蒙藥肉蔻-5味丸對抑郁模型大鼠氨基酸類神經遞質的影響

白龍棠　呼日樂巴跟　烏蘭　宏梅　烏日汗

【摘 要】 目的：觀察肉蔻-5味丸對抑郁模型大鼠氨基酸類神經遞質的影響，探討其抗抑郁作用機制，為肉蔻-5味丸臨床應用提供科學依據。方法：將60只SD雄性健康大鼠按體重隨機分為正常組，模型組，肉蔻-5味丸高、中、低劑量組，氟西丁對照組6組，每組為10只大鼠。采用慢性輕度不可預知溫和刺激結合孤立飼養方法建立抑郁模型。用體重增長情況、糖水消耗實驗、Open-field敞箱實驗等行為學方法評價抑郁模型成功與否。實驗第一天開始造模同時給藥，經28d刺激后取血、海馬組織，采用ELISA技術檢測大鼠海馬/血清谷氨酸（Glu）和γ-氨基丁酸（GABA）的水平。結果：與正常組比較，模型組體重增長緩慢，糖水消化量明顯減少，Open-Field敞箱實驗水平、垂直活動得分均明顯降低，海馬/血清Glu含量顯著升高，GABA含量降低。與模型組比較，氟西丁對照組和蒙藥組均有不同程度抑郁模型大鼠行為學改變，肉蔻-5味丸中、高劑量組具有明顯的降低Glu水平、提高GABA水平。結論：蒙藥肉蔻-5味丸對抑郁模型大鼠氨基酸類神經遞質具有調節作用，調節抑郁模型大鼠氨基酸類神經遞質含量可能是其抗抑郁作用機制之一。

【關鍵詞】 蒙藥肉蔻-5味丸;抑郁模型大鼠;氨基酸類神經遞質

【中圖分類號】R29 【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2022）14-0031-05

Thesis Topic：Effects of Mongolian Medicine Cardamom-5 Wei Wan on Serum Amino Acid Neurotransmitters in Depression Model Rats

BAI Longtang¹Hurilebagen²Wulan^2*HONG Mei²Wurihan²

1.Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical University，Huhehot 010050，China;2.Inner? Mongolia? Medical University，Huhehot 010110，China

Abstract：Objective To observe the effect of Mongolian medicine Cardamom-5 Wei Wan on serum amino acid neurotransmitters in depression model rats， further explore the mechanism of antidepressant action， and provide scientific basis for its clinical application. Methods 60 healthy SD male rats were randomly divided into 6 groups according to their weight：normal group， model group， high dose group， medium dose group， low dose group and western medicine control group， with 10 rats in each group. Chronic mild unpredictable stimulation combined with isolated feeding was used to establish a depression model. The success or failure of the depression model was evaluated by behavioral methods such as sugar water consumption experiment and open-box experiment. On the first day of the experiment， the model was made and drugs were administered. After 28 days of stimulation， blood and hippocampal tissue were taken. The contents of amino acids such as Glu and GABA in hippocampus， serum were detected by ELISA. Methods：60 SD male healthy rats were randomly divided into six groups according to their body weight：blank control group， model group， Mongolian medicineCardamom-5 Weiwan high dose group， middle dose group， low dose group and Western medicine control group， with 10 rats in each group. The depression model was established by chronic mild unpredictable stimulation combined with isolated feeding. The success of depression model was evaluated by behavioral methods such as sugar water consumption experiment and open field open box experiment. After 28 days stimulation， blood and hippocampal 0tissue were taken. The contents of amino acid neurotransmitters such as Glu and GABA in hippocampus， serum were detected by ELISA. ResultsCompared with the normal group， the glucose digestion amount of the model group was significantly reduced， the horizontal and vertical activity scores of the open-box experiment were decreased， the hippocampal/serum Glu content was increased， and the GABA content was decreased. Compared with the model group， the western medicine group and the Mongolian medicine group both improved the behavioral changes of the depression model rats to varying degrees， while the middle and high dose Mongolian medicine groups significantly reduced the content of Glu and increased the content of GABA. Conclusion The Mongolian medicine Cardamom-5 Weiwan has a regulatory effect on amino acid neurotransmitters in depression model rats， and regulating the content of amino acid neurotransmitters in depression model rats may be one of its mechanisms of antidepressant action.

