湖南省郴州市黃牛弓形蟲病血清流行病學調查及風險因素分析

陳文承，陳 芬，扶亞祥，唐春華，謝雯琴

（1.郴州市動物疫病預防控制中心，湖南郴州 423000；2.湘南學院，湖南郴州 423000；3.長沙市農業綜合行政執法局，湖南長沙 410013；4.長沙市望城區農業農村局，湖南長沙 410200；5.永州職業技術學院，湖南永州 425100）

弓形蟲（Toxoplasma gondii）是一種世界范圍內廣泛分布的機會性病原蟲，可寄生于除紅細胞外的所有有核細胞，可自然感染人類以及犬、貓、豬、牛、羊、雞等溫血動物，其終末宿主是貓等貓科動物[1-2]。由弓形蟲感染引起的弓形蟲病是一種人獸共患病，被世界動物衛生組織（OIE）列為須報告動物疫病，我國將其列為二類動物疫病[3]。弓形蟲病在免疫力正常的人群中不表現明顯的臨床癥狀[4-7]，但對免疫力低下人群損害極大，嚴重者甚至死亡[8]。家畜感染弓形蟲后，可出現流產等繁殖障礙癥狀，對養殖業造成重大經濟損失[9-10]，且能通過其肉、奶制品等直接或間接地傳染給人而威脅人類健康[11]。

我國是全球牛肉的主要消費市場，2019 年牛肉消費量為840 萬t。人類感染弓形蟲主要通過攝入生的或未煮熟的食物，包括肉類[11]。初步調查[12]表明，湖南省黃牛弓形蟲抗體陽性率高達24.5%。湖南省黃牛養殖逐漸興盛，而郴州市擁有湖南省主要的黃牛養殖基地，但是關于郴州市黃牛弓形蟲感染情況未見報道。因此，監測該地區黃牛弓形蟲流行情況并分析影響其感染的風險因素具有重要公共衛生意義。

1 材料和方法

1.1 采樣策略和樣本來源

根據《湖南省動物疫病監測與流行病學調查計劃》，結合隨機取樣原則，分別從郴州市的東部（汝城縣）、西部（嘉禾縣）、南部（宜章縣）、北部（安仁縣）和中部（蘇仙區和資興市）地區的牛場采樣。經調查全國肉牛飼養規模記錄數據，這6 個地區共有規模化牛場（150 頭≤存欄數＜2 000 頭）4 個（蘇仙區1 個、汝城縣1 個、資興市1 個、安仁縣1 個），散養牛場（30 頭≤存欄數＜149 頭）93 個（蘇仙區27 個、宜章縣6 個、嘉禾縣7 個、安仁縣4 個、資興市49 個）。本次研究樣品來自9 個牛場，其中規模場4 個、散養場5 個（每個地區各取1 個）。對存欄量大于150 頭的規模場，按照5%的比例采樣，對散養場則全群采樣。2018 年秋季、冬季以及2019 年春季、夏季，共通過頸靜脈采集黃牛血液樣本710 份。

1.2 樣本處理

將血液樣本置于普通一次性塑料管中，經4 000×g離心10 min 后得到血清，將血清轉入新的離心管中并保存在-20 ℃直至使用。

1.3 主要試劑

弓形蟲 IHA 抗原、標準陰性血清、標準陽性血清（效價≥1:1 024）和稀釋液，均購自中國農業科學院蘭州獸醫研究所。

1.4 方法

1.4.1 間接血凝試驗（IHA） 按照文獻[13-14]和《弓形蟲病診斷技術》（NY/T 573—2002）進行檢測。先在反應板每孔滴加0.075 mL 血清，然后在第一孔滴加0.025 mL 樣品，隨后以4 倍遞呈稀釋3 孔，最后一孔棄去0.025 mL，蓋上玻璃板，使用微型振蕩器振蕩2 min。完成上述步驟后，放入37 ℃恒溫箱中2 h 后觀察結果。每板設陰、陽性及空白對照各2 孔。被檢血清1:16 稀釋孔內，呈現“澄清”以上凝集者判為陽性，若有可疑孔，則需復檢[15]。

