冠心病病人PCI術后血清miR-145和VCAM1水平與預后的關系

胡靖超，卞 玲

冠心病是由高血壓、血脂升高、糖尿病等引起冠狀動脈粥樣硬化而導致的心血管疾病。近年來，隨著生活水平的提高及生活方式的改變，冠心病發病率呈明顯升高趨勢，嚴重影響人們的健康及生命安全[1]。經皮冠狀動脈介入治療(percutaneous coronary intervention，PCI)是冠心病的主要治療手段之一，可通過心導管技術疏通冠狀動脈管腔，使心肌實現缺血再灌注，達到緩解病情、恢復心臟功能的目的。但PCI術后部分病人會發生支架內再狹窄，引起血管內皮功能障礙和動脈粥樣硬化加重，嚴重影響病人預后[2]。因此，探尋PCI術后與冠心病病人預后相關的生物標志物有重要意義。Huang等[3]研究報道，胸主動脈夾層病人血漿和主動脈樣本中微小RNA-145(miR-145)含量明顯降低，下調miR-145表達可明顯影響血管平滑肌細胞增殖和凋亡。研究表明，急性心肌梗死病人血清血管細胞間黏附分子1(vascular cell adhesionmolecule 1，VCAM1)水平明顯升高，與合并心力衰竭有關[4]。目前，miR-145、VCAM1水平與經PCI治療冠心病病人預后關系的研究較少，本研究通過檢測PCI術后冠心病病人血清miR-145、VCAM1水平，分析二者水平變化與不同預后的關系，以期為臨床評估PCI治療冠心病病人預后提供一定依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年9月—2019年9月上海交通大學醫學院附屬第九人民醫院收治的因冠心病行PCI術的病人152例，其中男83例，女69例；年齡45～73(57.86±10.14)歲；不穩定型心絞痛37例(24.34%)，穩定型心絞痛65例(42.76%)，ST段抬高型心肌梗死23例(15.13%)，非ST段抬高型心肌梗死27例(17.76%)。根據術后6個月的隨訪結果是否發生主要不良心血管事件(major adverse cardiovascular events，MACE)將病人分為MACE發生組(66例)和MACE未發生組(86例)。本研究已經本院倫理委員會批準同意。

1.2 納入與排除標準 納入標準：①符合世界衛生組織(WHO)關于冠心病診斷標準[5]，且行PCI術治療；②臨床資料完整；③病人及其家屬知情并簽署知情同意書。排除標準：①1年內植入過冠狀動脈支架者；②合并自身免疫性疾病及惡性腫瘤者；③對阿司匹林、造影劑、金屬等過敏者；④腎臟、肝臟等重要臟器功能嚴重障礙者。

1.3 方法

1.3.1 一般資料收集 收集入組病人性別、體質指數(body mass index，BMI)、術前總膽固醇(total cholesterol，TC)、三酰甘油(triglyceride，TG)、高密度脂蛋白膽固醇(high density liptein cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(low density liptein cholesterol，LDL-C)資料；高血壓病史、糖尿病病史、既往行PCI術史、吸煙史、飲酒史；術中操作及冠狀動脈情況，如多支病變、發病至球囊擴張時間、植入支架數、支架直徑、支架長度、梗死相關動脈心肌梗死溶栓試驗(TIMI)分級≥2級、病變部位、冠狀動脈Gensini評分。

1.3.2 血清相關因子檢測 入組病人于PCI術前及術后1 d、14 d采集外周靜脈血5 mL，分離血清后于-80 ℃保存備用。檢測病人術前及術后1 d、14 d血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、C反應蛋白(C-reactive protein，CRP)、心肌肌鈣蛋白I(cardiac troponin，cTnI)、氨基末端B型腦鈉肽前體(N terminal pro B type natriuretic peptide，NT-proBNP)水平。

1.3.3 血清miR-145、VCAM1水平檢測 采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應(real-time quantitative PCR，qRT-PCR)法檢測入組病人PCI術前及術后1 d、14 d血清miR-145表達水平。20 μL反應體系如下：2 μL 互補脫氧核糖核酸(cDNA)，2 μL正向引物，2 μL反向引物，10 μL SYBR?Primix Ex TaqTM，0.4 μL ROX，3.6 μL無酶水。反應步驟如下：95 ℃ 7 min，1循環；95 ℃ 15 s，62 ℃ 35 s，73 ℃ 15 s，40個循環；1個樣品進行3次重復。以U6為內參基因，采用2-△△CT法計算miR-145相對表達水平。miR-145正向引物序列：5′-CCTCACGTCCAGTTTTCCC-3′，反向引物序列：5′-GCAAATCCAGCTGTGAAACCA-3′；U6正向引物序列：5′-ATCCGCAAAGACCTGT-3′，反向引物序列：5′-GGGTGTAACACTAAG-3′。采用酶聯免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)法檢測入組病人PCI術前及術后1 d、14 d血清血管細胞間黏附分子1(VCAM1)水平，嚴格按照試劑盒(貨號：ab100661，美國Abcam公司)說明書操作。

