血清膜結(jié)合黏蛋白2與前列腺特異性抗原水平對乳腺癌診斷的臨床意義

劉慧敏，邵 華，姚壯凱，孫 巖

連云港市第二人民醫(yī)院甲乳外科，江蘇 連云港 222000

膜結(jié)合黏蛋白2（MUC2）是一種分泌性黏蛋白，在器官如胰腺、乳腺和前列腺的黏液癌中出現(xiàn)，Dhanisha 等［1］提出，血清黏蛋白水平升高可作為疾病診斷和預(yù)后的潛在標(biāo)志物。前列腺特異性抗原（PSA）目前作為特異性腫瘤標(biāo)記物用于診斷早期前列腺癌，研究顯示PSA 同樣存在于女性卵巢、乳腺等依靠激素調(diào)節(jié)的組織中，它在乳腺癌患者血清內(nèi)異常表達［2］，本研究通過檢測乳腺癌患者血清中MUC-2及PSA的濃度水平，旨在探討聯(lián)合檢測兩者作為乳腺癌患者早期診斷及篩查指標(biāo)的可行性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017 年6 月—2019 年6 月于連云港市第二人民醫(yī)院確診為乳腺癌的96 例患者作為試驗組，同時選取92 例乳腺良性疾病患者作為對照組，同時段選取93例體檢健康女性作為正常組，試驗組年齡28～60 歲，所有患者術(shù)前穿刺病理證實為乳腺浸潤性癌，術(shù)前均未接受任何新輔助放化療，內(nèi)分泌治療及靶向治療等，其中I期35 例，Ⅱ期47例，Ⅲ期及以上共14 例。對照組92 例患者均為乳腺良性疾病，包括乳腺纖維瘤，乳腺中重度增生，乳腺導(dǎo)管擴張等，排除急慢性乳腺炎患者。正常組88 例年齡22～65 歲，均為樣本醫(yī)院體檢健康正常人，入選標(biāo)準(zhǔn)為體檢前一個月內(nèi)無明顯感染史，均無自身免疫疾病病史等。

1.2 檢測方法

采用雙抗體夾心法測定血清MUC2 和PSA 水平，靜脈穿刺從三組人群中提取血液樣本，并在室溫下離心，離心后收集血清并立即在80 ℃冷凍直至析出。微滴度板分別預(yù)先涂上針對MUC2 和PSA 的抗體。三組人群用兩者特異性的生物素偶聯(lián)抗體加入到孔中。微滴板含有苯二烯，親和素偶聯(lián)到辣根過氧化物酶（HRP），分別加入到每孔中孵育。加入四甲基聯(lián)苯胺（TMB） 底物溶液后，含有MUC2、PSA、生物素偶聯(lián)抗體和酶偶聯(lián)親和素的孔出現(xiàn)顏色變化。采用全自動酶標(biāo)儀測定標(biāo)本血清中的MUC2 和PSA 濃度的吸光度（OD 值），確定血清中PSA 和MUC2 的濃度。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 19.0 軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用單因素方差分析進行計量資料的組間比較，采用ROC 曲線評估PSA 和MUC2 在乳腺癌中的診斷價值，比較對乳腺癌診斷的敏感性和特異性，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組人群血清PSA和MUC2的檢測結(jié)果

本研究顯示試驗組血清PSA、MUC2 的表達水平均高于對照組和正常組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。對照組和正常組血清中兩者的表達水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 三組人群血清PSA和MUC2的檢測結(jié)果（±s）

表1 三組人群血清PSA和MUC2的檢測結(jié)果（±s）

組別試驗組（n=96）對照組（n=92）正常組（n=93）P值PSA（ng/mL）0.267±0.068 0.149±0.017 0.135±0.024＜0.05 MUC2（μ/mL）65.66±4.15 23.88±6.22 23.12±3.67＜0.05