1.4.2 數據分析 用Excel 2016 軟件整理收集到的數據，并計算黃牛弓形蟲血清抗體陽性率及其95%置信區間（95%CI）。采用SPSS V23.0（IBM，Chicago，IL）軟件，對不同變量（牧群規模、衛生狀況、地區、季節、黃牛性別、黃牛年齡以及養殖場是否有貓）的弓形蟲感染情況進行多元邏輯回歸分析，當P＜0.05 時認為差異有統計學意義。本調查還分析了基于似然比統計的優勢比（OR）及其95%CI。

2 結果與分析

2.1 總體情況

在采集的710 份黃牛血清樣品中，檢測出弓形蟲抗體陽性64 份，平均抗體陽性率為9.0%（表1）。所有被檢牛場均存在感染，場群抗體陽性率為100%。

表1 湖南省郴州市各地區黃牛血清弓形蟲抗體檢測結果統計

2.2 三間分布及風險因素

2018 年秋至2019 年夏，郴州市各縣區黃牛弓形蟲抗體陽性率及相關風險因素分析結果見表2。

表2 湖南省郴州市黃牛弓形蟲血清流行率相關變量分析結果

2.2.1 地區分布 不同地區黃牛弓形蟲抗體陽性率分析結果顯示：南部和北部牛場黃牛弓形蟲抗體陽性率較高，分別為12.9%和12.7%，東部和中部較低，陽性率分別為9.4%和7.4%，而西部最低，僅為1.7%。

2.2.2 季節分布 在不同的季節分組中，春季（12.9%）和夏季（13.7%）黃牛弓形蟲抗體陽性率較高，而秋季和冬季的陽性率明顯低于這兩個季節，分別為5.1%和4.1%（P＜0.05）。

2.2.3 群間分布 規模牛場的抗體陽性率與散養牛場沒有明顯差異（P＞0.05），分別為8.9%和9.1%；衛生狀況差的牛場抗體陽性率（12.9%）明顯高于衛生狀況好的牛場（7.4%，P＜0.05）；母黃牛弓形蟲抗體陽性率為9.1%，略高于公黃牛（8.6%），但差異不顯著（P＞0.05）；不同年齡段的黃牛均可感染，其中3 歲以上黃牛的弓形蟲抗體陽性率最高，為14.8%，而1 歲以下、1～2 歲和2～3歲年齡段的黃牛弓形蟲抗體陽性率分別為7.8%、8.1%、9.7%，但差異沒有統計學意義（P＞0.05）；有貓存在的牛場弓形蟲抗體陽性率為12.8%，而沒有貓存在的為2.9%，差異顯著（P＜0.05）。

2.2.4 風險因素 基于上述三間分布結果，認為黃牛養殖的地理區域、季節以及養殖場中貓的存在和衛生狀況是影響郴州市黃牛弓形蟲感染的4 個主要風險因素。郴州市北部牛場感染弓形蟲的風險約是西部的8.4 倍，南部約是西部的8.6 倍，中部約是西部的4.6 倍；有貓存在的牛場感染弓形蟲的風險是沒有貓的4.8 倍；黃牛在夏季感染弓形蟲的風險約是在冬季的3.7 倍，衛生狀況差的牛場黃牛感染弓形蟲的風險約是衛生狀況好的1.9 倍（表2）。

3 討論

3.1 總體情況

本調查結果顯示，郴州市黃牛弓形蟲抗體陽性率為9.0%，與近十年來國內牛弓形蟲血清總陽性率（10.1%）[16]相近，但相比于21 世紀初湖南省黃牛弓形蟲抗體陽性率（24.5%）[12]有明顯降低，這可能與2012—2020年采取的疫病控制措施有關。本研究結果比 2018 年重慶市部分地區牛弓形蟲抗體陽性率（27.25%）[17]、2017 年云南省臨滄市牛弓形蟲抗體陽性率（14%）[18]都要低，但比2019 年延邊市黃牛弓形蟲抗體陽性率（5.0%）[19]，2018 年河南省牛弓形蟲抗體陽性率（1.93%）[20]，2019 年青海省互助加定鎮牛弓形蟲抗體陽性率（0）[21]和內蒙古自治區部分地區牛弓形蟲抗體陽性率（0）[22]要高。這些差異可能與地理區域、氣候環境和飼養管理有關。

