HMGB1 在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義

時紅萍，劉洪敬，葛欣，黃姝，陳友山，時黎明

1.菏澤市立醫(yī)院腫瘤科，山東菏澤 274000；2.菏澤市立醫(yī)院檢驗科，山東菏澤 274000

非小細胞肺癌（NSCLC）是肺癌的主要類型，由于早期缺少典型的癥狀表現(xiàn)， 部分患者僅表現(xiàn)為咳嗽、胸部悶痛、低熱等癥狀，所以約75%的患者確診時已步入疾病的中晚期，生存時間較短[1-2]。 因此，盡早診斷與積極治療NSCLS 對于改善患者的預(yù)后具有至關(guān)重要的作用。 高遷移率族蛋白B1（HMGB1）是存在于真核生物細胞中的非組蛋白染色體結(jié)合蛋白，可以增強腫瘤抗原與樹突狀細胞的傳遞，促進腫瘤新生血管形成，減慢腫瘤細胞的凋亡速度[3]。一些研究發(fā)現(xiàn)，HMGB1 與腫瘤發(fā)生、發(fā)展及細胞浸潤、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[4-5]。 該研究通過回顧性分析2020年1月—2021年1月期間菏澤市立醫(yī)院97 例NSCLC 患者的臨床資料，探討HMGB1 在NSCLC 患者中的表達與臨床意義， 旨在為該病的診療方案提供可靠的參考與借鑒。 現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析菏澤市立醫(yī)院97 例NSCLC 患者的臨床資料，其中男58 例，女39 例；年齡42～79 歲，平均（60.54±7.52）歲；腫瘤直徑0.5～6.8 cm，平均（3.20±1.52）cm；組織學類型為鱗癌52 例，腺癌45 例；分化程度為低分化32 例，中分化35 例，高分化30 例；原發(fā)腫瘤局部-淋巴結(jié)-遠處轉(zhuǎn)移（TNM） 分期為Ⅰ期20 例，Ⅱ期27 例，Ⅲ期39 例，Ⅳ期11 例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移52 例，有血管浸潤53 例。納入標準：符合《中華醫(yī)學會肺癌臨床診療指南(2019 版)》[6]中對于NSCLC的診斷標準，且經(jīng)病理檢查證實；肺癌術(shù)中切除的肺癌組織與癌旁組織完整；首次診斷為NSCLC；預(yù)計生存期>3 個月。 排除標準：有放化療治療史；合并其他惡性腫瘤； 嚴重心腦血管疾病與其他器官功能性障礙；免疫系統(tǒng)與血液系統(tǒng)疾病；患有急性或慢性感染性疾病；資料不全。 此外，所有患者或其家屬對該次研究知情同意； 該次研究方案取得菏澤市立醫(yī)院倫理委員會的批準。

1.2 方法

選取患者術(shù)中切除的肺癌組織與癌旁組織，采用免疫組化法檢測HMGB1 的表達情況， 具體方法如下：①免疫組化。通過福爾馬林對患者的腫瘤組織進行固定，以梯度乙醇脫水，并在石蠟中包埋，蠟處理后形成連續(xù)切片。 選取切片，烘烤60 min 后由二甲苯Ⅰ、Ⅱ脫蠟，用100%、95%、80%、70%梯度酒精水化，再經(jīng)自來沖洗5 min，上述操作重復(fù)2 次。滴加3%醫(yī)用雙氧水，避光孵育10 min，由磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗3 次，30 min/次。 在枸櫞酸鈉緩沖液中浸泡， 以高壓鍋給予抗原熱修復(fù)。 封閉在山羊血清中15 min。 通過濾紙將血清吸除， 滴加已稀釋完的一抗，在4℃環(huán)境中過夜，室溫下放置60 min，經(jīng)PBS沖洗操作2 次，5 min/次，加入生物素化二抗，環(huán)境溫度37℃，反應(yīng)20 min，經(jīng)PBS 沖洗操作2 次，5 min/次，滴加辣根酶標記生物素試劑+鏈霉卵白素，在環(huán)境溫度37℃下靜置20 min，PBS 沖洗操作2 次，5 min/次。 二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，蘇木素溶液復(fù)染，時間為10 min， 予以酒精分化處理。 用80%、95%、100%、100%梯度酒精脫水，經(jīng)二甲苯Ⅰ、Ⅱ透明處理，適量加入中性樹膠，封片晾干。②評價結(jié)果。由兩名病理學專家進行結(jié)果評價， 以隨機方式在每個切片中選取8 個視野，400 倍高倍鏡下觀察，HMGB1通常在腫瘤細胞中著色為褐色細顆粒。 陽性細胞表達率[7]≥30%為陽性，<30%為陰性。

1.3 觀察指標

①比較NSCLC 患者肺癌組織與癌旁組織的HMGB1 表達情況與陽性率； ②分析NSCLC 患者肺癌組織中HMGB1 表達與臨床病理特征 （性別、年齡、腫瘤直徑、組織學類型、分化程度、TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、血管浸潤）的關(guān)系；③針對NSCLC 患者肺癌組織中HMGB1 陽性表達的臨床病理特征進行Logistic 回歸分析。

1.4 統(tǒng)計方法

采用SPSS 23.0 統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料采用[n(%)]表示，組間比較進行χ2檢驗，影響因素進行多因素Logistic 回歸分析，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 NSCLC 患者肺癌組織與癌旁組織的HMGB1表達情況對比

NSCLC 患者肺癌組織的HMGB1 陽性率高于癌旁組織陽性率，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001），見表1。

表1 NSCLC 患者肺癌組織與癌旁組織的HMGB1 表達情況對比[n（%）]

