山東省市售酸棗仁飲片質量評價*

畢天琛，王 勁，王素香，趙丹彤，楊國寧

（1.山東省菏澤市食品藥品檢驗檢測研究院，山東 菏澤 274000；2.青島科技大學化工學院，山東 青島 266000）

酸棗仁為鼠李科植物酸棗Ziziphus ju jub aMill.var.spinosa（Bunge）Hu ex H.F.Chou的干燥成熟種子［1］，始載于《神農本草經》，具有補肝、寧心、鎮靜、催眠、斂汗、生津、降血壓、調血脂等功效，是治療心肝血虛之心悸、失眠的要藥［2-3］。國內外研究表明，酸棗仁藥材含有脂肪油類、皂苷類、黃酮類、生物堿類、三萜類等多種藥效化學組分［4-7］。酸棗仁藥食同源，市場需求大，為更好地評價其市售飲片質量，本研究中收集山東省市場36批次酸棗仁飲片，考察其性狀、顯微特征、薄層色譜特征及水分、總灰分和含量等項目，同時檢測黃曲霉毒素含量，以全面評價該飲片質量?，F報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；Waters e2695型高效液相色譜儀（美國Waters公司）；XS105型及AB104-S型電子分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）；Milli-Q Advantage A10型超純水儀（美國Millipore公司）。

1.2 試藥

酸棗仁皂苷A對照品（批號110734-201914，含量為96.0%），斯皮諾素對照品（批號111869-201704，含量為97.2%），均購自中國食品藥品檢定研究院。酸棗仁飲片36批次（批號見表1），其中酸棗仁8批次（S1-S8），炒酸棗仁28批次（C1-C28）。抽樣地域覆蓋全省16個地市，樣品來源包括醫療機構和零售單位，其中醫療機構28批次（77.78%），零售單位8批次（22.22%）。36批次飲片的標示生產企業來自全國8個省市，其中河北14批，安徽9批，山東8批，北京、廣東、江蘇、江西、甘肅各1批。甲醇、乙腈均為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

表1 酸棗仁飲片樣品批號Tab.1 Batch numbers of Ziziphi Spinosae Semen decoction pieces

2 方法與結果

2.1 抽驗結果

2.1.1 性狀

飲片樣品均呈扁圓形或扁橢圓形。表面紫紅或紫褐色，平滑有光澤。部分兩面均呈圓隆狀突起；部分一面稍平坦，有1條隆起的縱線紋；另一面稍凸起。一端凹陷，可見線形種臍；另一端有細小突起的合點。種皮較脆，子葉2，富油性。氣微，味淡。36批飲片樣品均符合標準規定。

2.1.2 鑒別

顯微鑒別：36批飲片樣品均具有標準規定的顯微特征?？梢姺N皮柵欄細胞表面觀呈多角形，側面觀呈長條形，底面觀呈類方形；子葉表皮細胞內可見細小草酸鈣簇晶和方晶。

薄層色譜鑒別：1）取酸棗仁皂苷A和酸棗仁皂苷B對照品各適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL各含1 mg的混合對照品溶液。取飲片樣品粉末1 g，精密稱定，加甲醇30 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.5 mL使溶解，即得供試品溶液。精密吸取上述溶液各5μL，點于同一硅膠G薄層板上，以水飽和的正丁醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，置日光下檢視。供試品溶液色譜中，在與混合對照品溶液相應位置上顯相同的深（綠）色斑點（詳見圖1）。2）取斯皮諾素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的對照品溶液。取酸棗仁對照藥材1 g，精密稱定，加石油醚（60～90℃）30 mL，加熱回流2 h，濾過，棄去石油醚液，藥渣揮干，加甲醇30 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，濾過，取續濾液，即得對照藥材溶液。取飲片樣品粉末1 g，同對照藥材溶液制備方法，制備供試品溶液。精密吸取上述溶液各2μL，點于同一硅膠G薄層板上，用水飽和的正丁醇為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液和對照品溶液相應位置上顯相同顏色斑點（詳見圖2）。36批樣品均符合標準規定。