3.2 影響因素

3.2.1 地理區域 根據本調查的分析結果可知，地理區域是黃牛感染弓形蟲的最主要風險因素，其原因可能與不同區域的水流域有關[23]。之前的研究[24]表明，弓形蟲卵囊可以通過淡水徑流進入海洋，從而對居住在河流、湖泊附近的人類和其他動物構成威脅，而資興市為此次調查中黃牛弓形蟲血清陽性率最高的地區，其境內有東江湖等湖泊流域，增加了黃牛在飲水時感染弓形蟲的風險。

3.2.2 養殖場有無貓 本次調查結果表明，貓的存在是影響黃牛感染弓形蟲的重要風險因素之一。調查發現有貓存在的養殖場弓形蟲陽性率大大高于沒有貓的養殖場，這與之前的研究[25-27]結果一致。貓科動物作為弓形蟲的終末宿主，是唯一可以用卵囊污染環境的動物[28]。這些卵囊對環境因素具有高度的抗性，可以在潮濕的環境中產生孢子并存活數月[29]。養殖場的貓和黃牛經常近距離接觸，甚至同飲水，持續接觸貓糞便中排泄的卵囊會增加感染的風險[30]。有貓的養殖場弓形蟲血清陽性率較高，這提示應重視貓科動物污染環境的風險。

3.2.3 季節因素 本調查結果顯示，季節因素也是黃牛感染弓形蟲的風險因素之一。其中黃牛在春夏兩季弓形蟲抗體陽性率最高，明顯高于秋冬兩季，這可能與春夏的溫度和濕度高有關。弓形蟲的感染在溫暖潮濕地區比寒冷干燥地區更普遍[5]。作為牛飼料的新鮮牧草可能是弓形蟲卵囊的溫床，而潮濕的環境有利于卵囊的存活。本調查的結果與以往的報道一致[25，31-33]。但也有研究表明，季節并不是弓形蟲感染的風險因素[34-35]。

3.2.4 衛生因素 本次調查結果顯示，衛生因素也能影響黃牛感染弓形蟲，衛生狀況好的牛場弓形蟲陽性率明顯低于衛生狀況差的牛場。不規范管理的養殖場導致黃牛飲用水質差、飼料不新鮮等一系列問題，都有可能增加黃牛感染弓形蟲的風險。

3.2.5 畜群規模 調查結果顯示，規模牛場的抗體陽性率與散養牛場沒有明顯差異，分別為8.9%和9.1%，經分析后可知，群規模并不是影響郴州市黃牛感染弓形蟲的風險因素，造成該結果的原因尚不清楚，但是樣本量的差異可能對結果造成一定的影響。要弄清此原因，還需要進行更加深入的研究。

3.2.6 性別和年齡 母牛血清陽性率（9.1%）略高于公牛（8.9%），這與之前的報道一致[16]。不同年齡階段的黃牛弓形蟲抗體陽性率也沒有顯著差異，說明性別和年齡不是影響黃牛弓形蟲陽性率的風險因素。其原因可能是，任何年齡段的黃牛都有機會接觸到被弓形蟲卵囊污染的食物而受感染，再加上黃牛是放牧動物，其生活的范圍廣闊，更增加了被感染的概率。

3.3 采樣及檢測方法的局限性

本次調查在采樣過程中遵循隨機采樣原則，但由于特殊原因，個別區縣的養殖場不同意采樣，故采樣范圍未覆蓋到整個郴州市區縣不同規模的養殖場。其次，本試驗也存在分組中樣本數量不均衡等問題，這些都有可能對檢測結果造成一定影響。

IHA 法是一種高特異性、成本低且容易操作的弓形蟲檢測方法，主要檢測弓形蟲的IgG 和IgM抗體。IHA 比弓形蟲改良凝集試驗（MAT）和酶聯免疫吸附試驗（ELISA）有更高的特異性[36]，且因為ELISA 試劑盒價格昂貴，MAT 法抗原診斷液制備較為復雜，所以IHA 法被廣泛應用于多種動物的弓形蟲流行病學研究[37-38]。但不可否認，IHA的敏感性低于MAT 和ELISA，所以本研究結果可能存在一些誤差。

4 結論

本調查表明：湖南郴州市黃牛弓形蟲感染較為普遍，所有被調查的牛場均存在一定程度的感染；牛場的地理位置、貓的存在、季節和牛場衛生狀況是郴州市黃牛感染弓形蟲的主要風險因素。因此，郴州市需要根據主要風險因素制定相應的防控措施，做好牛弓形蟲病防控，降低對人類的潛在危害。