膀胱尿路上皮癌HER-2蛋白與VEGF的表達及其臨床意義*

陳 瑩，桂傳枝，冷飛云，吳啟峰，王 恒，楊 粟

(貴陽市第一人民醫院，貴州 貴陽 550001)

膀胱癌是全世界老年患者中高發的腫瘤，而尿路上皮癌是其最主要的組織學類型。據相關文獻統計，膀胱癌在男性惡性腫瘤中位居第7位[1]。尿路上皮癌的顯著特點是腫瘤具有多發病灶和術后高復發率，早期手術是治療尿路上皮癌的關鍵，而為了延長尿路上皮癌患者的存活期，部分患者臨床采取膀胱根治切除術。膀胱根治切除手術在男性中包括切除膀胱、前列腺、精囊、膀胱周圍組織，在女性中包括切除膀胱、子宮、輸卵管、卵巢、前部陰道和尿道。雖然這種手術方式可以在很大程度上減少腫瘤的復發與轉移，但膀胱切除范圍廣，嚴重影響患者的生活質量，所以如果能采取局部切除腫瘤，加上精準的靶點治療來阻斷尿路上皮癌的發生與發展，降低復發及轉移率，將大大提高臨床治愈率及改善患者預后。但尿路上皮癌是一個高異質性的復雜疾病，其發生過程中不僅涉及多條信號傳導通路,通路之間還有很多的交叉,故單一阻斷某一靶點顯然不能對尿路上皮癌患者達到良好的抗腫瘤目的[2]。因此揭示尿路上皮癌的發生機制及其相關信號傳導通路中的分子標志物就顯得尤為重要。

人類表皮生長因子受體2(HER-2)蛋白與血管內皮生長因子(VEGF)是目前國內外研究的熱門靶點蛋白，在多種實體性惡性腫瘤中均發現二者的高表達。但二者是否在尿路上皮癌的發生、發展中也發揮重要作用尚未確定。因此，本研究通過免疫組織化學(免疫組化)與FISH聯合檢測不同組織學分級尿路上皮癌中HER-2蛋白與VEGF的表達，并分析其表達與臨床病理特征的關系，其結果可為尿路上皮癌的分級、預后及多靶點的個體化治療提供一定的實驗依據。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1資料收集 收集本院2016—2021年相關尿路上皮腫瘤石蠟組織標本100例，由2位高年資病理醫生復診閱片，并參照世界衛生組織及國際泌尿病理學學會(WHO/ISUP)分類方案將標本分為4組：(1)對照組(黏膜呈慢性炎改變)10例；(2)尿路上皮乳頭狀瘤組(乳頭狀瘤組)10例；(3)低級別乳頭狀浸潤性尿路上皮癌組(低級別組)40例；(4)高級別乳頭狀浸潤性尿路上皮癌組(高級別組)40例。

1.1.2標本處理及切片 組織常規石蠟包埋切片，蘇木素-伊紅(HE)染色進行病理診斷及組織學分級。

1.1.3主要試劑 HER-2與 VEGF蛋白抗體均購自福州邁新生物技術開發有限公司，采用免疫組化Envision法，用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照,已知陽性標本作為陽性對照；一抗工作液稀釋濃度為1∶100。

1.2方法

1.2.1HER-2結果判讀 HER-2評分參照《中國尿路上皮癌人表皮生長因子受體 2 檢測臨床病理專家共識》[3]：0為無細胞染色或小于或等于10%浸潤癌細胞呈現不完整的、微弱的胞膜染色，>10%浸潤癌細胞呈現不完整的、微弱的細胞膜染色為+，>10% 浸潤癌細胞呈現不完整和(或)弱至中等強度的完整胞膜染色，或小于或等于10%的癌細胞胞膜完全強而完整的染色為++，>10%的浸潤癌細胞胞膜呈強、完整、均勻的染色為+++；其中0～+為陰性，++為可疑陽性，+++為陽性(即過表達)。HER-2(++)標本進一步通過Fish免疫熒光檢測確定陰性及陽性。

1.2.2VEGF結果判定 VEGF在胞膜或細胞質內出現明顯棕黃色或棕色顆粒者為陽性，判定標準：陽性細胞數小于10%為陰性，5%～<25%為弱陽性(+)，25%～<50%為陽性(++)，≥ 50%為強陽性+++，+～+++視為陽性表達。

2 結 果

2.1HER-2在各組尿路上皮腫瘤中的表達 實驗結果表明HER-2在對照組(圖1B)無陽性表達，在乳頭狀瘤組弱表達(圖2B)，在低級別組(圖3B)與高級別組(圖4B)的陽性率分別為10.0%、27.5%。

