患者結核桿菌感染下HIV載量比較

觀察組與對照組HIV載量中5000～9999 copy/ml病例數差異無統計意義（P>0.05）;觀察組HIV載量中<1000 copy/ml、1000～4999 copy/ml病例數低于對照組（P<0.05）;≥10 000 copy/ml病例數高于對照組（P<0.001）。見表3。

2.5 AIDS患者結核桿菌感染與患者免疫功能及HIV載量相關性

相關性分析結果表明，AIDS患者結核桿菌感染率與其免疫功能CD4+T水平呈負相關（r=-0.784，P<0.001）;與HIV載量呈正相關（r=0.813，P<0.001）。

3 討論

對于早期感染HIV患者具有較長的無癥狀潛伏期，且任何一種傳染性病原體通過刺激免疫系統均能加劇病情的發展，可降低機體免疫水平，增加結核桿菌感染率。國內學者研究表明[13]，結核桿菌感染病程相對較長，且持續的感染能引起特異性體液免疫與細胞免疫。本研究中，38例結核桿菌感染的艾滋病患者中，排在前兩位的分別為肺結核和頸淋巴結核，分別占36.84%和28.95%;觀察組結核桿菌感染患者CD4+T細胞中<50 mm3、50～199 mm3病例數高于對照組非感染者（P<0.05）;200～349 mm3、≥350 mm3病例數低于對照組非感染者（P<0.05），說明AIDS患者結核桿菌感染后CD4+T細胞水平較低，能引起機體免疫功能下降，增加病原體感染率。國內學者研究表明，AIDS患者感染結核桿菌感染的原因相對較多，其機制亦相對復雜，可能與機體免疫水平低下等有關，再加上發病后營養水平較低等引起免疫逃逸。機體穩定性受到的影響因素較多，而免疫平衡是其重要保證。CD4+T細胞計數是判斷HIV感染患者病情發展的重要指標，隨著病情的不斷發展，機體免疫系統將會受到破壞，進一步造成免疫功能下降，增加結核桿菌感染發生率。國內學者研究表明[14]，AIDS患者結核桿菌感染受到的影響因素較多，如年齡、體質、營養及性別，不同因素均會造成CD4+T細胞計數減少，引起Th1/Th2細胞因子失衡，感染結核桿菌患者的外周血IL-4、IFN-γ的水平明顯高于未感染結核桿菌的患者，提示結核桿菌與HIV共感染的狀態會對Th1/Th2型細胞因子的動態穩定產生影響[15]。因此，積極采取有效的措施提高機體免疫，對降低結核桿菌感染率具有重要的意義[16]。

AIDS主要與HIV病毒感染有關，且患者病情的發展多與HIV病毒量存在緊密的聯系[17]。HIV病毒量較高的患者，對于機體免疫系統的作用較大，患者病情越嚴重，能引起機體免疫平衡發生漂移，從而能加劇病情的發生、發展[18]。國內虛證研究表明[19]，當Th1狀態占據優勢時，則會增強機體細胞免疫，提高患者抗病毒能力;而當Th2占據優勢時，將會增加HIV的易感性，導致HIV病毒量呈比例增加。因此，HIV病毒載量能反映患者的病情嚴重程度，且病毒載量越大，病情越嚴重，對于機體CD4+T細胞水平的影響越大，結核桿菌感染率越高[20]。本研究中，觀察組HIV載量中<1 000 copy/ml、（1000～4999）copy/ml病例數低于對照組（P<0.05）;≥10 000 copy/ml病例數高于對照組（P<0.05），說明AIDS結核桿菌感染率與病毒載量存在緊密的聯系，且伴有結核桿菌感染患者病毒載量較高。為了進一步分析AIDS結核桿菌感染與免疫功能和HIV病毒載量的關系，本研究中對其關系進行相關性分析，結果表明，AIDS結核桿菌感染率與患者免疫功能CD4+T水平呈負相關（P<0.05）;與HIV載量呈正相關（P<0.05），說明AIDS結核桿菌感染與HIV載量和免疫功能存在緊密聯系，應加強患者基礎疾病治療，增強機體免疫力，降低HIV載量，降低結核桿菌感染率。

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