大慶地區(qū)生牛乳中霉菌毒素含量調(diào)查

杜新宇，符欣靈，唐賀堯，顧芷嫣，楊 宇，陳媛媛

黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)，黑龍江大慶 163319

霉菌毒素是農(nóng)作物在生長、收獲和貯存期間，由生長在作物上的真菌產(chǎn)生。霉菌毒素通過飼料或鋪草進(jìn)入動(dòng)物養(yǎng)殖生產(chǎn)系統(tǒng)。極少量的霉菌毒素就能引起畜禽肝臟、腸道損傷出血、嘔吐、腹瀉等中毒癥狀,導(dǎo)致動(dòng)物采食量減少、體重下降、生長緩慢等生理變化，急性中毒死亡率高，妊娠母牛大量流產(chǎn)，產(chǎn)死胎。研究表明,當(dāng)奶牛攝入濃度為1～10 μg/mL的黃曲霉毒素B1（AFB1）時(shí),其體內(nèi)的瘤胃微生物只能代謝降解不到10%的AFB1,其余90%沒有被瘤胃微生物代謝的AFB1可在肝臟中經(jīng)羥基化轉(zhuǎn)化為毒性較低的AFM1代謝生成的黃曲霉毒素M1(AFM1)不僅可以與體內(nèi)的葡萄糖酸結(jié)合,也可以通過全身循環(huán)系統(tǒng)代謝到尿和乳中。牛奶中OTA含量為5.0～84.1 ng/(kg·d)時(shí)對(duì)嬰幼兒來說可能會(huì)造成傷害，OTA含量為2 730 ng/L時(shí)會(huì)對(duì)成年人健康造成威脅。關(guān)于大慶地區(qū)以往生牛乳中霉菌毒素水平的調(diào)查方面還存在著空白。本研究以通過國際上公認(rèn)的高效液相色譜法對(duì)大慶地區(qū)小型養(yǎng)殖戶生牛乳為研究對(duì)象，旨在明確生牛乳霉菌的污染情況與鑒定生乳污染乳霉菌毒素的主要種類。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

在大慶周邊4個(gè)小型規(guī)模化牧場(chǎng)隨機(jī)選取40頭1～6胎次，產(chǎn)后42～525 d奶牛作為試驗(yàn)動(dòng)物。對(duì)奶牛生牛乳中的霉菌毒素及其含量進(jìn)行測(cè)定。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物的飼料配方（營養(yǎng)成分）

實(shí)驗(yàn)選取大慶市某牛場(chǎng)，奶牛飼喂全混合日糧，組成為：進(jìn)口苜蓿0.5 kg，國產(chǎn)燕麥草0.8 kg，全棉籽0 kg，玉米粉2.5 kg，大豆皮3 kg，南瓜籽0 kg，小麥秸1.5 kg，甜菜顆粒粕1 kg，噴漿玉米皮0 kg，玉米胚芽粕1 kg，啤酒糟8 kg，裹包苜蓿6.5 kg，豆粕1 kg，高產(chǎn)濃縮3.185 kg，泌乳寶1 kg，玉米青貯18 kg，糖蜜1 kg，水2.5 kg，壓片玉米3.574 kg。

1.3 奶牛基本信息

指標(biāo)平均值 (±標(biāo)準(zhǔn)差) (N=40)泌乳天數(shù)/d 229.83±122.02采食量/kg 26.90+1.34年齡 4.63±1.6胎次 3.13±1.39體況評(píng)分 3.13±0.40日產(chǎn)奶量kg/d 40.58± 11.55年產(chǎn)奶量/kg 11 653.46±1 821.83

1.4 試驗(yàn)儀器及試劑

高效液相色譜儀、40份生牛乳、離心機(jī)。

1.5 樣品收集與處理

取5 g生牛乳樣品加入10 mL ACN中，渦旋震蕩2 min,超聲提取15 min,吸取牛奶樣品，牛奶10 000 r/min離心5 min，吸取有機(jī)相，過0.22 μm的有機(jī)膜，上機(jī)。

