腎茶飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

林青華　張永怡　周慧　蔣林

【摘 要】 目的：完善腎茶飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：參照2020年版《中國藥典》（四部）中規(guī)定的方法，對(duì)不同產(chǎn)地的10批腎茶飲片進(jìn)行性狀、顯微、薄層鑒別（TLC）及水分、灰分、浸出物測定，并采用高效液相色譜法（HPLC）測定其迷迭香酸的含量。結(jié)果：腎茶飲片各鑒別方法專屬性強(qiáng)，初步擬定腎茶飲片的水分、總灰分及酸不溶性灰分的含量分別不得高于15.0%、11.0%、0.6%，水溶性浸出物、迷迭香酸的含量分別不得低于17.0%、0.16%。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)為完善腎茶飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了參考及依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 腎茶飲片;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);定性鑒定;定量分析;迷迭香酸

【中圖分類號(hào)】R284 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2022）14-0057-04

Study on Quality Standard for Decoction Pieces of Orthosiphon Stamineus

LIN Qinghua^1，2ZHANG Yongyi¹ZHOU Hui¹JIANG Lin^1，2*

1.College of Pharmacy，Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530200， China;

2.Guangxi Zhuang Yao Medicine Center of Engineering and Technology，Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530200，China

Abstract：Objective To improve the quality standards for decoction pieces ofOrthosiphon stamineus by qualitative and quantitativeresearch. Methods The identification of character，microscopy and TLC，as well as the test of water，total ash，acid insoluble ash and water soluble extracts were performed for 10 batches of Orthosiphon stamineus from different origins according to Pharmacopoeia of the People's Republic of China：Volume IV，2020 Edition. In addition，the contents of rosmarinic acid in Orthosiphon stamineus was determined by HPLC. Results The identification methods of Orthosiphon stamineusdecoction pieces have strong specificity. The preliminarily proposed contents of water，total ash and acid insoluble ash were no more than 15.0%，11.0% and 0.6%，while the preliminarily proposed contents of water soluble extracts and rosmarinic acid were no less than 17.0% and 0.16%，respectively. Conclusion The established quality standards for decoction pieces of Orthosiphon stamineus can be used for its quality control and evaluation.

Key words：Decoction Pieces of Orthosiphon Stamineus;Quality Standard;Qualitative Identification;Quantitative Analysis;Rosmarinic Acid

腎茶，又名貓須草，為唇形科植物腎茶Clerodendranthus spicatus（Thunb）C.Y.Wu ex H.W.Li的干燥地上部分，具有清熱祛濕、排石通淋的功效^[1]。腎茶含有黃酮、酚類、萜類、揮發(fā)油等多種化學(xué)成分，具有調(diào)節(jié)腎功能、利尿排石、抗炎、抗菌等多種藥理活性^[2-3]，開發(fā)前景廣闊。然而，腎茶飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并不完善，其中安徽^[4]、云南^[5]、四川^[6]的飲片標(biāo)準(zhǔn)缺失“灰分”和“含量測定”，湖南^[7]的飲片標(biāo)準(zhǔn)缺失“水分”“灰分”和“含量測定”，福建^[8]、寧夏^[9]的飲片標(biāo)準(zhǔn)僅有“性狀”要求，這不利于質(zhì)量控制和產(chǎn)品開發(fā)。本文按2020年版《中國藥典》（四部）通則（下文簡稱藥典）中的相關(guān)規(guī)定^[10]，對(duì)不同產(chǎn)地的10批腎茶飲片進(jìn)行定性鑒別與定量研究，以期為完善腎茶飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考與依據(jù)。

1 材料

1.1 藥材 10批腎茶藥材經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物教研室朱意麟老師鑒定為唇形科植物腎茶Clerodendranthus spicatus（Thunb）C. Y.Wu ex H. W. Li的干燥地上部分，具體見表1。迷迭香酸對(duì)照品（批號(hào)MUST-19053107，純度>98.0%）購于中國科學(xué)院成都生物研究所。