1.3.4 不良反應統計 術后6個月隨訪，記錄MACE發生情況，其中包括心源性死亡6例、再發心肌梗死8例、腦卒中4例、再發心絞痛28例、冠狀動脈再狹窄20例。

2 結 果

2.1 兩組一般資料比較 MACE發生組與MACE未發生組性別、糖尿病病史、高血壓病史、吸煙史、飲酒史、既往PCI術史比例及年齡、BMI、TC、TG、HDL-C、LDL-C水平、植入支架數、支架直徑、支架長度、病變部位比較，差異無統計學意義(P>0.05)，而多支病變、發病至球囊擴張時間、梗死相關動脈TIMI分級≥2級、冠狀動脈Gensini評分比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。詳見表1。

表1 兩組一般資料比較

(續表)

2.2 兩組血清miR-145、VCAM1及相關因子水平比較 MACE發生組與MACE未發生組病人術前各指標比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。與術前比較，MACE發生組術后1 d、14 d血清miR-145水平明顯降低，VCAM1、CRP、CK-MB、cTnI、NT-proBNP水平明顯升高，差異有統計學意義(P<0.05)；MACE未發生組術后1 d血清miR-145水平明顯降低，VCAM1、CRP、CK-MB、cTnI、NT-proBNP水平明顯升高，差異有統計學意義(P<0.05)。術后1 d、14 d MACE發生組病人血清miR-145水平均明顯低于MACE未發生組，VCAM1、CRP、CK-MB、cTnI、NT-proBNP水平均明顯高于MACE未發生組，差異有統計學意義(P<0.05)。詳見表2。

表2 兩組血清miR-145、VCAM1及相關因子水平比較(±s)

2.3 術后1 d血清miR-145、VCAM1水平與CRP、CK-MB、cTnI及NT-proBNP水平的相關性 采用Pearson法分析得出，冠心病病人PCI術后1 d血清miR-145水平與CRP、CK-MB、cTnI、NT-proBNP水平呈負相關(P<0.05)；血清VCAM1水平與CRP、CK-MB、cTnI、NT-proBNP水平呈正相關(P<0.05)。詳見表3。

表3 術后1 d miR-145、VCAM1水平與CRP、CK-MB、cTnI及NT-proBNP的相關性分析

2.4 PCI術后冠心病病人發生MACE的危險因素分析 以PCI術后冠心病病人是否發生MACE為因變量(發生=1，未發生=0)，以多支病變、發病至球囊擴張時間、梗死相關動脈TIMI分級≥2級、冠狀動脈Gensini評分及PCI術后1 d血清miR-145、VCAM1、CRP、CK-MB、cTnI、NT-proBNP水平為自變量建立Logistic回歸模型。結果顯示，多支病變、高冠狀動脈Gensini評分、PCI術后1 d血清低miR-145水平、高VCAM1水平、高CRP水平、高CK-MB水平、高cTnI水平、高NT-proBNP水平是PCI術后冠心病病人發生MACE的獨立危險因素(P<0.05)。詳見表4。

表4 PCI術后病人發生MACE的危險因素分析

2.5 PCI術后1 d血清miR-145、VCAM1水平對發生MACE的預測價值分析 術后1 d血清miR-145水平預測PCI術治療冠心病病人發生MACE的ROC曲線下面積為0.795[95%CI(0.721，0.868)]，當miR-145取截斷值0.53時，其診斷敏感度為75.80%，特異度為79.10%。術后1 d血清VCAM1水平預測PCI術冠心病病人發生MACE的ROC曲線下面積為0.783[95%CI(0.706，0.860)]，當VCAM1取截斷值292.31 μg/L時，其診斷敏感度為77.30%，特異度為80.20%。二者聯合預測PCI術冠心病病人發生MACE的ROC曲線下面積為0.827[95%CI(0.757，0.897)]，敏感度為84.80%，特異度為77.90%。詳見圖1。