1.6 樣品的檢測(cè)

檢測(cè)項(xiàng)目：黃曲霉毒素M1（AFM1）,黃曲霉毒素B1（AFB1）,赭曲霉毒素B（OTB），赭曲霉毒素A(OTA),HT-2毒素。

1.7 數(shù)據(jù)分析

將得到的數(shù)據(jù)利用SPSS 22.0軟件對(duì)獨(dú)立樣本進(jìn)行單因素方差分析，將得到的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，閾值P設(shè)為0.05。相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)系數(shù)法。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 牛奶中霉菌毒素的檢測(cè)結(jié)果

由表1可知，大慶地區(qū)的生牛乳中的AFB1、AFM1、DON、T-2、ZEA、OTA均有不同程度的檢出。其中DON、T-2、ZEA的檢出率最高為50%，但其含量并未超出我國規(guī)定的最高限量標(biāo)準(zhǔn)。其次是TOA檢出率達(dá)到42.5%。

表1 大慶地區(qū)規(guī)模化牧場(chǎng)牛奶中霉菌毒素檢出率

2.2 霉菌毒素的相關(guān)性檢驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 AFB1與各體況相關(guān)性

表2 AFB1與各體況相關(guān)性

2.2.2 AFM1與各體況相關(guān)性

表3 AFM1與各體況相關(guān)性

2.2.3 DON與各體況相關(guān)性

表4 DON與各體況相關(guān)性

2.2.4 T-2與各體況相關(guān)性

表5 T-2與各體況相關(guān)性

2.2.5 ZEA與各體況相關(guān)性

表6 ZEA與各體況相關(guān)性

2.2.6 OTA與各體況相關(guān)性

表7 OTA與各體況相關(guān)性

研究表明：AFM1對(duì)奶牛泌乳量影響最大，可明顯降低奶牛泌乳量,影響奶牛生產(chǎn)性能。AFM1可以增加奶牛乳房炎的發(fā)病概率和減少奶牛的日常泌乳量，而且容易引起奶牛的采食量下降，同時(shí)導(dǎo)致奶牛體細(xì)胞數(shù)上升以及免疫機(jī)能的抑制，奶產(chǎn)量的下降會(huì)隨著日糧中毒素的增加而愈發(fā)嚴(yán)重。隨著奶牛采食含有黃曲霉毒素的飼料，奶牛體內(nèi)的黃曲霉毒素含量增加，從而使得牛奶的損失量增加，并且牛奶中也可能含有M1形式的黃曲霉毒素。大慶地區(qū)生小型規(guī)模化牧場(chǎng)生牛乳中霉菌毒素含量較其他地區(qū)霉菌毒素含量低，但仍有進(jìn)一步改善的空間。

大慶地區(qū)奶牛飼料和牛奶中的霉菌毒素污染程度均較低,DON、T-2、ZEA的檢出率最高為50%，但其含量并未超出我國規(guī)定的最高限量標(biāo)準(zhǔn)。其次是TOA檢出率達(dá)到42.5%，并未超過國家標(biāo)準(zhǔn)。但仍有少量樣品的黃曲霉毒素含量超過歐盟標(biāo)準(zhǔn)。牧場(chǎng)1、牧場(chǎng)2牛奶中檢測(cè)出的霉菌種類較牧場(chǎng)3、牧場(chǎng)4多，但每種毒素含量與牧場(chǎng)3、牧場(chǎng)4含量相比較低。我們可以通過改善飼料儲(chǔ)存環(huán)境，提高檢測(cè)水平,規(guī)范操作等措施降低牛奶中霉菌毒素的含量,同時(shí)也可以鼓勵(lì)散戶通過多種方式與規(guī)模廠合作,以減小牛奶感染霉菌毒素的風(fēng)險(xiǎn)。