雙歧桿菌活菌輔助治療對慢性腹瀉患兒腸屏障功能、炎性因子及細胞免疫的影響

方秋月，文多花，付玲

(桂林市婦幼保健院，1.兒科；2.產科，廣西 桂林 541000；3.湖南省婦幼保健院兒科，湖南 長沙 410005)

小兒慢性腹瀉主要是因細菌、真菌、病毒、寄生蟲感染所致的一種消化道疾病，以腹痛、嘔吐、發熱、大便次數增加及形狀改變為主要特征，好發于嬰幼兒，一旦治療不及時可引發脫水、電解質紊亂等，給患兒的生長發育及免疫功能造成嚴重影響[1-2]。目前臨床治療小兒慢性腹瀉主要通過調整飲食結構、改善腸道內環境、保護腸道黏膜來緩解腹瀉癥狀。蒙脫石散作為一種胃腸道保護劑，可有效預防病原因子入侵消化道，但對于部分病情較為嚴重的患兒治療效果常不理想[3]。雙歧桿菌活菌屬于一種腸道微生態制劑，可有效糾正失調的腸道菌群，修復免疫機制，重建腸道天然生物屏障，在小兒慢性腹瀉治療中具有獨特優勢[4]。目前雙歧桿菌活菌輔助治療小兒腹瀉的臨床研究已屢見不鮮，但在聯合用藥作用機制對腸屏障功能及免疫功能方面的報道較少。本研究旨在探討雙歧桿菌活菌輔助治療對慢性腹瀉患兒腸屏障功能、炎性因子及細胞免疫的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年10月至2021年10月桂林市婦幼保健院收治的94例慢性腹瀉患兒為研究對象，根據治療方式不同分為研究組和對照組，每組各47例。本研究經院倫理委員會審核批準，患兒家長充分知情后自愿簽訂同意書。兩組患兒年齡、性別、病程、腹瀉次數、腹瀉原因、脫水程度及腹瀉類型等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。納入標準：(1)所有患兒均符合《諸福堂實用兒科學)》中的診斷標準[5]；(2)經臨床檢查為細菌或病毒感染及消化不良等原因所致的非感染性腹瀉；(3)年齡1～5歲；(4)腹瀉>4次/d。排除標準：(1)急性感染性腹瀉；(2)合并重大系統性疾病；(3)嚴重肝腎功能障礙；(4)造血系統疾病；(5)免疫缺陷性疾病；(6)胃腸道畸形；(7)重度營養不良，重度脫水；(8)過敏體質；(9)治療依從性差及資料不全者。

表1 兩組患兒一般資料比較

1.2 方法

所有患兒入院后均完成血常規、病原菌等常規檢查，同時給予補液、糾正水電解質紊亂、退熱、營養支持等，感染性腹瀉者將0.08～0.1 g/kg頭孢西丁(深圳信立泰藥業股份有限公司)采用0.9%生理鹽水150 mL稀釋后靜脈滴注進行抗感染治療，連續治療4～5 d。對照組患兒在此基礎上口服蒙脫石散(北京萬輝雙鶴藥業有限責任公司)治療，1～2歲1.0 g/次，2～3歲1.5 g/次，>3歲2.0 g/次；3次/d。研究組患兒在對照組的基礎上口服雙歧桿菌三聯活菌散(上海信誼藥廠有限公司)治療，給藥劑量及次數與對照組相同。兩組患兒療程均為7 d。