1.2 儀器與試劑 Agilent-1260高效液相色譜儀（美國Agilent公司），UltimateXB-C₁₈色譜柱[月旭科技（上海）股份有限公司]，乙腈[賽默飛世爾科技（中國）有限公司]，Direct-Q5UV超純水儀一體機(jī)（廣西南寧博美生物科技有限公司），DMB-1223型生物顯微鏡（麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司），ME204E型電子分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司），KQ-500E超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司），硅膠G板（青島海洋化工有限公司），甲醇、甲苯、甲酸、乙酸乙酯、水合氯醛、磷酸等均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀鑒別 10批腎茶藥材噴淋適量清水軟化，切長段，干燥;按藥典“0212藥材和飲片檢定方法”對(duì)其進(jìn)行描述。本品為不規(guī)則的段、莖、葉混合。莖呈四棱形或類圓形，直徑0.2～1.5 cm，外表皮紫褐色，有細(xì)縱線，有的有分支，切面周圍黃白色至淺綠色，髓部類白色。葉對(duì)生，褐綠色，多破碎，完整者展平后呈卵形或卵狀披針形，長2～5 cm，寬1～3 cm，兩面呈黃綠色或暗綠色，葉脈紫褐色，均有小柔毛，先端尖，基部楔形，中部以上葉片邊緣鋸齒狀，葉柄長約2 cm。輪傘花序偶見。氣微，味微苦。具體如圖1所示。

2.2 顯微鑒別 按藥典“2001顯微鑒別法”對(duì)腎茶飲片的粉末進(jìn)行鑒別。本品粉末呈綠褐色。表皮細(xì)胞類圓形或類方形，可見不定式氣孔。非腺毛較多，單細(xì)胞，散在，多碎斷，完整者基部細(xì)胞粗短膨大，壁較厚，有疣狀突起，長85～175 μm。薄壁細(xì)胞內(nèi)含草酸鈣簇晶，常排列成行，也有的單個(gè)散在，直徑8～18 μm。可見螺紋或環(huán)紋導(dǎo)管，以螺紋導(dǎo)管為主，常見于葉肉細(xì)胞中。偶見棕色塊，類圓形，顏色深淺不一。如圖2所示。

2.3 薄層鑒別 取腎茶飲片粗粉0.5 g，加甲醇10 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。取迷迭香酸對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照藥典“0502薄層色譜法”規(guī)定，吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5∶3∶0.8）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各供試品、對(duì)照品在硅膠G板的相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，但各樣品迷迭香酸的斑點(diǎn)深淺不一，說明其含量不盡相同。如圖3所示。

2.4 水分、灰分和浸出物的測定 按照藥典“0832水分測定法（烘干法）”“2302灰分測定法”“2201浸出物測定法（水溶性浸出物，熱浸法）”對(duì)其水分、總灰分、酸不溶性灰分及水溶性浸出物進(jìn)行測定。檢測結(jié)果，具體見表2。根據(jù)極值上、下浮動(dòng)20%的原則，擬定腎茶飲片的水分、總灰分和酸不溶性灰分含量分別不得超過15.0%、11.0%、0.6%，水溶性浸出物含量不得低于17.0%。

2.5 含量測定

2.5.1 對(duì)照品溶液的制備 取迷迭香酸適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液，即得。

2.5.2 供試品溶液的制備 取腎茶飲片粉末（過五號(hào)篩）約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50%甲醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理0.5 h，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足損失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.5.3 色譜條件 UltimateXB-C₁₈色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），乙腈-0.1%磷酸水溶液（25∶75）為流動(dòng)相，流速1 mL/min，進(jìn)樣量10 μL，柱溫35℃，檢測波長330 nm。

