大組織切片技術用于前列腺癌診斷中的臨床價值

文/張萌

前列腺癌作為泌尿外科中一類常見病癥，好發于老年群體中，若不及早治療，錯過最佳治療時機具有較高的死亡率。雖然從整體上看我國前列腺癌的發病率比西方國家低一些，但是近幾年隨著人們飲食習慣的改變、人口老齡化趨勢加劇等，前列腺癌的發生率與死亡率呈現出日益升高的趨勢。早發現、早識別、早治療是改善前列腺癌患者預后以及降低死亡率的關鍵。當前臨床診斷前列腺癌的方式較多，其中病理診斷作為金標準，也是評定其他診斷方式準確性的一項重要指標。由于前列腺癌大多分散在患者整個前列腺組織內，采用傳統組織切片技術需將患者前列腺切成20～40個組織塊后再進行制片處理，這種操作會對前列腺組織的完整性造成破壞，從而降低了診斷結果的準確性。而大組織切片技術則是從患者前列腺的整個切面分層進行取材，保留了前列腺的完整性，因此檢測結果更加準確。本文采用分組的方式比較了在前列腺癌的診斷中分別應用大組織切片技術與傳統組織切片技術進行診斷的臨床價值，詳情見下文。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧分析2011年1月至2020年12月這段時間在病理科行切片技術診斷的前列腺癌患者臨床資料，根據患者病理組織切片方式的差異予以分組，抽取68例應用傳統組織切片技術的患者作為參照組，再抽取68例應用大組織切片技術的患者作為觀察組。參照組：最小年齡為58歲，最大年齡為75歲，平均年齡（68.24±4.36）歲，平均體重指數（23.16±1.08）kg/m。觀察組：最小年齡56歲，最大年齡78歲，平均年齡（68.31±4.25）歲，平均體重指數（23.18±1.11）kg/m；以數據統計軟件對兩組患者的一般資料開展統計學分析，得出P＞0.05，提示一般資料無顯著差異，具備可比性。

所有患者在術后經病理診斷確診為前列腺癌，臨床資料完整，對本研究知情，簽署知情同意書。

排除合并其他惡性腫瘤、標本缺失、伴有內臟及骨骼轉移的患者。

1.2 方法

參照組的患者行傳統組織切片技術，觀察組患者則行大組織切片技術。

本次診斷所需的儀器包含：（1）奧林巴斯顯微鏡；（2）中威全自動脫水機；（3）徠卡CV全自動封片機；（4）徠卡RM2245石蠟切片機；（5）江蘇世泰公司提供的大組織包埋盒、載玻片、蓋玻片、染色劑；（6）中威PRS-B全自動染色機與PBM-B包埋機；（7）德國羅氏公司提供的CobasE601電化學發光儀；（8）由日本NanoZoomer公司提供的NDP20數字病理掃描儀；（9）北京中杉金橋公司提供的生物色標劑；（10）青島海爾公司提供的超低溫冰箱。

通過手術的方式獲得患者前列腺標本，確保該標本完整，獲得標本后立即送至病理科待檢。由病理科的醫務人員將其放置在取材本上，放置時注意將精囊腺向上，尖部尿道口則面向醫務人員，分別選擇紅色與黑色兩種顏色的特殊染料對標本實施染色處理，分別將前列腺左右兩側標記出來，通常左側為紅色，右側為黑色。待標本自然吹干后，應用濃度4%的中性甲醛溶液對其固定處理，時間應＞12h。第2d將取出標本，應用取材刀將標本的精囊腺離斷，從前列腺尖部開始直到基底部按照與尿道垂直的方向實施冠狀切面，盡量將每個組織片的厚度控制在3～4um，共為6～7塊即可，并按照先后順序依次標號，再將組織切片放在大小為5*7cm的大組織網狀包埋盒內，應用鏤空板條將其固定好，再次將其置于甲醛溶液固定，放置時間宜＞12h，目的使標本中央的組織充分固定。第2d將標本取出，乙醇梯度脫水后，應用二甲苯透明，選用高密度的石蠟浸漬處理，在將其置于組織脫水機中實施自動化處理，將試劑的溫度控制在45℃，將石蠟溫度控制在65℃左右。經上述處理過后的組織片制作成大蠟塊，制作方法主要采用二次包埋法，通常是將切片與精囊腺最大切面實施包埋，而針對前列腺尖部與底部切緣同包埋垂直。對蠟塊進行常規修正并鑲裝，石蠟大組織切片機連續勻速平推切片，將切片的厚度控制在5um，將切片放置在定制的大規格載玻片上，對其常規漂洗、HE染色后，實施數字病理掃描。

