豬病診斷和防治中PCR技術(shù)的應用研究

范文萍

摘要 生豬規(guī)模化、集約化養(yǎng)殖發(fā)展背景下，豬病呈現(xiàn)出高發(fā)趨勢，輕則影響生豬健康生長發(fā)育，重則導致死亡，因此積極做好豬病診治工作尤為重要。豬病診斷與防治中，PCR 技術(shù)發(fā)揮著重要作用，能夠顯著提升豬病診治效率與準確性，為豬病防治工作的開展提供便利與幫助。基于此，本文首先概述了 PCR 技術(shù);其次分析了豬病診斷與防治中 PCR 技術(shù)的具體應用;最后探討了 PCR 技術(shù)在豬病診斷與防治中的應用發(fā)展。

關(guān)鍵詞 生豬;疫病;診斷;PCR 技術(shù);應用

生豬養(yǎng)殖規(guī)模、數(shù)量持續(xù)增加的背景下，豬病種類越來越多， 混合感染病例增加，這極大的提升了豬病診斷與防治難度。PCR（聚合酶鏈式反應）技術(shù)屬于分子診斷技術(shù)，其具備特異性、敏感度高、方便快捷的優(yōu)勢，因而非常適用于豬病診斷與防治中。

1 PCR 技術(shù)概述

PCR 技術(shù)也被稱為基因擴增技術(shù)，該技術(shù)的出現(xiàn)是生物學研究的巨大突破。PCR 技術(shù)的優(yōu)勢在于擴增速度快、特異性高、操作簡 便，在較短時間內(nèi)能夠快速擴增目的基因，并檢測微量目的基因。現(xiàn)階段，隨著 PCR 技術(shù)快速發(fā)展與進步，傳統(tǒng) PCR 技術(shù)得到了進一步 的創(chuàng)新，多重 PCR 技術(shù)、RT-PCR 技術(shù)、熒光定量 PCR 技術(shù)應運而 生，在生豬疫病診斷及防治工作中，發(fā)揮著不可替代的作用[1]。

2 豬病診斷與防治中 PCR 技術(shù)的具體應用探討

2.1 應用于豬 2 型圓環(huán)病毒檢測中

豬 2 型圓環(huán)病毒是目前已知的最小的動物病毒，該病毒主要 包括兩個血清，分別是 PCV1 和 PCV2。兩者相比較而言，PCV1屬于不致病性病毒，而 PCV2 則屬于致病性病毒，因此在臨床上主 要以 2 型圓環(huán)病毒為主，該類病毒最易于感染剛斷奶的仔豬，病豬表現(xiàn)生長發(fā)育遲緩、消瘦、不愿進食、精神狀態(tài)不佳等癥狀，嚴重的 會引發(fā)多器官衰竭，致死率較高，即使治愈病豬生長發(fā)育受限。臨 床上，感染 2 型圓環(huán)病毒的生豬，其臨床癥狀較為綜合，這極大的增加了診斷難度，并且該病毒經(jīng)常以亞臨床感染的形式出現(xiàn)，常易 被忽視。為提高豬 2 型圓環(huán)病毒病診斷有效性和準確性，要重視對 PCR 技術(shù)的應用，通過建立熒光定量 PCR 檢測法，其性能更加理 想，能夠特異檢測 PCV1 和 PCV2 兩種類型病毒，并且不會和其他 病毒產(chǎn)生交叉反應，其靈敏度更高，因而被廣泛應用于豬圓環(huán)病毒診治中，同時也為防治工作的開展提供重要的依據(jù)。

2.2 應用于豬瘟病毒檢測中

近年來，豬瘟發(fā)病率逐年升高，對生豬養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展造成了巨大 的危害，養(yǎng)殖場戶經(jīng)濟損失嚴重，影響生豬養(yǎng)殖積極性。雖然做好 防疫工作能夠有效降低發(fā)病率，但豬瘟病仍時有發(fā)生。臨床上，豬 瘟病和豬丹毒、豬肺疫以及豬副傷寒等多種疾病臨床癥狀相似，易 于被誤診，延誤救治時機，如何提升豬瘟病毒的臨床診斷效果成為 思考的關(guān)鍵問題。應用 RT-PCR 檢測技術(shù)，能夠?qū)崿F(xiàn)對豬瘟病毒的快速有效檢測。在過去的一段時間里，豬瘟病毒檢測主要以免疫血清學方法為主，該法不具備較高的可靠性，而 RT-PCR 檢測技術(shù)具備靈敏而且用途廣泛的優(yōu)勢，當前在豬瘟病毒檢測中發(fā)揮著不可 替代的作用，能夠分別擴增出豬瘟病毒的特異性核酸序列，從而實 現(xiàn)對多種相似病毒的有效區(qū)分，避免出現(xiàn)誤診等現(xiàn)象，便于及時展 開防治工作，降低死亡率[2]。