2.2 HMGB1 在肺癌組織與癌旁組織中的表達情況

HMGB1 主要在NSCLC 患者細胞的胞核與胞質(zhì)中表達，呈淡黃色或褐色，少量表達于癌旁細胞中，見圖1。

圖1 HMGB1 在肺癌組織與癌旁組織中的表達

2.3 NSCLC 患者肺癌組織中HMGB1 表達與臨床病理特征關(guān)系

該組NSCLC 患者中分化程度為低分化、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的HMGB1 陽性率顯著高于分化程度為中高分化、TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 不同性別、年齡、腫瘤直徑、組織學類型與血管浸潤患者的HMGB1 陽性率對比差異無統(tǒng)計學意義 （P＞0.05），見表2。

表2 NSCLC 患者肺癌組織中HMGB1 表達與臨床病理特征的關(guān)系[n（%）]

2.4 影響NSCLC 患者肺癌組織中HMGB1 陽性表達的臨床病理特征Logistic 回歸分析

經(jīng)多因素Logistic 回歸分析發(fā)現(xiàn)，分化程度為低分化、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響NSCLC 患者肺癌組織中HMGB1 陽性表達的獨立危險因素（P＜0.05），見表3。

表3 影響NSCLC 患者肺癌組織中HMGB1 陽性表達的臨床病理特征Logistic 回歸分析

3 討論

NSCLC 是肺癌的主要類型，約占所有肺癌患者的80%，包括大細胞癌、腺癌、鱗癌，其癌細胞較小細胞癌生長分裂更為緩慢[8-9]。 然而，早期NSCLC 缺少典型性，往往在出現(xiàn)浸潤、局部生長，壓迫組織引起特異性癥狀后才被發(fā)現(xiàn)， 此時多數(shù)患者已步入中晚期，失去了最佳治療機會[10]。 目前，生物學技術(shù)發(fā)展迅速，腫瘤分子標志物對于NSCLC 的診斷價值也得到了臨床的廣泛關(guān)注[11]。 探尋一種與NSCLC 相關(guān)的分子標志物，及時且準確診斷患者的病情，對于改善預(yù)后具有重要的意義。

HMGB1 是在哺乳動物細胞中廣泛分布的高度保守核蛋白， 同時也是高遷移率族蛋白家族中的重要成員，當細胞核中HMGB1 結(jié)合于DNA 后可以參與DNA 的修飾與轉(zhuǎn)錄， 而由單核-巨噬細胞、 粒細胞、 淋巴細胞等免疫細胞形成的HMGB1 能夠參與炎癥反應(yīng)[12]。 有研究發(fā)現(xiàn)，HMGB1 結(jié)合于特異性細胞膜受體后利于腫瘤細胞的浸潤、增殖與轉(zhuǎn)移[13]。 目前，臨床已發(fā)現(xiàn)HMGB1 在甲狀腺癌、結(jié)腸癌與前列腺癌組織中呈過表達現(xiàn)象[14]。 馮為[15]對90 例肺癌患者應(yīng)用免疫組化HMGB1 檢測， 發(fā)現(xiàn)肺癌組織HMGB1 陽性表達率63.33%顯著高于癌旁組織的30.00%（P＜0.05）。該文研究結(jié)果與上述結(jié)果相近，該組NSCLC 患者肺癌組織的HMGB1 陽性率（81.44%）高于癌旁組織陽性率 （25.77%）（P＜0.001）。 同時，HMGB1 主要在NSCLC 患者細胞的胞核與胞質(zhì)中表達，呈淡黃色或褐色，少量表達于癌旁細胞中。結(jié)果說明，HMGB1 在NSCLC 患者肺癌組織中呈高表達狀態(tài)，究其原因可能與NSCLC 細胞轉(zhuǎn)移與進展時血管生長迅速， 而在血管生長期間能夠與正常細胞產(chǎn)生營養(yǎng)競爭，正常細胞因缺少營養(yǎng)物質(zhì)而死亡，細胞死亡后被動分泌出HMGB1 有關(guān)，繼而導(dǎo)致肺癌組織內(nèi)HMGB1 明顯升高，而癌旁細胞中呈少量表達[16]。孔麗蕊等[17]對確診的81 例NSCLC 患者進行HMGB1檢測發(fā)現(xiàn)，TNM 臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中HMGB1 陽性率93.18%、89.80%高于Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的64.86%、31.25%。 該文研究發(fā)現(xiàn)，該組NSCLC 患者中分化程度為低分化、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的HMGB1 陽性率為93.75%、94.00%、96.15%，顯著高于分化程度為中高分化、TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期、 無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的75.38%、68.09%、64.44%（P＜0.05）。 同時， 經(jīng)多因素Logistic 回歸分析發(fā)現(xiàn)， 分化程度為低分化、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響NSCLC 患者肺癌組織中HMGB1 陽性表達的獨立危險因素（P＜0.05）。結(jié)果說明，HMGB1 與NSCLC 患者的病理特征及預(yù)后具有密切的相關(guān)性， 即患者病情越重，HMGB1 陽性率越高， 究其原因可能為HMGB1 可以提高組織纖溶原激活物活性，增強腫瘤細胞的侵襲能力，同時HMGB1 結(jié)合于相關(guān)配體糖基化終產(chǎn)物受體后進一步增強了細胞外基質(zhì)降解作用， 繼而促進腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移[18]。

綜上所述，HMGB1 在NSCLC 中呈高表達，在肺癌組織中的陽性表達與分化程度、TNM 分期、 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)，對于NSCLC 診斷與預(yù)后具有一定的指導(dǎo)意義。