1.3 觀察指標

(1)臨床療效[6]：顯效為腹瀉相關癥狀完全消除，大便次數及性狀恢復正常；有效為腹瀉相關癥狀顯著緩解，大便次數明顯減少，性狀基本恢復；無效為腹瀉相關癥狀、大便次數及性狀均無明顯改善。總有效率=(顯效例數+有效例數) /總例數×100%。(2)腸屏障功能： 治療前及治療結束前1 d囑患者持續空腹>8 h，分別采集次日晨起外周靜脈血5 mL，3 000 rpm離心10 min，采用分光光度法測定二胺氧化酶、D-乳酸及內毒素水平；采集患兒新鮮糞便1 g，稀釋、勻漿后于培養基上接種、培養，采用API20E型菌群檢測系統使用活菌平板計數法測定乳酸菌、雙歧桿菌及球菌數量。(3)炎性因子水平：按照(2)的方法收集分離出的血清，將10 μL血清+150 μL的氨基乙酸緩沖液+150 μL的0.2%w/v免疫復合物制成乳膠顆粒超敏化C反應蛋白抗體液，選擇PA120特定蛋白儀(深圳市錦瑞電子有限公司)及CRP配套試劑盒(貨號：32-65432)根據說明采用速率散射比濁法測C反應蛋白(CRP)水平；將50 μL血清樣本加入樣板條空中，在37 ℃恒溫箱中培養1 h，在對照孔內加入酶標記物，混勻震蕩，37 ℃恒溫箱中培養0.5 h，洗板后在對照組空中加50 μL底物緩沖液混勻震蕩，室溫下培養0.5 h，最后在樣板孔中加50 μL終止液混勻后使用酶標儀讀數。利用酶聯免疫吸附法測定 IL-6(貨號：69-87588)、IL-10(貨號：69-32166)、TNF-α(貨號:69-88631)、IFN-γ(貨號：69-89573)水平[7]。所有試劑盒均購自由武漢默沙克生物科技有限公司。(4)檢測免疫指標水平：按照(2)的方法收集分離出的血清，采用免疫比濁法測定免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)水平，利用免疫熒光標記法檢測CD4+/CD8+水平[8]。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 兩組患兒臨床療效比較

研究組患兒治療總有效率高于對照組，差異有統計學意義(χ2=5.045,P=0.025)。見表2。

表2 兩組患兒臨床療效比較[n(%)]

2.2 兩組患兒腸屏障功能指標水平比較

治療前，兩組患兒各腸屏障功能指標水平無顯著差異(P>0.05)。治療后，兩組患兒二胺氧化酶、D-乳酸、內毒素及腸球菌水平均降低，且觀察組低于對照組(P<0.05)；乳桿菌與雙歧桿菌均升高，且觀察組高于對照組(P<0.05)。見表3。

表3 兩組患兒腸屏障功能指標水平比較

2.3 兩組患兒炎性因子水平比較

治療前，兩組患者各炎性細胞因子水平比較，無顯著差異(P>0.05)。治療后，兩組患兒IL-6、CRP及TNF-α水平均降低(P<0.05)，且觀察組低于對照組(P<0.05)；IFN-γ及IL-10水平升高(P<0.05)，且觀察組高于對照組(P<0.05)。見表4。

表4 兩組患兒炎性因子水平比較

2.4 兩組患兒免疫指標水平比較

治療前，兩組患兒IgM、IgA、IgG及CD4+/CD8+免疫指標水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)。治療后，兩組患兒上述免疫指標水平均升高，且觀察組高于對照組(P<0.05)。見表5。

表5 兩組患兒免疫指標水平比較

3 討論

兒童腸道屏障功能較弱，消化系統及免疫系統尚不健全，當遭受病原體侵襲時則易破壞腸道內微循環，使菌群失調而誘發腹瀉[9]。針對小兒腹瀉臨床上常給予補液、糾正水電解質紊亂、退熱、抗病毒、止瀉等常規治療，但治療周期較長，且無法改善腸道內環境。