2.1.3 檢查

水分：按照2020年版《中國藥典（四部）》通則0832［8］114-115水分測定法進行測定。結果酸棗仁飲片樣品水分含量集中在4.7%～7.4%，均低于9.0%的限度；炒酸棗仁飲片樣品水分含量集中在4.8%～6.1%，均低于7.0%的限度。詳見圖3 A?？梢?，除了1批次酸棗仁飲片樣品水分含量較高外，酸棗仁和炒酸棗仁飲片樣品水分含量整體分布接近，說明炮制未使酸棗仁中水分含量明顯降低。

總灰分：按2020年版《中國藥典（四部）》通則2302［8］234灰分測定法進行測定。結果酸棗仁飲片樣品總灰分含量集中在1.8%～3.8%，均低于7.0%的標準；炒酸棗仁飲片樣品總灰分含量集中在1.4%～3.4%，均低于4.0%的標準規定。詳見圖3 B?？梢?，酸棗仁和炒酸棗仁飲片樣品總灰分含量均較低（低于4.0%），炒酸棗仁飲片樣品總灰分含量總體低于酸棗仁飲片樣品?？赡芤驗榕谥七^程減少了酸棗仁表面黏附或摻雜的無機雜質。

2.1.4 酸棗仁皂苷A含量測定

色譜條件：色譜柱為Agilent ZORBAXC18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相為乙腈（A）-水（B），梯度洗脫（0～15 min時20%A→40%A，15～28 min時40%A，28～30 min時40%A→70%A，30～32 min時70%A→100%A）；蒸發光散射檢測器檢測；流速為1.0 mL/min；檢測波長為335 nm；柱溫為25℃；進樣量為10μL。

溶液制備：取酸棗仁皂苷A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成質量濃度為0.1 mg/mL的對照品溶液。取飲片樣品粉末（過四號篩）1 g，置索氏提取器中，加石油醚（60～90℃）適量，加熱回流4 h，棄去石油醚液，藥渣揮去溶劑，轉移至錐形瓶中，加70%乙醇20 mL，加熱回流2 h，濾過，濾渣用70%乙醇5 mL洗滌，合并洗液和濾液，回收溶劑至干，殘渣加甲醇溶解并定容至5 mL，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

方法學考察：1）系統適用性試驗，精密吸取上述2種溶液各適量，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄色譜圖；供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相同保留時間處有吸收峰，理論板數按酸棗仁皂苷A峰計應不低于2 000，分離度均大于1.5，基線分離良好（見圖4）。2）線性關系考察，取對照品溶液適量，按擬訂色譜條件進樣測定，結果酸棗仁皂苷A進樣量在0.010 2～10.21μg范圍內與峰面積線性關系良好（r=0.999 5，n=5）。3）精密度、穩定性、重復性試驗結果的R S D均小于1.60%。4）平均加樣回收率為99.05%，R SD為1.64%（n=6）。

含量測定：按2020年版《中國藥典（一部）》酸棗仁項下規定進行檢驗。結果顯示，36批次飲片樣品中酸棗仁皂苷A含量測定結果均大于0.030%，合格率100.00%。酸棗仁、炒酸棗仁飲片樣品中酸棗仁皂苷A的含量分別為0.077%～0.143%和0.077%～0.140%，且整體水平接近，集中在0.090%～0.130%。詳見圖5。

2.1.5 斯皮諾素含量測定

色譜條件：梯度洗脫程序，0～10 min時12%A→19%A；10～16 min時19%A→20%A；16～22 min時20%A→100%A；22～30 min時100%A；采用紫外-可見分光光度計檢測；其余同酸棗仁皂苷A含量測定色譜條件項。

溶液制備：取斯皮諾素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成質量濃度為0.2 mg/mL的對照品溶液；供試品溶液同酸棗仁皂苷A溶液制備項。

