探討注射用阿奇霉素含量測定樣品降解的因素

錢麗 劉凱 馬元鋒

摘 要 目的：探討注射用阿奇霉素含量測定樣品降解的影響因素，提高含量檢測結果的精密度。方法：從人、機、料、法、環、測6方面分析，開展假設性試驗探究注射用阿奇霉素含量測定樣品降解的影響因素。結果與結論：發現進樣小瓶的材質是影響注射用阿奇霉素含量測定的一個重要因素，對提高測定結果的可靠性，具有重要的指導意義。

關鍵詞 注射用阿奇霉素 穩定性 影響因素 降解

中圖分類號：R927.2； R978.15 文獻標志碼：A 文章編號：1006-1533（2022）07-0096-03

引用本文 錢麗， 劉凱， 馬元鋒. 探討注射用阿奇霉素含量測定樣品降解的因素[J]. 上海醫藥， 2022， 43（7）： 96-98.

Discussion on the factors affecting the content determination of azithromycin for injection sample

QIAN Li， LIU Kai， MA Yuanfeng

（Yangtze River Pharmaceutical Group Co.， Ltd.， Taizhou 225300， China）

ABSTRACT Objective： To explore the factors affecting the degradation of azithromycin for injection sample and to reduce its relative standard deviation. Methods： From the aspects of human， machine， material， method， ring and measurement， an experiment was carried out to explore the factors affecting the degradation of azithromycin for injection. Results & Conclusion： According to the test results， a clear conclusion can be drawn to guide the routine determination of the azithromycin content.

KEy wORDS azithromycin for injection； stability； influencing factor； degradation

阿奇霉素臨床應用廣泛，其含量測定方法有許多報道[1-4]，而《中華人民共和國藥典》2015版采用抗生素微生物檢定法進行阿奇霉素的含量分析，盡管該法能真實體現該藥品的抗菌活性，但檢驗周期較長、操作較繁瑣[5-6]。HPLC法專屬性強、靈敏度高、準確度和重復性好、省時方便，因而是阿奇霉素含量測定的常用方法[7]。

日常檢測過程中發現，阿奇霉素含量測定隨著時間的延長，峰面積呈下降趨勢。為了提高檢測結果的可靠性，嚴格把控藥品質量，以保障患者用藥安全，本研究采用魚骨圖，從人、機、料、法、環、測6方面分析，開展假設性試驗，探究阿奇霉素含量測定中對樣品降解的影響因素，以便指導阿奇霉素含量測定的日常工作。

1 材料和方法

1.1 儀器

Agilent1260高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）、 XS205電子天平（梅特勒托利多公司）。

1.2 試藥

阿奇霉素對照品（批號130593-201303，含量94.4%，中國食品藥品檢定研究院）；注射用阿奇霉素（批號18082711，揚子江藥業集團有限公司）；阿奇霉素（批號103-180306-11，浙江國邦藥業有限公司）；乙腈（色譜純，Merck公司）；磷酸二氫銨（優級純）、濃氨水、磷酸氫二鉀及磷酸（分析純）均購自國藥集團化學試劑有限公司。

1.3 材料

透明玻璃小瓶（批號5182-0864、5182-9062）、聚丙烯內襯小瓶（批號5190-2242）、安捷倫塑料小瓶（批號5182-0567）、脫活小瓶（批號5183-2071）、A-Line惰性小瓶（批號5190-9589）均購自安捷倫公司；塑料小瓶（批號330209，OmniGene公司）；透明塑料小瓶（批號GL0410，GL公司）；磨砂塑料小瓶（批號 C4000-11，Thermo Fisher公司）。

1.4 方法

1.4.1 色譜條件

采用Waters XBridge C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 mm），以磷酸鹽緩沖溶液（取0.05 mol/L磷酸氫二鉀溶液，用20%磷酸溶液調節pH至8.2）-乙腈（45∶55）為流動相，稀釋劑：磷酸二氫銨溶液（稱取磷酸二氫銨1.73 g，加水溶解并稀釋至1 000 mL，用濃氨水調節pH至10.0±0.05）-甲醇-乙腈（7∶7∶6），檢測波長210 nm，柱溫40 ℃，流速1.0 mL/min，進樣量50 mL進行HPLC測定，借助外標面積法對阿奇霉素的含量進行計算。

1.4.2 溶液

1）對照品溶液 精密稱定阿奇霉素對照品25 mg，置25 mL量瓶中，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL約含阿奇霉素1 mg的溶液，作為對照品溶液。

2）供試品溶液 取注射用阿奇霉素（0.5 g）約210 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加水2 mL（50 mg阿奇霉素加水1 mL）溶解后，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液（質量濃度1 mg/mL）。