通過手術的方式獲得參照組患者新鮮且完整的前列腺標本，獲得標本后立即將其送至病理科待檢，標本切片前處理方法與觀察組處理方法相同，應用甲醛溶液將標本充分固定后，將精囊腺離斷，切取前列腺尖部與底部，切片的厚度控制在2～3um，剩余的部分左右側分開，依次將其切成體積≤15cm×10cm×5cm的組織塊，數量約40～60塊。分別取前列腺尖部、底部切緣、精囊腺、輸尿管、穿刺定位的病灶組織塊，將其依次標號，置于普通包埋盒內，采用觀察組相同的方法對包埋組織實施連續切片，將切面置于一般規格的載玻片上，處理后實施數字病理掃描。

1.3 觀察指標

（1）對比兩組病理切片的情況。

（2）對比兩組病理診斷結果，內容包含切緣陽性所占比例、微小病灶所占比例、精囊侵犯所占比例、淋巴結轉移所占比例。

（3）統計兩組患者腫瘤分期。關于前列腺癌GS的評分標準主要是參照腫瘤分化的程度判定為1～5分，其中1分代表分化好，惡性程度低；5分表示分化差，惡性程度高。將所占比例最高的癌灶分化分組當作主要結構評分，主要結構評分+次要結構評分為總分，單一分化時需要將分數重疊相加，三種及以上分化時，則需要將所占比例最小但是評分最高級別的腫瘤分化數當作次要結構評分，總分為2～10分，將評分＞8分記作高危。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 兩組病理切片情況分析

結果顯示：兩組切面均未見褶皺或者收縮，擁有完整的結構，可清晰地觀察到細胞形態。而觀察組能夠全面且多層地觀察到前列腺病變情況，明確病灶所在的部位，并對前列腺切緣是否陽性以及微小病灶進行直觀辨別，具體見圖1所示。而傳統組織切片技術由于遭受切緣取材的限制，不能全面觀察到前列腺病變情況及其與周圍組織的關系，無法明確腫瘤與切緣間的距離和切緣是否為陽性。

圖1 蘇木精——伊紅染色切片

2.2 兩組病理診斷結果比較

根據統計結果顯示：觀察組病理切緣陽性所占比例、微小病灶所占比例均高于參照組，且P＜0.05，而在精囊侵犯、淋巴結轉移所占比例無顯著差異（P＞0.05），見表1。

表1 兩組病理診斷結果比較[n（%）]

2.3 兩組患者腫瘤分期比較

根據統計結果顯示，兩組患者各個腫瘤分期所占的比例無顯著差異（P＞0.05），見表2。

表2 兩組患者腫瘤分期比較[n（%）]