圖1 PCI術后1 d血清miR-145、VCAM1水平預測MACE的ROC曲線

3 討 論

冠心病包括心肌缺血、穩定型心絞痛、不穩定型心絞痛、心肌梗死、心力衰竭等，病人主要出現胸悶、心慌、氣短、心悸、心痛等癥狀，若病情持續進展可能引發猝死，嚴重威脅病人生命[6]。血管內皮損傷、血管平滑肌細胞增殖及炎癥反應增加等是冠心病的主要發病機制[7]。

miRNA是一類長度約20 nt，能穩定存在于各種組織和細胞中的短鏈非編碼核糖核酸(RNA)，研究發現，miR-145在急性冠狀動脈綜合征病人血清中表達水平明顯下調，可能是該疾病潛在生物標志物，過表達miR-145可改善血管內皮損傷和降低炎癥反應[8]。本研究結果顯示，與術前比較，MACE發生組、MACE未發生組病人在術后1 d血清miR-145水平均明顯降低，且MACE發生組明顯低于MACE未發生組，提示血清miR-145在冠心病病人PCI術后康復發揮一定作用，其可能影響病人預后。而在術后14 d，MACE未發生組病人血清miR-145水平較術后1 d呈上調趨勢，與術前比較，差異無統計學意義(P>0.05)；MACE發生組病人血清miR-145水平雖較術后14 d有上調趨勢，但仍明顯低于術前水平，差異有統計學意義(P<0.05)。進一步提示冠心病病人血清miR-145水平下調可能與PCI術后MACE發生有關。研究發現，心肌細胞缺氧環境下miR-145表達下調，可能加重心肌細胞缺氧損傷、抑制細胞增殖和遷移活力[9]。Chen等[10]研究報道，自發型高血壓大鼠模型中抑制miR-145表達可促進血管平滑肌細胞增殖。研究表明，miR-145過表達可通過維持血管平滑肌細胞收縮狀態來減弱兔模型內膜增生[11]。miR-145可通過腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等炎性因子參與腦缺血再灌注損傷調控[12]。結合以上結果推測,本研究中血清miR-145表達水平下調可能通過影響心肌細胞損傷、血管平滑肌細胞增殖、炎性因子表達，預示冠心病病人PCI術后不良預后，但具體作用機制還需進一步探究。

VCAM1屬于免疫球蛋白超家族成員，在細胞活化、遷移、分化方面發揮重要作用。研究發現，代謝綜合征病人體內VCAM1表達增加可能通過促進頸動脈斑塊體積增大、炎癥反應失衡，影響病人心血管疾的病發生、發展[13]。Ebraheem等[14]研究證實，幼年特發性關節炎病人頸動脈內膜厚度增加與血清VCAM1水平上調有關，預示病人血管內皮功能障礙及心血管疾病發生風險增加。本研究結果顯示，PCI術后1 d MACE發生組與MACE未發生組VCAM1水平較術前均有明顯升高，且MACE發生組VCAM1水平明顯高于MACE未發生組(P<0.05)，提示PCI術后VCAM1水平上調可能影響動脈斑塊增大、動脈內膜厚度及炎癥反應增加等促進冠心病病人病情加重。但在術后14 d兩組病人血清VCAM1水平較術后1 d均有下調趨勢，但MACE未發生組病人血清VCAM1與術前比較，差異無統計學意義(P>0.05)，而MACE發生組病人血清VCAM1水平與術前比較較高，差異有統計學意義(P<0.05)，提示PCI術后血清VCAM1水平升高可能預示病人不良預后發生。研究表明，血清VCAM1表達水平與冠狀動脈病變程度呈正相關[15]。Fan等[16]研究發現，VCAM-1水平上調是主動脈內皮血管硬化標志，可能與腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等炎性細胞因子水平升高和內皮細胞信號轉導抑制有關。推測血清VCAM1高表達可能通過調控血管內皮細胞損傷、炎性因子水平變化，參與冠狀動脈病變過程，與PCI術后病人MACE等不良預后發生密切相關。

本研究發現，冠心病病人PCI術后1 d血清miR-145水平與CRP、CK-MB、cTnI、NT-proBNP水平呈負相關，血清VCAM1水平與CRP、CK-MB、cTnI、NT-proBNP水平呈正相關，進一步提示血清miR-145、VCAM1可能通過參與炎癥反應、心肌損傷調控，影響冠心病病人PCI術后不良預后發生。進一步研究發現，多支病變、高冠狀動脈Gensini評分、PCI術后1 d血清低miR-145水平、高VCAM1水平、高CRP水平、高CK-MB水平、高cTnI水平、高NT-proBNP水平是PCI術后冠心病病人發生MACE的獨立危險因素，且二者聯合預測PCI術治療冠心病病人發生MACE的ROC曲線下面積為0.827[95%CI(0.757，0.897)]，敏感度為84.80%、特異度為77.90%，提示血清miR-145、VCAM1水平與PCI術后冠心病病人預后密切相關，二者聯合檢測對冠心病病人PCI術后發生MACE具有一定預測價值，同時還應密切觀察病人冠狀動脈情況，以采取治療措施改善病人預后。

綜上所述，PCI術后冠心病病人血清miR-145表達水平明顯降低，VCAM1水平明顯升高，可能作為生物標志物用于評估PCI術后冠心病病人預后。但由于本研究樣本量和研究方法限制，相關機制尚需進一步以多中心研究方式進行探究。