益生菌制劑對雛鴨血清抗氧化能力、免疫功能和肝功能的影響

阮勝鋼 孫寒雪 曾 濤 李國勤 陶爭榮 許文武 盧立志* 曹鴻國

（1紹興咸亨紹鴨育種有限公司，浙江紹興 312000；2浙江農藝師學院，浙江杭州 310021；3浙江省農業科學院畜牧獸醫研究所，浙江杭州 310021；4安徽農業大學動物科技學院，安徽合肥 230000）

益生菌在人們日常生活中經常出現，通過定殖在宿主體內調節宿主黏膜與系統免疫功能，調節腸道內菌群平衡，促進營養吸收和保持腸道健康。科研人員對其進行了廣泛研究，將其有效應用于食品、醫藥和農業生產，取得了巨大的經濟和社會效益[1]。在畜禽生產應用中，益生菌制劑更是一種有潛力替代抗生素的飼料添加劑，可以影響動物的生產性能、血清抗氧化能力等，進而改善動物的健康狀況和提升畜禽產品質量[2]。與使用抗生素不同，動物的非特異性免疫力在使用益生菌制劑后得到增強，飼料的利用率提高，動物生長性能相應改善，同時不會出現超級耐藥菌等現象，減少對環境的污染[3]。紹興鴨養殖歷史悠久，原產于浙江省紹興市和諸暨市，目前在國內飼養范圍廣泛[4]。紹興鴨具有性成熟早、產蛋量高、耗料量少、抗病力強等優勢，是世界三大鴨種之一[5-6]。紹興鴨雛鴨的健康養殖對畜禽業發展至關重要。本試驗探究將益生菌應用于雛鴨飼料中，評價其對前期生長階段的雛鴨血清抗氧化能力、免疫功能和肝功能的影響，以期為飼料禁抗后鴨群的健康提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試益生菌制劑由枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌組成，含有效功能菌數≥6.0×108CFU/g，由廣州恒益生物科技有限公司提供。試驗雛鴨由紹興咸亨紹鴨育種有限公司提供。試驗試劑盒均購自北京華英生物技術研究所。血液檢驗儀器為華衛德朗DR-200BS酶標分析儀、山東博科生物產業有限公司生產的BK-1200全自動生化分析儀。

1.2 試驗設計

試驗采用單因素完全隨機設計，選取1日齡體重相近、健康狀況良好的紹興鴨600只，將其隨機分成2組：對照組飼喂基礎日糧，試驗組在對照組基礎上添加0.15%益生菌制劑。每組6個重復，每個重復50只，試驗期為28 d。

1.3 試驗方法

飼糧配制及養分含量計算參照《紹興鴨飼養技術規程》（NY/T 827—2004），結合生長前期雛鴨生理營養要求配制飼糧（表1）。1 kg飼料提供12 mg Cu、84 mg Zn、110 mg Mn、10.4 mg I、0.3 mg Se、11 250 IU VA、3 000 IU VD3、37.5 mg VE、3 mg VK、4 mg VB1、7.2 mg VB2、60 mg 煙酸、14 mg 泛酸鈣、4 mg VB2、1.3 mg VB11、0.02 mg VB12、0.2 mg生物素和1 000 mg膽堿。營養水平為代謝能11.37%、粗蛋白質19.0%、賴氨酸0.97%、蛋氨酸0.58%、蛋氨酸+胱氨酸0.73%、鈣0.84%、總磷0.45%。按試驗設計進行飼喂，試驗在浙江省紹興市某鴨廠進行，飼料為顆粒料，自由飲水。定期打掃鴨舍并記錄試驗鴨死亡情況。

表1 基礎飼糧組成（風干） 單位：%

1.4 測定指標與方法

1.4.1 生長性能測定。各組以重復為單位分別在試驗期初和試驗期末測量雛鴨體質量，并計算各組雛鴨平均日增重（ADG）。

1.4.2 血清抗氧化指標測定。試驗期末，每個重復隨機抽取6只雛鴨，翅靜脈采血，室溫下靜置。采血后，以轉速3 000 r/min離心15 min，取上清液用離心管分裝并放置于-20℃保存備用。檢測雛鴨血清超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、過氧化氫酶（CAT）活性，丙二醛（MDA）的含量及總抗氧化能力（T-AOC）。測定方法均采用試劑盒法，操作時嚴格按照試劑盒說明書進行，采用華衛德朗DR-200BS酶標分析儀測定。

1.4.3 血清免疫指標測定。免疫球蛋白：取上述血清，采用試劑盒法檢測雛鴨血清免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）的含量。操作時嚴格按照ELISA檢測試劑盒說明書進行，采用酶標分析儀測定。細胞因子：均采用試劑盒法測定血清中干擾素-γ（IFN-γ）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-2（IL-2）、白細胞介素-4（IL-4）含量，采用華衛德朗DR-200BS酶標分析儀分析測定。

1.4.4 肝功能血清指標測定。取上述血清，采用試劑盒法，按說明書操作，用BT-21生化分析儀測定血清中總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、γ-谷氨酰轉移酶（GGT）含量及谷丙轉氨酶（ALT）和谷草轉氨酶（AST）活性。

1.5 數據統計分析

試驗所得數據用Excel 2013軟件進行整理，采用SPSS 20.0軟件進行單因素方差分析，采用獨立樣本t檢驗進行比較，以P＜0.05作為差異顯著判斷標準。試驗結果以“平均值±標準差”表示。

