不同微生物檢驗法對結(jié)核桿菌檢驗效果比較

黃翔

摘要：目的：探究不同微生物檢驗法對結(jié)核桿菌檢驗效果。方法：將肺結(jié)核患者作為本次研究對象，對患者采用半巢式實時熒光定量核酸擴增法、抗酸染色直接涂片法、結(jié)核菌固體培養(yǎng)基（羅氏）培養(yǎng)法三種檢測方法，將病理診斷作為金標準，分析上述三種方法的檢出陽性率。結(jié)果：半巢式實時熒光定量核酸擴增法檢出陽性率高于抗酸染色直接涂片法、結(jié)核菌固體培養(yǎng)基（羅氏）培養(yǎng)法陽性率（P<0.05）。結(jié)論：在結(jié)核桿菌的檢驗方法中，半巢式實時熒光定量核酸擴增法的敏感度和特異度更高，能夠利于疾病的早期治療，值得研究和推廣。

關(guān)鍵詞：不同微生物檢驗法;結(jié)核桿菌;檢驗效果

結(jié)核桿菌作為導致結(jié)核病的病原體，其傳播途徑較多，比如消化道、皮膚和呼吸道等，導致機體受到侵犯，引起多種組織器官的結(jié)核病，其中以通過呼吸道引起的肺結(jié)核最為常見。目前臨床對于結(jié)核桿菌的檢出陽性率是診斷結(jié)核病的標準，能夠為疾病的早期診斷和治療提供重要參考依據(jù)，但在實驗室檢查過程中，由于分枝桿菌屬的細菌細胞壁脂質(zhì)含量十分高，導致大量的分枝桿菌酸在肽聚糖層的外層圍繞，對染料的穿入造成影響。目前臨床一般選擇傳統(tǒng)的抗酸染色法進行檢驗，但檢出陽性率較低，并且還可出現(xiàn)漏診情況，而隨著實驗室診斷技術(shù)的不斷提高，新的診斷方式也不斷出現(xiàn)。本文目的在于探究不同微生物檢驗法對結(jié)核桿菌檢驗效果，具體內(nèi)容見下文。

1.資料/方法

1.1基線資料

本次研究對象為肺結(jié)核患者，共82例，研究起始時間在2021年5月、終止時間在2022年1月。納入標準：（1）經(jīng)影像學診斷確診為肺結(jié)核;（2）患者和家屬在參加研究前均簽署知情同意書;（3）此次研究獲得醫(yī)學倫理委員會的批準。排除標準：（1）合并其他肺部感染疾病，比如肺炎、支氣管擴張、肺癌、支氣管異物癥;（2）伴有精神異常。患者年齡在18～94歲之間，平均年齡（56.51±2.31）歲，其中男性38例、女性44例。

1.2方法

半巢式實時熒光定量核酸擴增法：將1mL痰液置入試管內(nèi)，將2mL Xpert消化液加入試管中，并搖震15到30秒鐘，將其置于室溫內(nèi)15分鐘，保存待檢。用無菌吸管取2mL代檢樣本加入反應(yīng)盒內(nèi)，再將反應(yīng)盒放置在美國Cepheid公司所產(chǎn)的Xpert儀反應(yīng)艙內(nèi)，提取DNA，實施檢測和擴增操作，并選擇專用軟件對檢測結(jié)果進行分析。

抗酸染色直接涂片法：按照痰涂片鏡檢實驗室質(zhì)量標準手冊相關(guān)標準進行涂片，選擇改良堿性復紅法進行染色操作，最后實施抗酸桿菌鏡檢，按照鏡檢結(jié)果分級報告、標準報告結(jié)果。

結(jié)核菌固體培養(yǎng)基（羅氏）培養(yǎng)法;將4%NAOH消化液加入痰液中，使用振蕩器進行振蕩促進痰液化，處理時間應(yīng)在15-20分鐘。選擇前處理消化后痰液0.1mL，實施無菌操作，將其接種在培養(yǎng)基斜面上，保證每份標本均同時接種2支酸性改良羅氏培養(yǎng)基，將其放置在37攝氏度的溫箱內(nèi)，每周對菌落生長情況進行觀察1次，對于存在菌落生長的標本，需采用抗酸染色明確是否為分枝桿菌。

