超高效液相色譜-串聯質譜法測定雞肉中磺胺甲基嘧啶殘留量方法優化

李啟卉 孫鈺瑩 錢琪

摘 要：本文通過超高效液相色譜-串聯質譜法，采用電噴霧電離及質譜多反應監測模式，在不同碰撞能量下測定雞肉中磺胺甲基嘧啶殘留量。結果表明，雞肉中磺胺甲基嘧啶殘留量在碰撞能量為15 V下，具有良好的線性關系，定量限為1.0 μg·kg-1，加標回收率在93.3%～99.1%。

關鍵詞：碰撞能量；磺胺甲基嘧啶；超高效液相色譜-串聯質譜法

Optimization of the Method for the Determination of Sulfamethazine Residues in Chicken by UHPLC-MS/MS

LI Qihui， SUN Yuying， QIAN Qi

（National Light Industry Food Quality Supervision and Testing Nanjing Station， Nanjing 211816， China）

Abstract： In this paper， the residues of sulfamethazine in chicken were determined by ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry in ESI+ and MRM modes at different collision energies. The results showed that the residues of sulfamethazine in chicken had a good linear relationship under the collision energy of 15 V， the limit of quantification was 1.0 μg·kg-1， and the recovery rate of standard addition was?93.3%～99.1%.

Keywords： collision energy; sulfamethazine; ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry

磺胺類藥物是目前被廣泛應用于畜禽抗感染治療的重要藥物之一，具有高效、毒性低、便于使用等特點，可預防和治療一些動物疾病，以促進動物的生長。但若在飼養畜禽過程中不合理使用磺胺類藥物，會導致藥物在畜禽體內殘留，進而對人體產生一定的危害[1-2]。

超高效液相色譜-串聯質譜法具有高特異性、良好的檢測靈敏度和分析速度快的特點[3]。碰撞反應池的工作原理是產物離子通過向移動的母離子施加額外能量，使母離子與反應池中的惰性氣體分子發生碰撞，導致母離子碎裂。因此，形成的產物離子數與碰撞能量大小密切相關。碰撞能量越小，碎片越多，離子越少，形成的產物離子越少；碰撞能量越大，更多的母離子被碎片化，但并非所有的子離子都會更多。由于碰撞能量不同，母離子會碎裂成不同的子離子，碰撞能量越高，碎片離子越多，使其分裂成其他質量數較低的產物離子。設置MRM使用模式獲取方法時，需要設置一個最優的碰撞能量，使碰撞池中質量數為265的母離子在裂解后形成質量數為156和172的子離子數量最多。本文通過改變碰撞能量，采用超高效液相色譜-串聯質譜法對雞肉中磺胺甲基嘧啶殘留量進行快速測定。

1 材料與方法

1.1 試劑與材料

乙腈（色譜級）；甲酸（色譜級）；乙腈（默克）；超純水（北京普析-GWA-UN1-F40）；磺胺甲基嘧啶標準品（壇墨公司）。

1.2 儀器

Waters Xevo TQ-S cronos超高效液相色譜-串聯質譜儀（沃特世公司）；離心機（上海安亭-GL-20G-Ⅱ）；BSA124S-CW 電子天平[賽多利斯科學儀器（北京）有限公司]；渦旋儀（其林貝爾儀器-Vortex QL-861）；BFAA-DC24-RT加熱氮吹儀（上海安譜實驗科技股份有限公司）；移液器（艾本德中國有限公司）。

1.3 標準溶液制備

準確吸取100 μL磺胺甲基嘧啶標準品溶液于10 mL容量瓶中，用甲醇配制成濃度為1 μg·mL-1的標準中間液。準確吸取標準中間液10 μL、50 μL、100 μL、200 μL、500 μL、1 000 μL和2 000 μL于10 mL容量瓶中，用含0.1%甲酸的乙腈溶液稀釋至刻度，配制成濃度為1 ng·mL-1、5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1和200 ng·mL-1的系列標準工作溶液。

1.4 樣品前處理

稱取5 g搗碎的樣品于50 mL離心管中，加入10 mL乙腈，渦旋3 min，10 000 r·min-1離心3 min。取全部上清液至25 mL容量瓶中，加入10 mL乙腈，重復提取，合并上清液，用乙腈定容至刻度。取5 mL上清液，氮吹近干，用2 mL 0.1%酸化乙腈復溶，過0.22 μm濾膜。

