VEGF-C、TGF-β1、PD-L1在舌鱗狀細胞癌中的表達及意義

王鐘華，楊永超，安 峰

據統計，我國口腔頜面部惡性腫瘤占全身腫瘤的8.2%，而舌鱗狀細胞癌為口腔頜面部惡性腫瘤最常見的一種類型，且惡性程度較高，具有高轉移率、高復發(fā)率、低生存率等特點[1-2]。目前，有關舌鱗狀細胞癌的發(fā)病機制尚未明確，隨著對該疾病研究的不斷深入，較多研究指出生物學指標在該病中起重要作用[3]。

血管內皮細胞生長因子-C(VEGF-C)在促進新生淋巴管內皮細胞的增殖和遷移方面發(fā)揮關鍵作用[4]；轉化生長因子-β1(TGF-β1)可促進腫瘤及周邊毛細血管增殖并釋放[5]；程序性死亡分子-1配體(PD-L1)能誘導T細胞凋亡，并參與T細胞活化的過程，起到正性調控作用[6]。但關于VEGF-C、TGF-β1、PD-L1在舌鱗狀細胞癌中的相關研究甚少。本研究就VEGF-C、TGF-β1、PD-L1在舌鱗狀細胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用及意義進行探討。現報告如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選擇2019年7月—2020年5月我院收治的舌鱗狀細胞癌118例，手術留取舌鱗狀細胞癌組織及癌旁組織。納入標準：經病理檢查、實驗室檢查及影像學檢查證實[7]；術前未進行放、化療者；皆自愿參與本研究，并簽署同意書。排除標準：存在其他惡性腫瘤者；存在肝腎等重要器官嚴重病變者；精神疾病者；存在免疫功能障礙者；影像資料及臨床資料缺失者。男65例，女53例；年齡37～78(56.78±4.33)歲；根據國際抗癌聯盟2002年口腔癌TNM分期標準[8]：Ⅰ期18例，Ⅱ期42例，Ⅲ期37例，Ⅵ期21例；組織學分化程度：高分化58例，中分化42例，低分化18例。

1.2方法 所有標本于手術切除后立即予以10%甲醛固定，常規(guī)石蠟切片、脫水，枸櫞酸鹽緩沖液中熱引導15 min抗原修復，3%過氧化氫溶液-甲醇室溫10 min，再用10%正常山羊血清10 min室溫封閉。加一抗(50 μl)工作液4 ℃放置過夜。第2天加二抗20 min室溫孵育，再加辣根酶標記的SP 30 min室溫孵育，用DNA顯色劑顯色，采用蘇木精復染，中性樹膠封固，鏡下觀察。VEGF-C、TGF-β1、PD-L1(SP免疫組織化學染色)檢測過程嚴格按照說明進行。

1.3判斷標準 陽性標準：根據陽性細胞百分比及染色情況判定。染色情況判定：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。陽性細胞所占百分比<5%為0分，5%～25%為1分，25%～50%為2分，50%～75%為3分，≥75%為4分。總積分：上述2項評分的乘積。陰性為≤3分，陽性為≥4分[9]。

1.4觀察指標 對比2組VEGF-C、TGF-β1、PD-L1表達情況；分析VEGF-C、TGF-β1、PD-L1表達與舌鱗狀細胞癌患者年齡、性別、腫瘤直徑、組織學分化程度等病理特征的關系；對患者進行為期1年隨訪，記錄患者的預后情況，分析影響舌鱗狀細胞癌患者預后死亡的因素。

2 結果

2.1VEGF-C、TGF-β1、PD-L1表達情況 癌組織VEGF-C、TGF-β1、PD-L1陽性表達率均高于癌旁組織(P<0.01)。見表1。

表1 舌鱗狀細胞癌及癌旁組織VEGF-C、TGF-β1、PD-L1的表達情況[例(%)]

2.2VEGF-C、TGF-β1、PD-L1表達與舌鱗狀細胞癌患者病理特征的關系 VEGF-C、PD-L1陽性表達患者組織分化程度低、TNM分期高、淋巴結轉移概率大(P<0.05，P<0.01)；TGF-β1表達陽性的患者TNM分期高、淋巴結轉移概率大(P<0.05，P<0.01)。見表2。

表2 VEGF-C、TGF-β1、PD-L1陽性表達與舌鱗狀細胞癌患者病理特征的關系(例)

