急性腦梗死患者外周血中LncRNA RP11-147L13.8的表達水平及臨床意義

金麗霞, 劉 丹, 張廣煒, 馮佳佳

急性腦梗死是最常見的腦血管疾病之一，約占腦卒中的60%～70%[1]，具有急性起病、進展較塊等特點。急性腦梗死的發生是由一系列在時間和空間上演變而形成的復雜的病理生理過程。目前，我們對于急性腦梗死發生的分子機制認識較少，臨床上主要依靠影像學和血流動力學來評估病情的嚴重程度及預后[2～4]。近年來有研究發現LncRNA可參與腦梗死后腦缺血再灌注損傷及神經功能損傷等過程[5]。LncRNA RP11-147L13.8是LncRNA RP11的家族成員之一，但現階段仍未有研究報道LncRNA RP11與急性腦梗死的發生存在相關性?；诖?，本實驗探索外周血LncRNA RP11-147L13.8與急性腦梗死的相關性，為預測急性腦梗死的發生提供潛在靶點。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機選擇2021年5月-2021年12月在我科住院的急性腦梗死患者50例(病例組)和非腦梗死患者50例(對照組)。納入標準：均符合1996年全國第四屆腦血管病學術會議修訂的腦梗死的診斷標準;滿足CISS卒中分類標準;CISS分型為動脈粥樣硬化性腦梗死，年齡≥18歲，發病時間≤7 d，第一次發病，且治療過程中無再發腦梗死。排除標準：既往曾有腦出血病史或CT顯示存在腦出血;有明顯的心、肝、腎功能不全及惡性腫瘤;存在心房顫動等嚴重心律失常;心源性栓塞所致的卒中患者。該實驗已經通過本院倫理委員會批準。

1.2 LncRNA RP11-147L13.8的測定 患者入院次日清晨空腹采集外周肘靜脈血4 ml，置入抗凝集管內，放置-80 ℃冰箱待測。采用實時熒光定量PCR檢測患者外周血中LncRNA RP11-147L13.8的表達水平，采用2-△△CT法分析LncRNA RP11-147L13.8的相對表達量，對所得數據進行統計分析。

2 結 果

2.1 腦梗死組與對照組的一般臨床特征資料比較 兩組一般臨床特征比較，結果顯示TC、TG、LDL-C、HDL-C和高脂血癥病史，無統計學意義(P>0.05),而性別、年齡、收縮壓、舒張壓、空腹血糖、高血壓病史和糖尿病史，有統計學意義(P<0.05)(見表1)。

表1 腦梗死組與對照組一般臨床特征資料比較

2.2 外周血LncRNA RP11-147L13.8在腦梗死組和對照組中表達水平的比較 結果顯示，腦梗死組患者外周血LncRNA RP11-147L13.8的表達水平(8.733±7.355)明顯高于對照組(4.026±4.405)，差異有統計學意義(P<0.01)(見圖1)。

圖1 外周血LncRNA RP11-147L13.8在腦梗死組和對照組中表達水平的比較

2.3 腦梗死組與對照組的臨床特征資料及外周血LncRNA RP11-147L13.8的相關性分析 急性腦梗死的發生與性別、年齡、收縮壓、舒張壓、空腹血糖、高血壓病史、糖尿病史和外周血LncRNA RP11-147L13.8表達水平呈正相關(P<0.05);而與TC、TG、LDL-C、HDL-C和高脂血癥病史無關(P>0.05)(見表2)。

表2 腦梗死組與對照組臨床特征及外周血LncRNA RP11-147L13.8的相關性分析

2.4 急性腦梗死發病危險因素的Logistic回歸分析 以急性腦梗死發病為因變量，以性別、年齡、收縮壓、舒張壓、空腹血糖、高血壓病史、糖尿病史和LncRNA RP11-147L13.8的表達水平為自變量，采用二元Logistic回歸分析法進行分析，結果顯示：高血壓病史和LncRNA RP11-147L13.8是急性腦梗死發病的獨立危險因素，有統計學意義(P<0.05)(見表3)。

表3 急性腦梗死發病危險因素的Logistic回歸分析

2.5 外周血LncRNA RP11-147L13.8診斷急性腦梗死的ROC曲線分析 ROC曲線分析顯示，得到LncRNA RP11-147L13.8診斷急性腦梗死的曲線下面積為0.750(95%CI0.656～0.845，P<0.001),臨界值為0.4，敏感度為0.66，特異度為0.74。因此，LncRNA RP11-147L13.8的表達對急性腦梗死診斷具有一定的價值(見圖2)。