腸道微生態紊亂則會誘發局部炎癥反應，破壞腸道黏膜屏障功能，當腸黏膜通透性異常時則會導致腸道細菌產生大量D-乳酸并由門靜脈進入血液循環，另外當腸粘膜上皮細胞受損則會促進二胺氧化酶合成及釋放并進入血液，當腸道菌群是挑食還可導致腸道內致病菌大量增殖而釋放內毒素，進一步破壞腸道黏膜屏障[10]。IL-6、TNF-α及CRP均為促炎因子，其水平與炎性反應程度呈正相關[11]。IL-10為抗炎因子，可抑制促炎因子的產生及釋放。IFN-γ屬于一種抗炎因子，具有抗病毒、抗腫瘤及免疫調控的作用。當腸黏膜損傷后則會促進局部大量炎性促炎因子的釋放，引發炎性反應[12]。

蒙脫石散是治療小兒腹瀉的首選藥物，口服后可快速分布與消化道黏膜，同時通過靜電作用吸附致病菌及其毒素，并與消化道黏液糖蛋白結合來修復及增強腸黏膜屏障，且不影響腸胃的正常蠕動[13]。雙歧桿菌三聯活菌散則可有效補充腸道缺失的生理菌群，糾正菌群紊亂，恢復腸道內微環境穩態，同時在腸道黏膜表現形成生物屏障，地址病原體的繼續入侵，修復受損的腸黏膜組織，抑制炎性反應，從而恢復腸道固有的健康狀態，與蒙脫石散聯用具有協同增效的作用[14]。

本研究結果表明，研究組患兒治療總有效率較對照組高(P<0.05)，原因可能為蒙脫石散進入機體后可降低腸道所吸收的毒素，增強腸道屏障功能，輔助雙歧桿菌三聯活菌散則可促進腸道內菌群平衡的恢復，腸道易于吸收，恢復腸道固有的健康狀態，從而緩解腹瀉癥狀。治療后，研究組患兒二胺氧化酶、D-乳酸、內毒素及腸球菌水平低于對照組(P<0.05)，乳桿菌與雙歧桿菌水平高于對照組(P<0.05)。當患兒腸道遭受病原微生物侵襲時則可引發炎性反應，從而損傷腸道上皮細胞，使腸道菌群紊亂，內毒素、二胺氧化酶、D-乳酸水平持續升高，進而引起腸道黏膜屏障功能損傷，這進一步闡明了蒙脫石散可降低腸道所吸收的毒素，增強腸道屏障功能的作用機制，而雙歧桿菌活菌通過增加腸道有益菌菌落數量、糾正腸道菌群的失調而抑制腸道內有害細菌，保護腸道黏膜上皮功能，與蒙脫石散聯合應用可協同性的抑制消化道內病毒及細菌產生的毒素，控制病情進展。治療前兩組患兒各炎性細胞因子水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)；治療后，研究組患者IL-6、CRP及TNF-α水平低于對照組(P<0.05)，IFN-γ及IL-10水平高于對照組(P<0.05)，原因可能為炎性細胞因子的高表達是導致腸黏膜損傷的重要因素，雙歧桿菌活菌可通過修復受損的腸黏膜、破壞病原體的生長環境而抑制炎性反應的發生，同時憑借其黏膜作用可拮抗病原體侵襲，促進抗炎因子的釋放，抑制內毒素的釋放而誘發炎性反應，有效避免炎性反應擴大而加重腸黏膜損傷，有利于臨床癥狀的改善。另外，治療后研究組患者各免疫指標水平高于對照組(P<0.05)，原因可能為雙歧桿菌活菌可通過分解腸道內容物產生促進腸道蠕動的代謝物質，增強腸道的屏障功能，從而對機體發揮免疫調節作用，同時可促進年末局部及免疫功能發育，定制與胃腸道內部促進各類細胞因子抗體的產生而發揮免疫調節作用，蒙脫石散具有緩解免疫功能紊亂的作用，與雙歧桿菌活菌聯合應用時可發揮協同增效的作用。

綜上所述，雙歧桿菌活菌輔助治療可有效抑制炎癥反應，提高腸屏障功能及免疫功能，療效確切，對促進腹瀉患兒病情康復有重要意義。