1.3觀察指標

分析三種檢測方法的檢測陽性率。

1.4統(tǒng)計學方法

在本研究數(shù)據(jù)中，計量資料用（x±s）形式表示，用T值進行檢驗，計數(shù)資料以（%）的形式表示，并以X2檢驗，核算軟件：SPSS28.00，P<0.05，說明以上數(shù)據(jù)存在明顯差異。

2. 結(jié)果

半巢式實時熒光定量核酸擴增法檢出陽性率為95.12%、抗酸染色直接涂片法檢出陽性率為63.41%、結(jié)核菌固體培養(yǎng)基（羅氏）培養(yǎng)法檢出陽性率為74.39%，前者檢出率高于后兩者（P<0.05）。如表1：

3.討論

肺結(jié)核的發(fā)病現(xiàn)已成為嚴重的防治問題，故應(yīng)更加重視該疾病的早期診斷，并獲得結(jié)核病的病原體。對于肺結(jié)核疾病的診斷而言，結(jié)核分枝桿菌作為診斷金標準，但由于其實驗室培養(yǎng)時間較長，導致患者延誤治療或無法得到正確治療。故此，尋求更為簡捷、快速、方便的診斷方式十分重要。

目前臨床對于結(jié)核桿菌的診斷方式較多，包括羅氏固體培養(yǎng)、熒光染色顯微鏡檢查、液體培養(yǎng)基培養(yǎng)檢查、分子生物學檢查、涂片檢查、半巢式實時熒光定量核酸擴增法檢查等，其中半巢式實時熒光定量核酸擴增法作為分子生物學檢查方法，隨著分子診斷技術(shù)的不斷提高，其主要是使用基于GeneXpert檢測系統(tǒng)的半巢式全自動實時熒光體外檢測技術(shù)，其通過對rpoB的突變狀態(tài)進行檢測，從而對患者的狀態(tài)進行判斷。在本次結(jié)果中，將三種檢測方法進行比較，發(fā)現(xiàn)半巢式實時熒光定量核酸擴增法的檢出率最高，究其原因：傳統(tǒng)的痰涂片染色法過程較為簡陋，并且涂片質(zhì)量、顯微鏡標本質(zhì)量均可受到外界因素的干擾，一般需要大量的菌數(shù)目標本才能獲得陽性結(jié)果，疾病檢出率較低;而結(jié)核菌固體培養(yǎng)基（羅氏）培養(yǎng)法的步驟十分復雜，在操作過程中容易受到液體懸浮問題的干擾，導致有效樣本丟失。而PCR法具有較強的敏感性，并且特異度較高，能夠早期發(fā)現(xiàn)結(jié)核病。

綜上所述，半巢式實時熒光定量核酸擴增法能夠有效檢出結(jié)核桿菌，為疾病的治療提供重要參考依據(jù)，值得進一步推廣與探究。

【參考文獻】：

[1]吳聯(lián)朋.RNA恒溫擴增實時熒光檢測痰標本結(jié)核分枝桿菌對肺結(jié)核診斷的應(yīng)用價值[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2021，31（20）：2469-2472.

[2]肖傳宇，侯文華，郭傳龍.Xpert Mtb/RIF檢測對肺結(jié)核診斷的價值探討[J].現(xiàn)代科學儀器，2021，38（5）：157-160.

[3]林律，平國華，車洋，等.PCR熒光探針技術(shù)在寧波地區(qū)結(jié)核快速診斷中的應(yīng)用價值分析[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2021，31（19）：2345-2347.

[4]楊眉，陳昱，唐源.巴氏染色后的涂片褪色行抗酸染色在結(jié)核診斷中的應(yīng)用[J].臨床與實驗病理學雜志，2021，37（6）：745-746.

[5]田海兵，盧大儒.基層醫(yī)院應(yīng)用GeneXpert MTB/RIF檢測診斷早期肺結(jié)核的價值分析[J].檢驗醫(yī)學與臨床，2021，18（17）：2475-2478.