2 結果與分析

2.1 益生菌制劑對雛鴨生長性能的影響

由表2可知，試驗期初各組雛鴨體質量差異不顯著（P＞0.05）。與對照組相比，試驗組雛鴨試驗期末體質量和ADG均顯著提高（P＜0.05）。

表2 益生菌制劑對雛鴨生長性能的影響 單位：g

2.2 益生菌制劑對雛鴨血清抗氧化的影響

由表3可知，與對照組相比，試驗組雛鴨血清中T-AOC 顯著提高（P＜0.05），GSH-Px活性顯著提高（P＜0.05），MDA 含量顯著降低（P＜0.05），SOD 和 CAT活性均有提高但差異不顯著（P＞0.05）。

表3 益生菌制劑對雛鴨血清抗氧化的影響

2.3 益生菌制劑對雛鴨免疫功能的影響

由表4可知，與對照組相比，試驗組雛鴨血清IgA含量顯著提高（P＜0.05），IgM含量也有所提高但差異不顯著（P＞0.05）。由表5可知，與對照組相比，試驗組雛鴨血清TNF-α和IL-2含量顯著提高（P＜0.05），IFN-γ 含量也有提高但差異不顯著（P＞0.05）。

表4 益生菌制劑對雛鴨血清免疫球蛋白的影響單位：（g·L-1）

2.4 益生菌制劑對雛鴨肝功能的影響

由表6可知，與對照組相比，試驗組雛鴨血清中白蛋白（ALB）含量顯著提高（P＜0.05），γ-谷氨酰轉移酶（GGT）含量及谷草轉氨酶（AST）、谷丙轉氨酶（ALT）活性差異不顯著（P＞0.05）。

表6 益生菌制劑對雛鴨肝功能的影響

3 結論與討論

3.1 結論

試驗結果表明，在雛鴨飼料中添加益生菌制劑可以顯著提高雛鴨血清抗氧化能力，并對雛鴨的免疫功能和肝功能有積極作用。

3.2 討論

3.2.1 益生菌制劑對雛鴨生長性能的影響。生長性能可以直接反映動物的營養狀態，往往也決定著動物的健康狀況。外源菌群在腸道內的繁殖有助于菌群改善營養物質的利用能力[7]。益生菌能夠在腸道內分泌各種利于消化的酶類，同時利用營養物質合成短鏈的肽和脂肪酸，有助于對營養物質的消化吸收[8]。本試驗中，在雛鴨飼糧中添加益生菌制劑，提高了雛鴨的免疫能力，進而顯著提高了雛鴨28日齡體質量和ADG。

3.2.2 益生菌制劑對雛鴨血清抗氧化的影響。新陳代謝產生的有害物質，如脂質氧化終產物MDA以及可以消除生物體有害物質的活性物質SOD，都存在于血清中。總抗氧化能力（T-AOC）是反映生物體抗氧化能力的綜合指標[9]。田 浪等[10]通過在黃羽肉雞飼糧中添加復合益生菌，發現肉雞血清中T-AOC及總超氧化物歧化酶（T-SOD）和CAT的活性顯著提高。饒體宇等[11]也發現了益生菌可以提高蛋鴨血清中SOD和CAT活性、降低MDA含量并顯著提高T-AOC。本試驗中，與對照組相比，試驗組雛鴨血清的GSH-Px活性、T-AOC均顯著提高，MDA含量顯著降低，說明枯草芽孢桿菌與地衣芽孢桿菌之間存在協同作用，且二者均可以發酵產生中性蛋白酶并提高機體的抗炎癥能力[12]。本試驗通過降低雛鴨血清中MDA含量提高其抗氧化能力。

3.2.3 益生菌制劑對雛鴨免疫功能的影響。一般通過檢測機體免疫球蛋白的含量來檢驗機體免疫能力，且免疫球蛋白含量越高則反映機體免疫能力越強[13]。IgA是黏膜免疫的主要抗體，在非特異性免疫防護機制協助下，其具有減少病原微生物的重要功能[14-16]。袁慧坤等[17]證實在飼糧中添加復合菌顯著提高了肉鴨血清中IgG、IgA和IgM含量。機體血清中IL-2、IL-4、TNF-α和IFN-γ含量的高低可作為機體免疫功能強弱的指標[17]。本試驗中，與對照組相比，試驗組雛鴨血清中IgA含量顯著提高，芽孢桿菌產生有廣譜抗菌作用的抗菌肽，可以改善機體免疫能力[18]，而且IgA是黏膜免疫的主要抗體，說明枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌對于提高機體免疫力主要通過在黏膜免疫發揮作用。添加益生菌組與對照組相比，雛鴨血清TNF-α和IL-2含量顯著提高，說明益生菌可以增強體內細胞因子的活性，進而提高紹興鴨雛鴨機體免疫力。

3.2.4 益生菌制劑對雛鴨肝功能的影響。肝臟是動物消化、代謝、排泄、血液循環和解毒的重要器官。谷草轉氨酶（AST）、谷丙轉氨酶（ALT）通常是衡量肝功能的有效指標，當毒物或藥物性肝損害時，轉氨酶活力往往顯著增高[19]。Sheng等[20]研究表明，在美洲家鴨飼糧中添加納豆芽孢桿菌可顯著提高血清中谷草轉氨酶、谷丙轉氨酶和堿性磷酸酶含量。本試驗中，與對照組相比，試驗組雛鴨血清中白蛋白（ALB）含量提高。ALB是維持機體滲透壓平衡的蛋白[21]，其含量升高說明枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌提高了雛鴨的肝功能。其具體機制有待進一步探究。針對雛鴨其他轉氨酶的含量無顯著差異，可能是因為對照組和試驗組均飼喂常規飼料，雛鴨均未受到毒物以及藥物性肝損傷。