2 結果

阿奇霉素樣品溶液含量測定相對標準偏差值偏高，查看阿奇霉素含量測定樣品溶液圖譜，發現在主峰相對保留時間（RRT）約1.4 min處有降解峰（圖1），故含量測定相對標準偏差值偏高的原因為樣品降解。

針對阿奇霉素樣品溶液容易發生降解這個問題，從人、機、料、法、環、測6方面分析，找出可能影響阿奇霉素降解的因素（圖2）。

通過上述分析結果，最終找到9條末端因素，其中人、機、法未發現問題，故著重對料、環、測進行分析，最終確認要因。

2.1 試劑影響

目前我們使用的乙腈是色譜級別，分別采用Fisher或Merck公司的乙腈配制稀釋劑，且將稀釋劑pH分別調節為9.4、9.6、9.8、10.0、10.2開展實驗，結果表明，不同廠家的乙腈、不同pH稀釋劑配制的供試品溶液穩定性良好，其導致樣品降解的因素可排除。

2.2 色譜柱影響

色譜柱使用前沖洗程序：①100%甲醇溶液沖洗20 min；②10%甲醇溶液沖洗30 min；③流動相沖洗30～60 min。色譜柱使用后沖洗程序：①10%甲醇溶液沖洗90 min；②100%甲醇溶液沖洗120 min。

按標準操作規程沖洗色譜柱后進樣空白溶液測定，均未發現有殘留物存在（圖3），故排除色譜柱污染導致樣品降解。

2.3 進樣盤溫度影響

在日常檢測過程中，進樣盤溫度在未控溫條件下發現樣品降解，故考察進樣盤于控溫5 ℃條件下樣品溶液的穩定性，并用全新的安捷倫棕色玻璃進樣小瓶進樣。結果表明，對照品、原料及制劑的峰面積均呈下降趨勢，同樣存在降解，故排除未控制進樣盤溫度而導致樣品降解（表1）。

2.4 進樣小瓶材質影響

在室溫條件下考察阿奇霉素供試品溶液在不同進樣小瓶中存放不同時間對含量測定的影響。樣品液在全新的透明玻璃進樣小瓶較棕色的玻璃進樣小瓶降解速度略快，樣品液的穩定性在經清洗的透明舊玻璃小瓶中較新玻璃小瓶好，說明阿奇霉素含量測定溶液在硼硅玻璃中確實不穩定，容易降解（圖4）。

進而采用多種進樣小瓶考察溶液的穩定性。綜合對比表明，阿奇霉素溶液在安捷倫脫活小瓶中穩定性很差，在安捷倫A-Line惰性玻璃進樣小瓶中穩定性較差，而在塑料小瓶中的穩定性較好（圖5），但其含量測定結果均呈下降趨勢。為降低今后樣品檢測時出現的異常風險，盡量不使用玻璃小瓶，故在操作規程中須規定使用安捷倫塑料小瓶進樣。

通過對上述9條末端因素的分析，表明進樣小瓶材質對阿奇霉素溶液的穩定性有影響，其在硼硅玻璃小瓶中不穩定，容易降解，應當選用安捷倫塑料小瓶。

3 討論

本研究發現阿奇霉素溶液在玻璃進樣小瓶中穩定性差，而在塑料進樣小瓶中穩定性較好，推測阿奇霉素降解與進樣小瓶玻璃材質有關。在中國藥典中規定進樣小瓶材質為塑料小瓶，在此條件下的后續含量檢測均符合規定，且阿奇霉素含量測定相對標準偏差值降低。但此次研究未發現玻璃進樣小瓶導致阿奇霉素樣品降解的真實原因，后續將對此進行深入研究。

參考文獻

[1] 王立， 王靜. HPLC測定阿奇霉素干混懸劑的含量[J]. 航空航天醫學雜志， 2010， 21（12）： 2284-2285.

[2] 潘強. HPLC法測定阿奇霉素片的含量[J]. 中國藥品標準， 2009， 10（4）： 301-303.

[3] 劉珂， 張亞杰. HPLC法測定阿奇霉素及阿奇霉素膠囊的含量[J]. 中國藥師， 2010， 13（1）： 81-82.

[4] 韓振爽， 李瑋瑋. 高效液相色譜法測定阿奇霉素片中阿奇霉素含量[J]. 天津藥學， 2013， 25（1）： 15-16.

[5] 國家食品藥品監督管理局. 國家藥品標準[S]. 第三十七冊. WS1- （X-135） -2003Z.

[6] 李妍， 孫淑娟， 蘇樂群， 等. 微生物法測定阿奇霉素人體血清濃度的影響因素考察[J]. 藥學服務與研究， 2006， 6（4）： 298-300.

[7] 國家食品藥品監督管理局藥品認證管理中心. 藥品GMP指南： 質量控制實驗室與物料系統[M]. 北京： 中國醫藥科技出版社， 2011： 129-143.