REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223聯合檢測對胃癌的診斷價值

黃文靜 陳克河

流行病學調查顯示，在消化道的惡性腫瘤中，胃癌發病率占消化道惡性腫瘤的40%～50%[1]。隨著人們日常生活節奏以及生活方式的改變，胃癌患者呈現年輕化趨勢[2]。目前，在世界范圍內，胃癌患者的發病率在惡性腫瘤中居于第二位，死亡率高達23.2%，居于惡性腫瘤死亡率的首位[3]。在對胃癌的診斷過程中，目前所已知的腫瘤標志物的診斷特異度不高，診斷效能低下。再生因子4(REG Ⅳ)主要在患者的近端胃腸道表達，在腫瘤組織以及炎性細胞中異常表達，同時參與了患者的腫瘤細胞的浸潤以及轉移[4]。氧調節蛋白(ORP150)是內質網較為重要的內質網對肽類物質，有研究報道顯示[5]，患者的ORP150水平與胃癌的發生發展具有顯著的相關性。微小核酸物質miRNA-223對于患者的腫瘤細胞的增殖以及浸潤具有顯著的抑制性作用[6]，本研究通過分析REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223聯合檢測對胃癌的診斷價值，為臨床治療提供科學依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以我院2018年1月至2020年3月收治的126例胃癌患者作為研究對象，其中男性59例，女性67例，年齡平均為(65.44±5.31)歲，平均體重指數(24.15±1.33)kg/m2，病變部位：胃底賁門26例、胃體50例、胃竇50例，分化程度：低分化39例、中分化32例、高分化55例，TNM分期：Ⅰ期患者34例、Ⅱ期患者35例、Ⅲ期患者38例、Ⅳ期患者19例。另選我院同期體檢正常者126例作為對照組。2組一般資料之間的差異不存在統計學意義，見表1。所有患者均知情同意，并經倫理委員會論證。

表1 2組患者的基礎資料比較

胃癌患者納入標準：①所有患者均符合胃癌診斷標準[7]，②所有患者的病理分期為Ⅰ～Ⅳ期；③在本次研究前，所有患者均未開展放化療以及手術治療；④患者的預期生存時間在3個月以上。排除標準：①嚴重的肝腎功能障礙患者；②合并其他腫瘤疾病患者；③消化道穿孔以及嚴重營養不良患者。

1.2 檢測方法

所有研究對象入組后，采集肘靜脈血液4 ml，3500 r/min離心15 min，采用酶聯免疫法對患者的REG Ⅳ、ORP150水平進行檢測，檢驗試劑由上海羅氏提供，操作流程嚴格按照說明書進行。miR-223通過實時熒光定量PCR檢測表達水平。使用Trizol試劑按試劑盒說明書從患者的血細胞中提取總RNA，勻漿后依次加入trizol、氯仿、異丙醇及75%乙醇抽提樣本總RNA，獲取RNA后使用逆轉錄試劑盒中RNA保存液溶解，于-20℃保存。向總RNA中先后加入去除gDNA的DNA eraser及逆轉錄酶，按說明書配置成20 μl的體系，在37℃的條件下行RT-PCR 15 min，在85℃的條件下維持15 s后終止。以逆轉錄得到的cDNA作為模板進行qPCR反應。以GAPDH的表達量作為內參。

1.3 分析方法

1.3.1 2組REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平比較 分別對觀察組以及對照組的REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平進行比較。

1.3.2 不同分期以及分化程度胃癌患者的REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平比較 分別對不同TNM分期以及不同分化程度患者的REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平比較。

1.3.3 相關性分析 采用spearman相關性分析對患者的REG Ⅳ、ORP150、miRNA-223水平與患者的分化程度以及TNM分期情況的相關性進行分析。

1.3.4 聯合檢測的ROC曲線分析 分別對REG Ⅳ、ORP150、miRNA-223單獨及聯合檢測的診斷效能進行分析。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 2組REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平比較

觀察組REG Ⅳ、ORP150水平顯著高于對照組，miRNA-223水平顯著低于對照組，差異存在統計學意義(P<0.05)，詳見表2。

表2 2組REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平比較

2.2 不同TNM分期患者的REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平比較

Ⅰ～Ⅱ期患者的REG Ⅳ、ORP150水平顯著低于Ⅲ～Ⅳ期，miRNA-223水平顯著高于Ⅲ～Ⅳ期患者，差異均存在統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 不同TNM分期患者的REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平比較

