蘭尼堿受體2在浸潤性乳腺癌組織中的表達及其臨床病理學意義

摘 要 目的：探討蘭尼堿受體2（ryanodine receptor 2， RyR2）在浸潤性乳腺癌組織中的表達及其臨床病理學意義。方法：使用聚合酶鏈式反應、蛋白質印跡、免疫組織化學染色等方法檢測RyR2在浸潤性乳腺癌患者乳腺癌、乳腺癌旁和正常乳腺組織樣本中的表達水平，并分析其與乳腺癌組織學分級、淋巴結轉移和超聲檢查特征間的關系。結果和結論：RyR2在浸潤性乳腺癌組織中的表達水平顯著低于乳腺癌旁和正常乳腺組織（均P<0.01），且其在浸潤性乳腺癌組織中的低表達與乳腺癌的組織學分級高、雌激素受體陰性、存在微鈣化和淋巴結轉移相關（均P<0.05）。結合超聲檢查和RyR2檢測結果能為浸潤性乳腺癌的診斷提供更準確的判讀結果。

關鍵詞 蘭尼堿受體2 浸潤性乳腺癌 超聲檢查

中圖分類號：R737.9； R446 文獻標志碼：A 文章編號：1006-1533（2022）07-0062-04

引用本文 李臘梅. 蘭尼堿受體2在浸潤性乳腺癌組織中的表達及其臨床病理學意義[J]. 上海醫藥， 2022， 43（7）： 62-65.

Expression of ryanodine receptor 2 in invasive breast cancer tissues and its clinicopathological significance

LI Lamei

（Department of Pathology， the Seventh People’s Hospital of Zhengzhou， Zhengzhou 450016， China）

ABSTRACT Objective： To investigate the expression of ryanodine receptor 2 （RyR2） in invasive breast cancer tissues and its clinicopathological significance. Methods： RyR2 expression levels in breast， adjacent and normal breast tissue samples from patients with invasive breast cancer were determined using polymerase chain reaction， Western blotting， and immunohistochemical staining and their relationship with breast cancer histological grade， lymph node metastasis and ultrasonographic features was analyzed. Results & Conclusion： The expression level of RyR2 in invasive breast cancer tissues was significantly lower than that in adjacent breast cancer tissues and normal breast tissues （all P<0.01）， and its low expression in invasive breast cancer tissues was associated with high histological grade of breast cancer， estrogen receptor negativity， microcalcification and lymph node metastasis （all P<0.05）. Combination of ultrasonography with RyR2 detection results can provide more accurate interpretation results for the diagnosis of invasive breast cancer.

KEy wORDS ryanodine receptor 2； invasive breast cancer； ultrasonography

乳腺癌是婦科常見腫瘤，嚴重威脅女性的健康和生命[1]。隨著現代醫學的發展，人們發現乳腺癌是多因素相互作用的結果，眾多分子標志物均有助于乳腺癌的診斷[2-3]。超聲檢查目前已普遍用于乳腺癌的早期篩查及診斷[4]，且通過觀察乳腺癌的超聲征象并結合腫瘤相關蛋白表達狀態可以預測乳腺癌患者的預后[5-6]。蘭尼堿受體2（ryanodine receptor 2， RyR2）與肺癌、肝癌、結腸癌等多種腫瘤的發生發展相關[7-8]，但其在乳腺癌組織中的表達和臨床意義還未見有研究報告。本研究擬通過分析RyR2在浸潤性乳腺癌組織中的表達及與患者腫瘤超聲征象、雌激素受體（estrogen receptor， ER）狀態等之間的相關性，為浸潤性乳腺癌的診斷提供新的更加精準的依據。

1 材料與方法

1.1 研究對象

收集2016年1月—2020年12月來我院就診并接受手術治療的浸潤性乳腺癌患者的腫瘤組織樣本為研究對象，共收集到147例患者的浸潤性乳腺癌組織樣本、41例患者的浸潤性乳腺癌旁組織樣本，同時收集到21例乳腺癌患者的腫瘤遠端正常乳腺組織樣本。所有患者均經術前檢查（包括超聲檢查）和術后免疫組織化學檢查確診為乳腺癌。所有患者均是首次接受手術治療。

本研究的目的和方法已事先告知患者本人及家屬，患者本人或其家屬簽署了知情同意書。本研究方案獲得我院醫學倫理委員會批準。

1.2 超聲檢查

對患者乳腺腫塊，使用西門子S3000和日立圖騰彩色多普勒超聲診斷系統進行超聲檢查，探頭頻率8 ～ 12 MHz。記錄患者乳腺腫塊的大小、縱橫比、邊界、形態、微鈣化、彩色血流、淋巴結轉移和后方回聲等數據。

1.3 免疫組織化學染色檢查

將以常規石蠟包埋的組織樣本切片，梯度洗脫，RyR2和ER抗體孵育，后續步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。根據染色反應的陽性強度判斷結果：陽性細胞數≤5%為0分，6% ～ 25%為1分，26% ～ 50%為2分，51% ～ 75%為3分，≥76%為4分。評分≥1分為RyR2陽性。

