肺結核患者外周血T淋巴細胞CTLA4、TIM-3表達及臨床意義

張莎娜 黃成靜 李旭 胥俊越 趙亞虹 李弈

結核病是一種由結核分枝桿菌引起的慢性傳染病，可發生于多種臟器，嚴重威脅人類健康，其中以肺部結核感染最常見[1]。中國作為全球肺結核(pulmonary tuberculosis，PTB)高負擔國家之一，在2018年新發病例和死亡數均位居第二位，已成為中國突出的公共衛生問題之一[2]。因此，對PTB的發病機理及防治工作進行研究十分必要。細胞毒性T淋巴細胞相關抗原4(cytotoxic T lymphocyte antigen-4，CTLA4)是一種CD28家族受體，通過與B細胞激活抗原7(B cell activating antigen 7，B7)分子結合抑制T細胞增殖[3-4]。研究發現，CTLA4在鑒別診斷活動性結核與潛伏性結核感染患者上具有較高的敏感度和特異度[5]。T細胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(T cell immunoglobulin domain and mucin domain protein-3，TIM-3)是一種由淋巴細胞亞型輔助性T細胞1(Helper T cell 1，Th1)、Th17以及自然殺傷細胞表達的I型跨膜蛋白[6]。代嬌等人[7]發現，活動性PTB患者血清TIM-3及外周血單個核細胞中TIM-3 mRNA水平均高于潛伏期PTB及健康體檢者[7]。因此，本研究通過檢測PTB患者外周血T淋巴細胞CTLA4、TIM-3水平，探究其對PTB患者的診斷價值，以期為臨床診斷和防治PTB提高參考。

資料與方法

一、一般資料

選取2018年1月～2020年1月在全院各科室收治的PTB患者78例作為研究對象(試驗組)，均為痰涂片抗酸染色查結核菌陽性或痰結核菌培養陽性者，其中男50例，女28例，年齡25～65歲，平均年齡(51.17±7.35)歲。另選取同期在本院進行體檢的健康者80例作為對照組，男54例，女26例，年齡28～64歲，平均年齡(48.86±7.62)歲。兩組受試者性別、年齡比較差異無統計學意義(χ2=0.203, t=1.939,P>0.05)。

試驗組納入標準：①所有患者均符合中華醫學會結核分會制定的《肺結核診斷和治療指南》診斷標準[8]；②患者年齡≥18歲；③自愿參加本試驗；④均為初治菌陽PTB患者，且臨床上未經正規抗結核藥物化療、沒有長期服用免疫類藥物；⑤有完整的臨床資料；⑥均無耐藥。排除標準：①嚴重的精神障礙或人類免疫缺陷病毒感染等；②本身患有心、肝、腎或造血系統等嚴重疾病；③有系統性免疫缺陷癥(系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎等)的患者；④入院24 h內死亡或出院的患者；⑤既往患有PTB等疾病；⑥近期使用過免疫抑制劑治療的患者；⑦妊娠期或哺乳期患者。對照組納入標準：①體檢健康者；②受試者年齡≥18歲；③臨床資料完整；排除標準同試驗組。本研究經本院道德倫理委員會批準通過，所有樣品采集均取得患者及家屬知情同意并簽字，符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》。

二、主要試劑和儀器

三、研究方法

1 樣本采集與保存 受試者入院后使用真空EDTA管采集外周全血8 mL，3000 rpm/min離心15 min，取出上層血漿。向剩余樣本中加入PBS 3 mL，混勻。取5～6 mL淋巴細胞分離液注入15 mL離心管，然后用滴管將混勻血樣貼壁、緩慢注射淋巴細胞分離液中，3000 rpm/min離心15 min。取出離心管中呈乳白色的液體，加入3 mL PBS，混勻，3000 rpm/min離心15 min；重復一次。棄上清，加入1 mL PBS混勻，分別分裝成200 μL細胞混懸液至流式管中。

四、統計學方法

結 果

一、一般資料比較

表1 一般資料比較

二、兩組間外周血T淋巴細胞CTLA4、TIM-3表達水平比較

與對照組相比，試驗組外周血T淋巴細胞CTLA4、TIM-3表達水平均升高(P<0.05)(見圖1，表2)。

圖1 兩組間外周血T淋巴細胞CTLA4、TIM-3表達水平比較

表2 兩組間外周血T淋巴細胞CTLA4、TIM-3表達水平比較

三、二元Logistic回歸分析菌陽PTB存在的影響因素

以是否存在菌陽PTB為因變量，以受試者外周血T淋巴細胞CTLA4、TIM-3表達水平為自變量，進行二元Logistic回歸分析，結果顯示，外周血T淋巴細胞CTLA4、TIM-3表達水平偏高與菌陽PTB的存在相關(P<0.05)(見表3)。

表3 二元Logistic回歸分析菌陽PTB存在的影響因素

四、ROC分析外周血T淋巴細胞CTLA4、TIM-3表達水平對PTB的診斷價值

ROC分析結果顯示，外周血T淋巴細胞CTLA4診斷發生PTB的曲線下面積(Area under the curve，AUC)為0.825(95%CI：0.753～0.897)，截斷值為0.595%，敏感度為82.10%，特異度為85.00%。外周血T淋巴細胞TIM-3診斷發生PTB的AUC為0.837(95%CI：0.770～0.904)，截斷值為33.326%，敏感度為82.16%，特異度為81.20%。聯合檢測診斷發生PTB的AUC為0.883(95%CI：0.823～0.943)，敏感度為88.50%，特異度為90.00%(見圖2)。

圖2 ROC分析外周血T淋巴細胞CTLA4、TIM-3表達水平對PTB的診斷價值

討 論

綜上所述，PTB患者外周血T淋巴細胞CTLA4、TIM-3水平均升高，對PTB的發生具有一定診斷價值，可能作為潛在的診斷PTB的生物標志物。本研究未設立菌陰PTB患者作為觀察組進行比較，外周血T淋巴細胞CTLA4、TIM-3水平與PTB的關系有待進一步探究。