Key words：Mongolian Medicine Cardamomi-5 Wei Wan; Depression Model Rat; Amino Acid Neurotransmitter

抑郁癥（depression）是以持續的興趣減退、情感低落為核心癥狀的精神類疾病之一。抑郁癥病程緩慢，發作至少持續2周，病程遷延，反復發作，致殘率高^[1]。據統計首發患者85%左右會在未來10年內反復發作，終身患病率約為20%，約15%～25%患者最終轉變為難治性抑郁癥。因其悲觀厭世，嚴重者有自殺觀念和行為，有10%～15%的抑郁癥患者最終死于自殺^[2]。隨著經濟文化的快速發展和競爭壓力的急劇增加，抑郁癥的患病率呈逐年上升。據世界衛生組織統計，預計到2030年抑郁癥可能成為嚴重威脅人類健康的第二大疾患，增加社會經濟負擔的第一大疾病。抑郁癥不僅影響著患者的日常生活，且對家庭和社會帶來巨大的經濟損失^[3]。因此研究其發病機制、有效預防和積極治療已成為廣大科研工作者和醫護人員面臨的重大課題。

現代醫學認為抑郁癥發病機制復雜，為多種因素導致綜合性疾病。目前臨床上常用的抗抑郁西藥雖然有一定的臨床療效，但也有不良反應多、療效欠佳和耐藥等局限性^[4]。近年來越來越多的研究顯示，氨基酸類神經遞質如谷氨酸（glutamate， Glu）與γ-氨基丁（gammaaminobutyric acid，GABA）等在抑郁、焦慮、失眠等精神類疾病發病機制及治療中的作用^[5]，越來越引起人們的關注。

蒙醫學對抑郁癥有獨特的認識，多年的臨床實踐表明用蒙藥治療抑郁癥療效顯著。根據對抑郁癥發病誘因、臨床癥狀和病情轉歸的認識，抑郁癥是蒙醫赫依、巴達干偏旺導致三根平衡失調，影響心、白脈、腦而引起的一系列癥狀。在蒙醫學抑郁癥歸屬于“心思病”范疇的疾病^[6]。蒙醫治療抑郁癥以調節三根，鎮心臟赫依，寧心、安神為原則。蒙藥肉蔻-5味丸是具有鎮赫依、寧心、安神等作用的臨床常用的復方制劑^[7]。研究表明，肉蔻-5味丸對CUMS大鼠5-HT、DA、EA等含量具有一定調節作用^[8]。但尚無研究肉蔻-5味丸對氨基酸類神經遞質的影響。

本研究為進一步了解氨基酸類神經遞質在抑郁癥中的作用和探索肉蔻-5味丸治療抑郁癥的作用機制，觀察其抑郁模型大鼠海馬/血清中Glu、GABA的影響，現報告如下。

1 儀器與材料

1.1 動物 SD雄性健康大鼠60只，體重180±20g。購于北京維通利華實驗動物技術有限公司，許可證號：SCXK（京）：2016-0002。

1.2 材料 肉蔻-5味丸（批號：M13010062，內蒙古自治區國際蒙醫醫院制劑中心），氟西丁（國藥準字：J20160029，禮來制藥有限公司），谷氨酸ELASA試劑盒（批號：20911202，南京建成）、γ-氨基丁酸ELASA試劑盒（批號：L91292625，南京建成），水合氯醛（批號：RH127070、上海羅恩）;

1.3 儀器 自制敞箱實驗設備：制作正方形立柱箱一個，長×寬×高為80cm×80cm×80cm，底面為一個正方形，有9個小方格組成，箱體四壁均為黑色。EPOCH型酶標儀（BioTeK廠家）;BCD-186型超低溫冰箱;TGL-16C型臺式離心機;AJC-0501-P純水儀;TL-420D水浴鍋;PL-203型號電子天秤。

2 方法

2.1 動物分組 將60只SD大鼠適應性喂養1周后參考體重及糖水消耗量隨機分為6組，分別為正常組，模型組，氟西丁對照組，肉蔻-5味丸高、中、低劑量組，每組為10只。