2.5.4 線性關(guān)系考察 精密吸0.5 mL、1 mL、3 mL、5 mL、7 mL、10 mL“5.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液分別置10 mL容量瓶中，50%甲醇定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液按“5.3”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)，計(jì)算迷迭香酸的回歸方程為Y=28251 X-15.812（r=0.9996），說明迷迭香酸在118.72～4.24 μg/mL的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。對(duì)照品及供試品的高效液相色譜圖。如圖4所示。

2.5.5 精密度考察 取“5.4”項(xiàng)下同一濃度對(duì)照品溶液，按“5.3”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，按峰面積計(jì)算迷迭香酸的相對(duì)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.46%，說明儀器精密度良好。

2.5.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批腎茶飲片樣品按“5.2”項(xiàng)下方法，平行制備6份供試品，按“5.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，按峰面積計(jì)算迷迭香酸RSD =0.66%，說明該方法重復(fù)性良好。

2.5.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液，于0、2、4、8、12、24 h按“5.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，按峰面積迷迭香酸RSD =1.53%，說明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5.8 加樣回收試驗(yàn) 取已知迷迭香酸含量的腎茶飲片樣品，分別加入定量的迷迭香酸對(duì)照品，按“5.2”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品，按“5.3”項(xiàng)下色譜方法進(jìn)樣，計(jì)算迷迭香酸的平均回收率為99.32%，RSD=1.61%，說明供試品的制備方法能將腎茶飲片中的迷迭香酸提取完全。

2.5.9 樣品含量測定 按“5.2”項(xiàng)下方法制備各批腎茶飲片的供試品溶液，根據(jù)“5.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算其迷迭香酸的含量。結(jié)果表明，10批腎茶飲片的迷迭香酸的含量為1.05%～0.05%。具體見表3。鑒于SC10樣品的迷迭香酸含量過低，舍棄，故按迷迭香酸含量下限值（0.19%）的80%制訂限量標(biāo)準(zhǔn)，擬定腎茶飲片中迷迭香酸的含量不得低于0.16%。

3 討論

迷迭香酸具有抑制和改善大鼠草酸鈣型腎結(jié)石的作用^[11-12]，其與腎茶排石通淋的功效相一致，故本文以迷迭香酸為對(duì)照品進(jìn)行薄層鑒別和含量測定。

本文在優(yōu)選薄層色譜展開劑的過程中，對(duì)石油醚/環(huán)己烷-乙酸乙酯、二氯甲烷/氯仿-甲醇、甲苯-乙酸乙酯等展開系統(tǒng)進(jìn)行了考察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5∶3∶0.8）為展開劑時(shí)，薄層展開效果最好，迷迭香酸對(duì)照品的比移值適中，供試品斑點(diǎn)分離明顯，故選此為展開劑進(jìn)行薄層鑒別。

為優(yōu)選含量測定過程中最佳的供試品制備方法，本文對(duì)提取溶劑、料液比、提取方法、提取時(shí)間和提取次數(shù)進(jìn)行考察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，100倍量50%甲醇超聲提取腎茶飲片0.5 h即可將其迷迭香酸提取完全，故選此法制備供試品。

本文以不同比例的甲醇（乙腈）-水（磷酸水）為流動(dòng)相，優(yōu)選腎茶飲片中迷迭香酸的HPLC條件。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以乙腈-0.1%磷酸水（25∶75）為流動(dòng)相時(shí)，供試品中迷迭香酸的分離效果好（R>1.5）且出峰時(shí)間（tR=10.10 min）適中，故選此為流動(dòng)相測定腎茶飲片的迷迭香酸。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)分別對(duì)腎茶飲片的性狀、顯微、薄層鑒別及水分、灰分、浸出物、迷迭香酸含量進(jìn)行測定，為完善腎茶飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)所建立的關(guān)于腎茶飲片的定性和定量研究方法穩(wěn)定、可靠，也為完善腎茶飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了參考。

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（收稿日期：2021-11-10 編輯：陶希睿）