2.3影響舌鱗狀細胞癌患者預后的單因素分析 術后1年隨訪發(fā)現，舌鱗狀細胞癌患者死亡28例(23.73%)。單因素分析結果顯示，組織學分化程度、淋巴結轉移、VEGF-C、TGF-β1、PD-L1為舌鱗狀細胞癌患者預后的影響因素(P<0.05)。

2.4舌鱗狀細胞癌患者預后影響因素的多因素Logistic回歸分析 非條件多因素 Logistic回歸分析顯示，組織分化程度(低中分化)、淋巴結轉移及VEGF-C、TGF-β1、PD-L1陽性是舌鱗狀細胞癌患者預后的影響因素(P<0.05,P<0.01)。見表3。

表3 舌鱗狀細胞癌患者預后影響因素的多因素Logistic回歸分析

3 討論

近年來臨床雖對舌鱗狀細胞癌的治療取得一定成效，但生存率并未明顯提升[10]。相關研究指出，早期發(fā)現、阻斷舌鱗狀細胞癌的發(fā)生、發(fā)展與侵襲轉移是預防和治療該疾病的關鍵[11]。由于腫瘤發(fā)生、發(fā)展是由多種因子、途徑共同實現的，因此，尋找可識別舌鱗狀細胞癌發(fā)生、發(fā)展有關的特異性標志物至關重要[12]。

VEGF-C為近些年發(fā)現的一類可介導淋巴結轉移和腫瘤淋巴管生成的因子，可通過對原有淋巴管內皮細胞間的細胞分泌方式進行調節(jié)，以推動原有淋巴管的增生，并與新生淋巴管相互吻合，從而生成淋巴管網，以使腫瘤細胞通過其進入淋巴管，影響患者預后[13]。已有多項研究表明，VEGF-C與卵巢癌、胰腺癌及乳腺癌等多種惡性疾病的淋巴結轉移、預后有密切的相關性[14-15]。本研究結果發(fā)現，與癌旁組織相比，癌組織VEGF-C陽性表達率增高，且VEGF-C陽性表達與舌鱗狀細胞癌組織分化程度、TNM分期及淋巴結轉移相關，與CHAMSEDDIN等[16]研究結果相符，提示VEGF-C陽性表達可能在舌鱗狀細胞癌發(fā)生、發(fā)展和轉移過程中起重要作用。

TGF-β1可通過多條信號通路對腫瘤的發(fā)展轉歸發(fā)揮重要作用[17]。據報道，在TGF-β1通路中任一環(huán)節(jié)出現改變，皆會引起信號轉導通路的異常，而這一途徑細胞間的組分失活會引起細胞對TGF-β誘導的生長抑制和凋亡信號失調，導致細胞生長失控，誘發(fā)癌變[18]。HODGSON等[19]研究表明，TGF-β1在惡性腫瘤組織中常存在異常表達狀態(tài)。本研究結果顯示，癌組織TGF-β1陽性表達率高于癌旁組織，且與舌鱗狀細胞癌TNM分期、淋巴結轉移有關，說明TGF-β1可能參與了惡性腫瘤的發(fā)生、侵襲與轉移。

相關研究顯示，PD-L1可通過促進生成調節(jié)性T細胞，以達到抑制體內抗腫瘤免疫反應的效果，從而發(fā)揮促進腫瘤的免疫逃逸作用[20]。DUNCAN等[21]研究指出，PD-L1可促使上皮細胞間質化的過度發(fā)生，以促進腫瘤轉移與生長。本研究結果發(fā)現，與癌旁組織相比，癌組織PD-L1陽性率增高，且與舌鱗狀細胞癌的組織分化程度、TNM分期及淋巴結轉移有關；因此，推測PD-L1在舌鱗狀細胞癌發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用。此外，非條件多因素Logistic回歸分析顯示，VEGF-C、TGF-β1、PD-L1陽性表達是舌鱗狀細胞癌患者預后的獨立危險因素，提示VEGF-C、TGF-β1、PD-L1在評估患者預后中具有重要的價值。

綜上所述，VEGF-C、TGF-β1、PD-L1在舌鱗狀細胞癌中表達異常，并與舌鱗狀細胞癌發(fā)生、發(fā)展有關，臨床上可通過檢測三者的表達來評估患者的病情進展及預后。