1.5 儀器條件

液相條件：ACQUITY UPLC? HSS T3色譜柱；柱溫40 ℃；梯度洗脫程序如表1所示。

質譜條件：電噴霧正電離、多反應監測模式；毛細管電壓0.5 kV；脫溶劑溫度500 ℃；脫溶劑氣流量800 L·h-1；錐孔氣流量150 L·h-1；錐孔電壓30 V。

2 結果與分析

2.1 色譜柱的確定

HSS T3色譜柱為親水性化合物保留專用柱，不僅可增強待測物的保留能力，還可與LC-MS兼容，可耐受100%水相流動相，分離重現性較好。T3是采用三官能團鍵合技術，低配基密度C18烷基鏈鍵合和專利的封端技術，T3對C18色譜柱的穩定性有了更好的提升。

2.2 液相條件的確定

乙腈為非質子溶劑、強洗脫劑，低粘度，截止波長為190 nm。在正離子電噴霧液相色譜-質譜聯用分析流動相中添加甲酸，可使溶液中的分析物質離子化，產生更強的電噴霧信號。流動相使用梯度洗脫能增加峰容量，可增強待測物的分離效果，且能縮小峰型，增強分離能力，更有效地縮短分析時間。

2.3 質譜條件的確定

電噴霧電離是液體從導電毛細管噴出，毛細管加高電壓，從而產生帶電液滴的噴霧，液滴蒸發、分裂直至離子蒸發稱氣相離子。正離子噴霧是電噴霧液滴從毛細管出來時帶正電荷，為了平衡正電流，毛細管也生成了電子，由靠近毛細管壁表面的負離子發生電化學氧化，產生電子，電噴霧可被理解成電化學過程。由圖1可知，碰撞能量在15 V下，磺胺甲基嘧啶物質的響應最高，峰面積最大。

2.4 方法線性范圍及定量限

當雞肉樣品量為5 g、最終定容體積為10 mL時，根據定量限為10倍信噪比，從而確定本方法中磺胺甲基嘧啶的定量限為1.0 μg·kg-1。制作好系列標準曲線后，按此方法進行測定，以濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標繪制標準工作曲線，線性圖譜如圖2所示。結果表明，磺胺甲基嘧啶在濃度1～200 ng·mL-1，與峰面積有較好的線性關系，相關系數R2＞0.99。

2.5 方法加標回收率

選擇3個陰性雞肉樣品，添加70 μg·kg-1的磺胺甲基嘧啶標準物，按照本實驗前處理方法進行實驗。通過改變碰撞能量測定樣品中磺胺甲基嘧啶的含量。磺胺類藥物的回收率如表2所示。

當碰撞能量為5 V時，回收率為70.5%～75.0%；當碰撞能量為15 V時，回收率為93.3%～99.1%；當碰撞能量為40 V時，回收率為77.9%～79.2%；當碰撞能量為50 V時，回收率為81.7%～84.9%。由此可得出，在其他條件不變時，不同碰撞能量下，樣品回收率也不同，在碰撞能量為15 V時，回收率最好。

3 結論

本實驗通過改變質譜條件，運用超高效液相色譜-串聯質譜法分析雞肉中磺胺甲基嘧啶殘留量。結果表明，雞肉中磺胺甲基嘧啶在1～200 ng·mL-1線性良好，定量限為1.0 μg·kg-1。通過改變碰撞能量，得出雞肉樣品在碰撞能量為15 V時，回收率最好，為93.3%～99.1%。由此可得出，在其他條件不變時，當碰撞能量為15 V時，雞肉中磺胺甲基嘧啶響應最好。本方法前處理較為簡單，定量限較低，適用于雞肉中磺胺甲基嘧啶殘留量的快速測定[4-5]。

參考文獻

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[2]孫亞奇，郭京超，潘源虎，等.磺胺類藥物代謝與殘留消除以及檢測方法研究進展[J].中國獸藥雜志，2019，53（2）：66-75.

[3]WEI X Y，TAO J H，CUI X，et al.Comparative pharmacokinetics of six major bioactive components in normal and type 2 diabetic rats after oral administration of Sanhuang Xiexin Decoction extracts by UPLC-TQ MS/MS[J].Journal of Chromatography B，2017，1061-1062：248-255.

[4]劉正富，馬之攀，向飛，等.QuEChERS-超高效液相色譜-串聯質譜法測定動物源性食品中23種磺胺類藥物殘留量[J].中國標準化，2022（8）：261-264.

[5]錢詩穎，藍雅瓊，劉倩，等.響應面優化超高效液相色譜-串聯質譜法同時測定有機肥中14種磺胺類抗生素[J].華東理工大學學報（自然科學版），2021，47（2）：209-216.