圖2 外周血LncRNA RP11-147L13.8的ROC曲線

3 討 論

急性腦梗死是指各種原因引起的腦供血動脈血流障礙造成的腦組織缺血缺氧性壞死。若血流障礙得不到及時的糾正，則會導致嚴重的神經功能缺損以及一系列并發癥的發生。目前，臨床上缺乏可靠的生物標記物用于急性腦梗死的早期診斷。故尋找與急性腦梗死發生相關的外周血標記物尤為重要。

長鏈非編碼RNA是一組長度大于200 nt的RNA分子，缺乏編碼功能。大多數LncRNA被RNA聚合酶Ⅱ轉錄[6]。LncRNA可以調控基因的表達，與缺血性腦卒中等多種神經系統疾病密切相關[7]。近年來有研究發現，LncRNA以穩定性二級結構作為游離核酸在人體外周血液中出現，其含量相對穩定。然而LncRNA在疾病狀態下血液中的表達異常，有助于疾病的早期診斷和預后評估[8,9]。田春歐等[10]發現，患者外周血液中差異表達的LncRNA與急性腦梗死的發生具有一定的相關性。

本課題檢測了腦梗死組與對照組患者外周血中LncRNA RP11-147L13.8的表達情況，同時探討LncRNA RP11-147L13.8與腦梗死的相關性。結果顯示：腦梗死患者外周血中LncRNA RP11-147L13.8的表達水平明顯高于對照組，具有統計學差異 (P<0.01)。急性腦梗死的發生與外周血LncRNA RP11-147L13.8的表達水平呈正相關。Logistic回歸分析顯示，LncRNA RP11-147L13.8是急性腦梗死發生的獨立危險因素。ROC曲線分析顯示，LncRNA RP11-147L13.8診斷腦梗死的曲線下面積是0.750，由此LncRNA RP11-147L13.8對急性腦梗死的診斷具有一定的診斷價值。

性別、年齡、高血壓和糖尿病是急性腦梗死發生的危險因素[11]。我們的實驗結果與大量回顧性研究結果一致[12]。本次研究首次提出了急性腦梗死患者外周血中LncRNA RP11-147L13.8的表達上調，可以對腦梗死患者的診斷提供一定的價值。因此，LncRNA RP11-147L13.8有望成為急性腦梗死患者外周血中的診斷指標。

目前，缺乏LncRNA RP11-147L13.8與心腦血管疾病相關性的文獻。研究表明，LncRNA N_R 120420在腦梗死患者外周血中的表達水平明顯高于健康組,同時外周血中的LncRNA N_R 120420可以作為急性腦梗死發生的獨立危險因素[10]。Zhu等[13]研究發現，在腦梗死患者外周血白細胞中LncRNA MIAT的表達會上調，并與NIHSS評分，嚴重程度和梗死面積等相關。他們還發現LncRNA MIAT是腦梗死患者的獨立預后因素，與高表達LncRNA MIAT組相比，低表達LncRNA MIAT組預后更好，生存時間更長。因此，外周血白細胞中的LncRNA MIAT可作為急性腦梗死的一種新的診斷和預后標志物。研究表明，腦梗死患者血漿中的LncRNA PITPNA-AS1通過微滴式數字PCR檢測，發現其表達水平高于對照組，LncRNA PITPNA-AS1有可能成為急性腦梗死的生物標記物[14]。同時也在動物實驗中驗證了這種現象，Zhang等[15]人研究發現，建立小鼠腦梗死模型，采用實時熒光定量PCR 檢測小鼠模型中LncRNA SNHG14的表達情況，發現LncRNA SNHG14的表達上調，進一步研究發現敲除LncRNA SNHG14可通過miR-199b/AQP4軸抑制炎癥和氧化應激，進而減輕缺血性腦損傷。因此，我們認為LncRNA RP11-147L13.8可能參與急性腦梗死的發生和發展，但值得注意的是LncRNA RP11-147L13.8在急性腦梗死中的確切機制仍未明確。

研究表示，腦梗死患者全血中LncRNA的表達會隨時間的變化而發生顯著改變[16]。本研究中腦梗死患者納入標準的發病時間要小于7 d，因此未進行與腦梗死發病時間相關性探討。本課題的局限性在于納入樣本量較少，有關LncRNA RP11-147L13.8與心腦血管疾病相關的文獻較少，結果可能存在偶然性或錯誤性。因此，在今后的研究中需要加大樣本量來進一步驗證實驗結果的準確性。綜上所述，LncRNA RP11-147L13.8與急性腦梗死具有一定的相關性，并有望成為診斷急性腦梗死的新靶點。但其具體的靶向機制和真正的臨床應用還需進一步探索和研究。