2.2 血清PSA和MUC2對女性乳腺癌診斷的ROC曲線及診斷價值分析。

計算Youden 指數(shù)=靈敏度+特異度-1，以Youden 指數(shù)最大切點為最佳臨界點，確定PSA 和MUC2 診斷乳腺癌的最佳臨界值，并計算曲線下面積（AUC），PSA 對乳腺癌診斷的ROC 曲線下面積約為0.80，診斷臨界值為1.79，敏感度64.3%，特異度68.2%（圖1），MUC2 對乳腺癌的ROC 曲線下面積約為0.90,診斷臨界值為1.95，敏感度83.3%，特異度70.2%（圖2）。

圖1 乳腺癌患者轎清PSA的ROC曲線

圖2 乳腺癌患者血清MUC2的ROC曲線

3 討論

膜結(jié)合蛋白作為細胞表面受體，參與各種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，研究表明黏蛋白在癌癥中的高分泌狀態(tài)是由于其獨特的糖基化模式，作為多種生長因子和細胞因子的結(jié)合平臺通過幾個信號級聯(lián)通路從而促進惡性細胞的增殖和轉(zhuǎn)移［3］。在乳腺導(dǎo)管腺癌中，膜結(jié)合蛋白（MUC1、MUC3、MUC4） 和分泌黏液蛋白（MUC2、MUC5AC、MUC5B、MUC6）均上調(diào)。一些研究揭示了黏蛋白的一些獨特作用，包括在整個乳腺癌進展過程中調(diào)節(jié)腫瘤細胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)，Rakha等［4］報告了MUC2表達與ER狀態(tài)呈顯著負(fù)相關(guān)，Patel等［5］發(fā)現(xiàn)，MUC2的表達陰性與組織學(xué)高分化分級相關(guān)，然而目前極少有研究報道MUC2 在乳腺癌患者血清中的表達水平，我們研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌患者血清中的MUC2 表達水平明顯高于乳腺良性疾病和正常人，而對照組和正常組之間差異均不明顯，這也符合MUC2 在乳腺癌組織中高表達的生物學(xué)特性，提示腫瘤細胞可能通過分泌黏蛋白穿透血管壁參與血液流通來促進腫瘤細胞的擴散及轉(zhuǎn)移。

PSA 作為KLKs 家族成員主要由前列腺合成，在性激素相關(guān)惡性腫瘤（前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、睪丸癌）的發(fā)生發(fā)展中起著刺激細胞生長及促血管形成，降解細胞基層的作用，廣泛用于前列腺癌的術(shù)前診斷及術(shù)后檢測。Toru Hanamura 等［2］報道稱乳腺癌患者的PSA 水平高于健康對照組，且乳腺癌患者術(shù)后血清PSA 水平低于術(shù)前檢測水平，提示血清中同樣可以檢測出自乳腺癌組織中PSA，本研究同樣發(fā)現(xiàn)乳腺癌患者血清PSA 水平稍高于對照組及正常組，但其敏感性及特異性均低于MUC2 組，ROC 曲線下面積可以反映診斷實驗的準(zhǔn)確度大小，一般認(rèn)為AUC值在0.5～0.7時準(zhǔn)確度較低,0.7～0.9時處于中等，大于0.9以上表明準(zhǔn)確度高，本實驗MUC2 （AUC）值為0.90，PSA（AUC）為0.80，說明MUC2 用于診斷乳腺癌的準(zhǔn)確度較PSA 高，PSA 作為早期乳腺癌的血清篩查指標(biāo)研究價值有待進一步深入探討。

本研究的局限性在于這是一個單指標(biāo)觀察性研究，MUC家族的其他黏蛋白水平并未被評估，此外分開檢測血清中的總PSA（T-PSA）和游離PSA（F-PSA）的濃度更能提高本次試驗的檢測效能，我們沒有考慮術(shù)前新輔助治療如（放化療、激素治療或靶向治療等）及穿刺活檢等創(chuàng)傷操作的影響，這些因素可能會影響試驗結(jié)果，進一步擴大樣本量聯(lián)合檢測MUC2 和PSA 的血清研究對兩者作為乳腺癌的早期診斷及篩查指標(biāo)更有說服力。