2.2 給藥方法與劑量 造模第1天開始對各組大鼠灌胃給藥，除正常組和模型組給予等體積的蒸餾水外，肉蔻-5味丸高、中、低劑量組分別給予肉蔻-5味丸1.6g/kg、0.8g/kg、0.4g/kg，對照組給予氟西汀3.6mg/kg。按1.0mL/100g體積灌胃，連續28d，每日同一時間給藥。

2.3 造模 由慢性輕度不可預知溫和刺激（CUMS）配合孤養法復制抑郁動物模型。除了正常組外，其余組大鼠均單籠孤養，并給予連續28d的不同刺激（包括：24h禁食水、黑白顛倒12h、4℃冰水游泳4min、40℃高溫環境6min、平行搖擺、夾尾1min、潮濕墊料、傾斜鼠籠45°等）;每天隨機刺激1次，同樣刺激不連續使用，每種刺激28d內不超過使用3次。

2.4 評價模型復制

2.4.1 體重變化 各組大鼠實驗前、實驗14d和28d同一個時間點測量每個大鼠體重。抑郁模型大鼠食欲減退，體重增長緩慢。因此，根據體重增長快慢來評價抑郁模型成功與否的標準。

2.4.2 1%蔗糖水消耗量 各組大鼠實驗前、實驗14d和28d，禁水24h后，每只大鼠給予1%蔗糖水100mL，計算大鼠1h內飲用蔗糖消耗量。糖水消耗量多說明大鼠快感好，該實驗檢測大鼠快感反應。

2.4.3 Open-field自主活動 采用自制箱體，規格為80cm（長）×80cm（寬）×80cm（高），箱內壁為黑色，底面劃分為大小相等的16個等邊方格，記錄大鼠在3min內水平和垂直活動得分（以大鼠前兩只腿穿越敞箱底面格數為水平活動評分，以前兩只腿直立次數為垂直活動評分）。水平活動得分反應大鼠自主活動能力，垂直活動得分反應大鼠好奇及探索能力。

2.5 標本制備與檢測 連續28d刺激，同時藥物干預，第29天實驗結束后，用10%水合氯醛麻醉大鼠（劑量為0.3mL/100g）， 取腹主動脈血后，3000r/min速度離心后取血清快速冷凍。采用ELISA技術，按照試劑盒說明測試海馬組織/血清中Glu和GABA含量。

2.6 數據統計處理 數據采用SPSS 24.00數據統計軟件分析，數據以（x±s）表示，選用單因素方差分析，以P<0.05為有統計學差異。

3 結果

3.1 體重變化的比較 與正常組比較，模型組大鼠體重增長在第2、4周時較慢（P<0.05，P<0.01）;與模型組比較，西藥組和蒙藥肉豆蔻-5味丸中、高劑量組大鼠體重增長較快（P<0.05，P<0.01），低劑量組的體重增長較慢，差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

3.2 1%蔗糖水消耗量變化情況比較 與正常組比較，模型組大鼠1%蔗糖水消耗量在第2、4周時較少（P<0.05，P<0.01）;與模型組比較，西藥組和蒙藥肉豆蔻-5味丸中、高劑量組大鼠1%蔗糖水消耗量顯著多（P<0.05）。見表2。

3.3 Open-Field自主活動情況比較 與正常組比較，模型組大鼠水平運動和垂直運動得分較低（P<0.01）;與模型組比較，西藥組和蒙藥肉豆蔻-5味丸中劑量組水平運動得分較高（P<0.01），肉豆蔻-5味丸高劑量組水平和垂直運動得分較高（P<0.05）。見表3。

3.4 肉蔻-5味丸對大鼠Glu、GABA含量的影響 與正常組比較，模型組大鼠海馬/血清里Glu含量較高（P<0.01），GABA含量較低（P<0.05）;與模型組比較，蒙藥肉豆蔻-5味丸中、高劑量組大鼠海馬和血清里Glu含量較低（P<0.01），GABA含量較高（P<0.05），肉豆蔻-5味丸低劑量組無顯著差異（P>0.05）。見表4。