2.3 應用于豬繁殖障礙與呼吸綜合征檢測中

母豬養(yǎng)殖中，繁殖障礙與呼吸綜合征發(fā)病率較高，危害大，患 病母豬繁殖性能明顯下降，屢配不孕，或者極易流產(chǎn)、死胎，嚴重的則無法繁殖，這對于生豬養(yǎng)殖業(yè)穩(wěn)定發(fā)展是極為不利的。該病屬于 急性、高度傳染性疾病，如防治不及時，極易在短時間內(nèi)大面積傳 播擴散，因此積極做好診斷與防治工作尤為重要。豬繁殖障礙與呼吸綜合征診斷中，傳統(tǒng)檢測方法復雜、耗時長、準確性低，并且該病臨床癥狀和豬瘟較為相似，易于出現(xiàn)誤診的現(xiàn)象。將 PCR 技術(shù)應用于豬繁殖障礙與呼吸綜合征檢測中，利用反向式聚合酶鏈式反 應實施檢測，選取新鮮樣品進行電泳實驗，同時要保證樣品外形完整且具有三條 RNA，然后對 cDNA 進行提取、反轉(zhuǎn)錄，恒溫 -20℃ 1 周后即可出現(xiàn)降解反應，該法檢測效率高，準確性高，值得應用。

2.4 應用于豬病混合感染檢測中

近年來，病毒混合感染發(fā)病的幾率明顯升高，不僅診斷難度加 大，而且治療難度明顯升高。針對混合感染的病豬，傳統(tǒng)檢測技術(shù)或者單純依靠經(jīng)驗的檢測方法所存在的弊端日益突出，早已無法 滿足豬病檢測效率和質(zhì)量方面的需求，進而延誤豬病最佳診治時機，增加死亡率，造成巨大經(jīng)濟損失。將多重 PCR 技術(shù)應用于豬病混合感染檢測中，具備突出的優(yōu)勢，能夠同時檢測多種病毒，快速、 精準呈現(xiàn)檢測結(jié)果，及時展開后期的治療工作，有效降低病豬死亡 幾率，維護養(yǎng)殖場戶經(jīng)濟效益。如：臨床上豬瘟、附紅細胞體病以及鏈球菌病合并感染、豬繁殖障礙與呼吸綜合征和豬附紅細胞體病混合感染的病例較為常見，應用多重 RT-PCR 方法，檢測敏感度和 特異性遠遠高于傳統(tǒng)檢測方法，極大地提升了豬病混合感染的檢測有效性。

2.5 應用于豬口蹄疫檢測中

口蹄疫屬于烈性傳染性疾病，傳染性強，危害性大，嚴重危害生豬養(yǎng)殖業(yè)穩(wěn)定發(fā)展。應用 PCR 技術(shù)檢測豬口蹄疫病毒，結(jié)合聚合酶 3D 基因片段以保守區(qū)域方式實現(xiàn)探針以及引物的設計，在擴 增區(qū)內(nèi)口蹄疫病毒 A、C、O 型序列完全相同，同時應用探針和引物，建立熒光 PCR 方式，然后進行豬口蹄疫病毒檢測，能夠有效地 克服傳統(tǒng)檢測技術(shù)準確性差、敏感性差的問題，而且檢測效率較快，并不會造成環(huán)境污染等現(xiàn)象，因此在豬口蹄疫病毒中實現(xiàn)了廣 泛有效的應用。

2.6 應用于豬寄生蟲病檢測中

在豬寄生蟲病檢測中，PCR 技術(shù)也發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。應 用 PCR 技術(shù)時，能夠?qū)⒁恍《文康?DNA 迅速擴增至上百萬倍，進 而實現(xiàn)對單個蟲體、部分蟲體微量 DNA 的快速有效檢測。不僅如 此，應用 PCR 技術(shù)檢測寄生蟲病，其操作過程非常簡單方便，并不 需要分離鈍化病原，不會受到抗體和抗原持續(xù)存在的干擾與影響， 能夠直接實現(xiàn)對病原體 DNA 的檢測，同時亦可應用于鑒別蟲種和 株，提高豬寄生蟲病檢測準確性與有效性。當前，PCR 技術(shù)在豬弓 形蟲、毛圓線蟲等豬常見寄生蟲病的檢測中實現(xiàn)了良好應用。

3 PCR 技術(shù)在豬病診斷與防治中的應用發(fā)展探討

在接下來的時間里，PCR 技術(shù)在豬病診斷及防治中將會成為 有效的手段之一，應用多重 PCR 技術(shù)快速檢測診斷不同病原將成 為可能。目前，豬病檢測中 PCR 技術(shù)的應用呈現(xiàn)出諸多的缺陷，但隨著科技的不斷發(fā)展與創(chuàng)新，PCR 技術(shù)將會進一步完善，在豬病診斷中的應用將會起到更加突出的效果。新時期，PCR 技術(shù)將會朝著 自動化、微量化、標準化的方向發(fā)展，在豬病檢測研究中的應用將 會更加廣泛。

4 結(jié)語

綜上所述，近年來，豬病的頻頻發(fā)生，嚴重阻礙生長養(yǎng)殖業(yè)穩(wěn) 定發(fā)展。將 PCR 技術(shù)應用于豬病診斷中，有助于提升豬病診斷效 率和質(zhì)量，因此要重視對 PCR 技術(shù)的應用，充分發(fā)揮其優(yōu)勢，減少豬病誤診幾率，為豬病預防和治療工作的開展提供有利的參考，助 推生豬養(yǎng)殖業(yè)健康穩(wěn)定發(fā)展。

參考文獻：

[1] 王慶偉，王得明.豬病診斷和防治中 PCR 技術(shù)的應用研究[J].新農(nóng)業(yè)，2020（1）：52-53.

[2] 羅廷榮，莫揚，吳文德，等.RT-PCR 技術(shù)檢測豬瘟病毒的應用研究[J].中國預防獸醫(yī)學報，2017（4）：307.