2.3 不同分化程度患者的REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平比較

不同分化程度患者的REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平之間的差異之間的差異存在統計學意義(P<0.05)，經過兩兩比較，隨著腫瘤的分化程度的進展，患者的REG Ⅳ、ORP150水平顯著升高，miRNA-223水平顯著降低，見表4。

表4 不同分化程度患者的REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平比較

2.4 相關性分析

通過相關性分析，胃癌的進展(分化程度、TNM分期)與REG Ⅳ、ORP150呈現正相關，與miRNA-223呈現負相關，差異存在統計學意義(P<0.05)，見表5。

表5 相關性分析

2.5 胃癌聯合檢測的ROC曲線分析

REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平聯合檢測對胃癌的診斷靈敏度顯著高于單獨檢測。通過ROC曲線分析，對于胃癌的診斷而言，患者的REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平的臨界值分別為6.11 ng/mL，10.52 ng/mL以及4.77 fmoL/L，見表6以及圖1。

圖1 胃癌聯合檢測的ROC曲線分析

表6 胃癌聯合檢測分析

3 討論

胃癌是臨床常見的消化道腫瘤疾病之一，有研究報道指出[8]，隨著生活方式的不斷變化，胃癌的發生率呈現逐年上升趨勢，同時，胃癌患者病死率較高。在臨床治療中，由于消化道腫瘤通常較為隱匿，當患者被確診為胃癌時，多數已經發展為中晚期，嚴重影響患者的生命安全以及生命質量[9]。所以，在臨床上，早期對患者的疾病進行診斷，早期開展干預性治療，對于患者的預后具有積極的意義。

本研究中，觀察組患者的REG Ⅳ、ORP150顯著高于對照組，miRNA-223水平顯著低于對照組，且隨著胃癌患者的疾病分化程度進展以及TNM分期的升高，患者的REG Ⅳ、ORP150水平顯著升高，miRNA-223水平顯著降低。分析認為，ORP150主要在患者的腫瘤細胞中呈現較高的表達，有研究報道指出[10]，患者的ORP150與患者的腫瘤細胞的凋亡顯著相關，在腫瘤細胞的無序生長過程中，患者的局部組織處于缺糖、酸中毒以及嚴重的缺氧狀態，通過對患者的CHOP的顯著性表達調控，進而影響患者的內質網的正常折疊作用，進一步造成局部組織的癌變[11]。彭浩等[12]通過對胃癌患者的ORP150表達水平的分析發現，隨著患者的疾病進展，患者的ORP150顯著升高，與本研究相互印證。在對患者的診斷過程中，REG Ⅳ主要在患者的胃腸道以及胰腺組織中進行分泌性蛋白，在患者的REG Ⅳ的表達過程中，其顯著的表達產物可以顯著促進患者的細胞的增殖，進一步加劇患者的胃癌的進展，在對患者的胃癌的REG Ⅳ表達中，29.4%的胃癌患者可表現為顯著的REG Ⅳ陽性[13]。但是僅僅依靠REGⅣ對胃癌進行診斷尚缺乏準確性。黃容旺等通過對胃癌患者的REG Ⅳ水平的分析發現，隨著患者的胃癌的進展，患者的REG Ⅳ顯著升高，與本研究相互印證[14]。

最近的研究發現，微小核酸物質在胃癌患者的進展中發揮重要作用。有研究報道指出，微小核酸物質主要存在于真核細胞中，大量的研究證實，血液中的miRNA-223可作為患者的腫瘤標志物，在胃癌的疾病進展中，miRNA-223主要通過對患者的FBXW7hCdc4的顯著性抑制性作用，進而對腫瘤細胞的進展發揮作用。王靜等通過對胃癌患者的miRNA-223水平分析發現，隨著患者的疾病進展，患者的miRNA-223水平顯著降低，與本研究相互印證[15]。

另外，通過對患者的ROC曲線分析，對于胃癌患者的診斷而言，患者的REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223水平的臨界值分別為6.11 ng/mL，10.52 ng/mL以及4.77 fmoL/L，以上數值可作為臨床診斷胃癌的重要依據，同時在對患者的治療中，以上數據可作為患者治療效果評價的重要依據。

綜上所述，REG Ⅳ、ORP150與miRNA-223聯合檢測對胃癌的診斷具有重要意義。