4 討論

抑郁癥是一種情感障礙性疾病，其發病與遺傳、社會環境因素、心理、生物化學等眾多因素有關。社會環境和心理因素可能是誘發抑郁癥的主要原因之一。根據其發病誘因，現在已有很多種抑郁動物模型應用于研究抑郁癥的生物學機制。其中慢性輕度不可預知溫和刺激（CUMS）高度模擬人類抑郁癥的誘發因素。CUMS是抑郁癥的發病機制和抗抑郁作用機理研究中最廣泛實用的動物模型之一^[9]。實驗采用CUMS配合孤養造模，觀察體重變化、1%蔗糖水消耗量和Open-Field敞箱實驗垂直及平行得分情況分別反應抑郁模型動物體重減輕，快感缺乏和自主活動及探索能力等行為學方法評價CUMS大鼠模型成功與否。結果顯示，應激刺激前，各組間大鼠體重、糖水消耗量、Open-Field敞箱自主活動均無顯著性差異。應激刺激后，與正常組比較，模型組體重增長緩慢，糖水消耗量、敞箱實驗水平活動格數和垂直活動次數均明顯減少，說明抑郁模型復制成功。與模型組比較，應激刺激后，氟西汀組和肉蔻-5味丸組，體重增長明顯，糖水消耗量、Open-Field敞箱自主活動均有所改善，說明肉蔻-5味丸具有抗抑郁作用，與以往的研究結果一致。

隨著抑郁癥發病機制研究的不斷深入，發現其不僅與遺傳、社會心理因素有關，并且與大腦神經生物化學密切相關。根據其發病的神經生物化學基礎，提出了很多科學假說，其中“單胺類神經遞質”是在抑郁癥的發病機制中最早提出的且相對主導地位的科學假說^[10]。臨床上常用的抗抑郁藥物大部分都基于該假說而研發的，這些藥物僅對50%～60%的患者有效。其次，服用這些藥雖然體內單胺類神經遞質含量立即上升，但其抗抑郁作用有臨床滯后現象^[11]，說明抑郁癥的發病機制不僅與單胺類神經遞質水平有關，可能其他類神經遞質也參與了抑郁癥發病機制。文獻^[12]報道，越來越多研究證明，氨基酸類神經遞質如谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）也參與到抑郁癥的發病機理中，氨基酸類神經遞質Glu是中樞神經系統中廣泛存在的，人體內最主要的興奮性神經遞質，對維持神經元的興奮與正常活動具有重要意義，其功能為參與感覺傳遞、運動控制、高級皮層功能等過程。GABA屬于抑制性神經遞質，其合成主要來自于Glu代謝，谷氨酸脫羧酶是GABA的重要生物合成酶。GABA具有抗焦慮、調節內分泌作用^[13]。研究^[14]顯示，抑郁癥患者血和腦組織內興奮性神經遞質Glu含量與正常對照組比較明顯升高，而抑制性神經遞質GABA含量下降。Glu的上升水平及GABA 的下降水平與抑郁程度呈正相關，且經藥物治療干預后、Glu水平下降，GABA含量增加^{[15 ]}。說明抑郁癥發作與Glu和GABA等氨基酸類神經遞質有關。實驗結果顯示：與正常組比較，抑郁癥模型大鼠海馬及血清中Glu含量比正常組明顯高，GABA含量比正常組顯著降低，這結果符合以往的研究結果，說明氨基酸類神經遞質異常可能是抑郁癥發病機制之一。與模型組比較，肉蔻-5味丸高、中劑量組海馬/血清Glu含量降低，肉蔻-5味丸高劑量組海馬/血清GABA含量增多（P<0.05）。說明：肉蔻-5味丸中、高劑量具有明顯的降低Glu含量，不同程度提高GABA含量作用。肉蔻-5味丸調節抑郁模型大鼠氨基酸類神經遞質含量可能是其抗抑郁作用機理之一。與模型組比較，西藥氟西丁組Glu和GABA含量無顯著性差異（P>0.05）。氟西汀抗抑郁作用可能與氨基酸類神經遞質無關。

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（收稿日期：2021-11-29 編輯：劉 斌）