方法學考察：1）系統適用性試驗，精密吸取上述2種溶液各適量，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相同保留時間處有吸收峰，理論板數按斯皮諾素峰計應不低于2 000，分離度均大于1.5，基線分離良好（見圖6）。2）線性關系考察，取對照品溶液適量，按擬訂色譜條件進樣測定，結果斯皮諾素進樣量在0.019 7～19.73μg范圍內與峰面積線性關系良好（r=0.999 0，n=5）。3）精密度、穩定性、重復性試驗結果的R S D均小于1.30%。4）平均加樣回收率為97.19%，RSD為1.33%（n=6）。

含量測定：按2020年版《中國藥典（一部）》酸棗仁項下規定進行檢驗。結果顯示，36批次飲片樣品中斯皮諾素含量測定結果均大于0.080%，符合規定。其中酸棗仁、炒酸棗仁飲片樣品中斯皮諾素的含量分別為0.098%～0.126%和0.095%～0.275%。詳見圖7。可見，炒酸棗仁飲片樣品中斯皮諾素含量整體大于酸棗仁，且集中在0.100%～0.150%。

2.2 綜合分析

層次聚類分析：將酸棗仁和炒酸棗仁樣品水分、總灰分、酸棗仁皂苷A和斯皮諾素含量測定數據輸入悟空平臺（https：//www.omicsolution.com/wkomics/main/），進行層次聚類分析（HCA），數據進行標準化處理。結果見圖8?？梢姡?6批次樣品被聚為兩類，S2、S4、C4、C5、C6、C7、C8、C14、C19、C20、C21、C23、C24、C25、C27、C28被聚為一類，其余20批次飲片樣品被聚為另一類。8批次酸棗仁和28批次炒酸棗仁均未被聚為同一類，說明酸棗仁和炒酸棗仁在水分、總灰分、酸棗仁皂苷A和斯皮諾素含量無明顯差異，故不能通過這4個檢驗項目對酸棗仁、炒酸棗仁進行區分。

相關性分析：采用SPSS 22.0統計學軟件對36批次飲片樣品中水分、總灰分、酸棗仁皂苷A和斯皮諾素含量等數據進行相關性分析，詳見表2。結果顯示，酸棗仁皂苷A和斯皮諾素含量測定結果呈正相關，推測兩種活性物質在生物代謝過程中具有相關性，但需進一步研究。水分、總灰分與其他項目均無相關性。

2.3 探索性研究及分析

2020年版《中國藥典（一部）》酸棗仁和炒酸棗仁飲片現行標準中對黃曲霉毒素未作規定。為考察2種飲片黃曲霉污染情況，參照2020年版《中國藥典（四部）》黃曲霉毒素測定法第二法［8］280-281對36批次飲片樣品黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素B2、黃曲霉毒素G1和黃曲霉毒素G2含量進行測定。結果見圖9。

2020年版《中國藥典（一部）》中酸棗仁藥材項［1］下黃曲霉毒素限度規定，每1 000 g含黃曲霉毒素B1不得超過5μg，含黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素B2、黃曲霉毒素G1和黃曲霉毒素G2的總量不得超過10μg。結果顯示，大部分樣品中黃曲霉毒素含量較低，8批次酸棗仁飲片樣品均合格，但有2批次炒酸棗仁飲片樣品不合格，提示炒酸棗仁飲片樣品貯藏中存在被黃曲霉毒素污染的風險。

3 討論

我省流通使用環節所用酸棗仁飲片總體質量情況良好，按2020年版《中國藥典（一部）》規定，抽檢合格率100.00%。但仍存在兩方面問題：一是探索性研究結果顯示，2批炒酸棗仁飲片樣品中黃曲霉毒素B1及黃曲霉毒素總量超標；二是部分炒酸棗仁水分含量較高，接近標準規定限度要求。對此，建議加強各個環節的環境監控，飲片生產企業優化炮制工藝，增加酸棗仁飲片黃曲霉毒素含量規定，以進一步規范酸棗仁飲片質量，提高其使用安全性。