1.4 蛋白質印跡試驗

對患者組織樣本，嚴格按照試劑盒說明書提取組織蛋白，然后置冰上裂解30 min，低溫離心處理30 min，吸取上清液，得總蛋白。緊接著蛋白定量，加入上樣緩沖液，沸水煮5 min。進行蛋白電泳、轉膜，轉膜結束后用脫脂牛奶封閉，孵育一抗，冰箱4 ℃下過夜。次日清洗，孵育二抗，最后使用灰度掃描儀檢測有無RyR2表達。有表達為RyR2陽性。

1.5 反轉錄聚合酶鏈式反應（reverse transcriptionpolymerase chain reaction， RT-PCR）

對患者組織樣本，嚴格按照試劑盒說明書進行組織RNA提取、定量、反轉錄和聚合酶鏈式反應。引物序列：RyR2，前序列ATTTTTCTGDCGACACCCGAT，反向序列TCCCAGGTGTAGACCAA；甘油醛-3-磷酸脫氫酶，前序列ATTTTTGTACCACAATGC，反向序列TGACCGGTGTCCCTGACGAT。有表達為RyR2陽性。

1.6 統計學方法

對研究數據，使用SPSS 15.0軟件進計統計學處理，計量資料以均數±標準差表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用Fisher最小顯著差異檢驗；計數資料采用頻數和百分比表示，組間比較采用卡方檢驗。以P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 RyR2在不同乳腺組織中的表達

分別使用RT-PCR、免疫組織化學染色檢查和蛋白質印跡試驗檢測了RyR2在不同乳腺組織中的表達情況，結果顯示RyR2陽性率在147例患者的浸潤性乳腺癌組織樣本（腫瘤組）中為27.89%（41/147），在41例患者的浸潤性乳腺癌旁組織樣本（癌旁組）中為75.61%（31/41），在21例患者的正常乳腺組織樣本（對照組）中為76.19%（16/21），即RyR2在浸潤性乳腺癌組織中的表達水平顯著低于浸潤性乳腺癌旁組織和正常乳腺組織（圖1，均P<0.001）。

2.2 RyR2表達與浸潤性乳腺癌組織臨床病理學特征的關系

RyR2陽性率在浸潤性乳腺癌患者腫瘤組織樣本中為27.89%（41/147），其中在ER陽性患者中為35.19%（38/108），在ER陰性患者中為7.69%（3/39），差異顯著（χ2=10.769，P=0.001）；在組織學分級Ⅰ ～ Ⅱ級患者中為32.20%（38/118），在組織學分級Ⅲ級患者中為10.34%（3/29），差異顯著（χ2=5.530，P=0.019）；在腫瘤TNM分期Ⅰ期患者中為11.76%（4/34），在腫瘤TNM分期Ⅱ～ Ⅲ期患者中為32.74%（37/113），差異顯著（χ2=5.719，P=0.017）。

2.3 RyR2表達與浸潤性乳腺癌組織超聲征象的關系

分析RyR2表達與浸潤性乳腺癌組織超聲征象的關系發現，腫瘤組織的大小、形態、邊界、縱橫比、后方回聲衰減和彩色血流信號與RyR2表達均沒有相關性（均P>0.05），但在超聲檢查提示存在微鈣化或腋窩淋巴結增大的腫瘤組織中，RyR2低表達（表1，均P<0.05）。

3 討論

浸潤性乳腺癌是婦科常見腫瘤。目前，乳腺癌的發病率越來越高，且發病年齡呈年輕化趨勢，成為嚴重威脅女性生命健康的主要疾病之一。乳腺癌發生和發展的分子機制十分復雜，現尚不完全清楚，但隨著分子生物學和生物技術的不斷發展，越來越多的乳腺癌相關分子標志物被發現，并被用于乳腺癌的診斷和治療中。

作為蘭尼堿受體家族成員，RyR2參與多種腫瘤細胞的增殖、凋亡和遷移，在這些腫瘤的發生發展和轉移過程中起著重要作用[7-9]。本研究通過RT-PCR、免疫組織化學染色檢查和蛋白質印跡試驗檢測了RyR2在浸潤性乳腺癌組織、癌旁組織和正常乳腺組織中的表達情況，發現RyR2在浸潤性乳腺癌組織中的陽性率遠遠低于浸潤性乳腺癌旁組織和正常乳腺組織（陽性率分別為27.89%、75.61%和76.19%），提示RyR2可能具有抑制乳腺癌發生發展和維持正常乳腺組織的作用，有用作浸潤性乳腺癌分子標志物的潛力。

本研究還分析了RyR2表達與浸潤性乳腺癌組織超聲征象的關系，發現腫瘤組織的大小、形態、邊界、縱橫比、后方回聲衰減和彩色血流信號與RyR2表達均沒有相關性，但在超聲檢查提示存在微鈣化或腋窩淋巴結增大的腫瘤組織中，RyR2低表達。鑒于本研究免疫組織化學染色檢查結果顯示，在RyR2高表達樣本中，ER也幾乎高表達，故術前超聲檢查提示存在微鈣化且RyR2低表達可能提示浸潤性乳腺癌ER低表達。此外，RyR2在超聲檢查提示腋窩淋巴結增大的浸潤性乳腺癌組織中低表達，這與免疫組織化學染色檢查顯示RyR2在腋窩淋巴結轉移的浸潤性乳腺癌組織中低表達的結果一致。結合RyR2表達情況和超聲檢查結果，可以更準確地預測浸潤性乳腺癌的惡性程度和患者預后。

參考文獻

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