2.2VEGF在各組尿路上皮腫瘤中的表達 實驗結果表明VEGF在對照組(圖1C)表達較低(陽性率約為10%)，在乳頭狀瘤組(圖2C)、低級別組(圖3C)與高級別組(圖4C)的陽性率分別為20.0%、35.0%、87.5%。

3 討 論

膀胱癌是一個在全世界老年患者中都高發的腫瘤，而尿路上皮癌是其最主要的組織學類型，有關膀胱癌的治療近幾十年均無明顯變化，而如上述的這種手術方式對患者的生活質量有嚴重影響，所以如果能采取局部切除腫瘤，加上精準的靶點治療來阻斷尿路上皮癌的發生、發展，降低復發及轉移率，將大大提高臨床治愈率及改善患者預后。尿路上皮癌是一個高異質性的復雜疾病，其發生過程中不僅涉及多條信號傳導通路,通路之間還有很多的交叉,故單一阻斷某一靶點顯然不能對尿路上皮癌患者達到良好的抗腫瘤目的，從而揭示尿路上皮癌的發生機制及相關信號傳導通路中的分子標志物就顯得尤為重要。

HER-2又名c-erbB-2基因，屬于表皮生長因子受體家族中的一員，目前已被證實是一種原癌基因，該基因在涉及細胞分化與增殖的多條信號傳導通路中扮演重要角色。HER-2基因在乳腺癌中研究得最為透徹，在10%～20%的乳腺癌患者中存在HER-2基因的過表達，而針對該靶點的生物制劑(如代表藥物Herceptin)在臨床上已發揮舉足輕重的作用[4-6]。但HER-2基因是否也在尿路上皮癌中高表達，靶點治療是否也能適用于尿路上皮癌還未確定。本研究通過免疫組化與Fish二者聯合檢測后發現，對照組未表達HER-2蛋白，乳頭狀瘤組該蛋白的表達也很低，而低級別組HER-2蛋白表達開始增高至10.0%，而高級別組HER-2蛋白表達顯著增高達27.5%,該結果提示HER-2蛋白在尿路上皮癌的發生、發展中同樣有著重要作用。另外，有文獻報道HER-2 的高表達與腫瘤的預后也密切相關。據統計80%尿路上皮癌的患者若能及時手術，會有較高的生存率。但是有10%～20%的患者還是會出現彌漫浸潤，并發生轉移[7]，因此，如能把這部分患者用特異性指標篩查出來，及時加以放、化療及靶點治療，能延長這部分患者的生存周期。本研究中，HER-2陽性的患者在低級別組有4例，高級別組有11例，這部分患者是否具有更高的復發率及轉移率將是下一步追蹤的方向。

自1971年MOUSTAKAS等[8]提出血管生成在實體腫瘤發生中的重要意義以來，抗血管治療就逐漸成為很多實體腫瘤的重要治療手段之一。1989年VEGF被分離、克隆，人們對血管生成的機制也有了進一步的認識，多項研究均表明VEGF是目前唯一能特異性作用于血管內皮的促血管生成的因子，因此很多涉及VEGF信號傳導通路抑制劑，如小分子酪氨酸激酶抑制劑、VEGF受體2拮抗劑等都開始進入了臨床治療，部分患者因此而獲益[9-11]，故目前針對VEGF的靶點治療及其在腫瘤預后中的價值也已成為國內外研究的熱點項目。但VEGF在尿路上皮腫瘤的研究報道較少見，其在該腫瘤中表達的意義還尚未確定。本研究通過免疫組化檢測不同分組尿路上皮腫瘤后發現，對照組VEGF呈低表達，乳頭狀瘤組VEGF的表達已開始升高，低級別組與高級別組則大幅提高，分別為37.5%、75.0%，其表達與腫瘤惡性程度呈正相關。下一步將對高表達VEGF的患者進行密切隨訪，以進一步了解VEGF與尿路上皮腫瘤復發與轉移的相互關系。

目前，有研究顯示HER-2與VEGF的表達在多種腫瘤的發生過程中均有協同作用[12]。本研究的以上2項結果也表明HER-2與VEGF均參與了膀胱尿路上皮癌的發生、發展，二者的表達均與腫瘤的惡性程度呈正相關。本研究還發現，高級別組中HER-2陽性的病例，100%高表達VEGF，這部分病例的組織學形態分化更差，細胞異型性也更大，這是否意味著共表達HER-2與VEGF的腫瘤具有更強的侵襲性，這部分患者如果能在術后及時加入放、化療，以及相關的靶點治療，是否能提高患者的生存率、提高患者的生活質量，將是下一步研究的方向。

綜上所述，HER-2與VEGF的高表達不僅可以輔助病理診斷醫生進行組織學分級，還為后期判斷預后及多靶點的個體化治療提供了方向。