3 討論

前列腺癌作為泌尿系統中發病率最高的一類惡性腫瘤，在男性惡性腫瘤中所占比例為13.5%，其中95%以上為前列腺腺癌，在老年男性群體中具有較高的發病率與死亡率，威脅患者生命安全。迄今為止，前列腺癌的發病機制十分復雜，但是大部分學者認為遺傳因素、性生活頻繁、長期食用高脂肪食物是該病的危險因素。由于前列腺癌具有潛伏期生長緩慢的特征，因此早診斷、早發現、早治療是改善前列腺癌預后的關鍵。以往臨床上診斷前列腺癌的方法較多，例如直腸指檢、PSA檢測、直腸超聲穿刺活檢等。其中直腸指檢對外周病灶檢出缺乏敏感性，并且檢查結果容易受到個體差異的影響，從而限制了其在前列腺癌診斷中的應用。而血清PSA作為篩查前列腺癌的一種基礎指標，容易遭受各種因素的影響，因此特異度與敏感度偏低。例如，如果PAS的水平為4～10ng/ml時，前列腺癌的檢出率僅僅為25%，假如根據這一診斷結果實施穿刺活檢，具有較強的隨機性與盲目性，可能出現過度診療的現象，引起患者醫療費用支出增加。而切片技術作為臨床上診斷惡性腫瘤的重要病理技術，發揮重要作用，大組織切片技術在我國的開展時間較短。

在上文中，對比了在前列腺癌患者診斷中，分別應用傳統組織切片技術與大組織切片技術的診斷結果，結果顯示：大組織切片技術診斷切緣陽性所占比例、微小病灶所占比例41.48%、35.59%均高于傳統組織切片技術14.71%、5.88%，且P＜0.05。其中傳統前列腺癌病理切片技術主要是將前列腺組織切成數個組織塊，致使前列腺喪失了本身的完整性，增加了從整體對腫瘤分布、腫瘤負荷、切緣等進行觀察的難度。而大切片技術相比于傳統的切片技術，制片的數量較少，充分確保前列腺的完整性，方便相關醫師借助顯微鏡直觀地觀察整個前列腺標本橫斷面，并準確勾畫出腫瘤所在的范圍，準確定位腫瘤，對前列腺各區、精囊腺的累及情況、切緣等進行觀察，同時還方便與CT、MRI等影像學診斷進行對比，提高了患者檢查的準確性與連貫性。

雖然大切片組織技術相比于傳統組織切片技術存在一定的優勢，但是由于該技術對病理科醫師的專業水平要求較高，稍有不慎，便可能因為操作不當影響診斷結果，歸納起來常見的問題包含：（1）取材問題。開展病理組織切片制作的第一個步驟便是取材，取材過程中比較常見的問題有病變組織變形或者壞死、切片組織的厚薄不均勻、體積大小不當等，這些因素均會影響制片質量。另外描述病變組織部位不正確、記載差異等等也是影響制片質量的重要因素。針對這一問題，可采取相應的解決措施，首先科學地確定組織標本的體積，獲得標本后要立即對其進行處理，以免保存不當致使標本被污染，降低了制片的質量。除此之外，在記錄過程中還應當注意對標本的具體情況進行清晰描述，取材時注意避免標本被污染。（2）對于新鮮的組織標本，需要對其實施固定處理以后才能維持細胞原有的固定形態，否則可能發生組織自溶的情況。所以，待組織離體后需要盡快將其放置在固定液內實施固定處理，保證其固定充分，一般情況下，小標本固定的時間為4～6h，大標本固定的時間為12～24h。染色的效果主要取決于染色試劑，在對組織標本開展脫水、浸蠟、包埋、切片等制作過程中，需要結合臨床需求選擇最佳的試劑，并及時更新過期的透明用酒精、二甲苯等，結合蘇木精著色的能力確定細胞染色的時間，從而保證切片的質量。（3）在對患者組織切片實施染色操作時，需要嚴格按照規定的路徑開展，保證組織切片獲得滿意的染色效果，以免發生假陽性片或者無色片的現象。在進行抗原修復時，為了確保獲得滿意的染色效果與著色質量，應當選擇顯色良好的染色劑，以獲得高質量的病理組織切片。在開展抗原陽性與陰性的對照試驗過程中，需要嚴格控制好切片染色的時間，操作人員必須嚴格執行相關流程與規范進行制片，注意避免病理組織被污染，全面提升制片的質量。

綜上所述，在前列腺癌的診斷中應用大組織切片技術，相比于傳統的切片技術，能夠更加全面地觀察到前列腺組織，便于直觀觀察病灶的數量、切緣情況、空間分布的情況，提高切緣陽性、微小病灶以及精囊侵犯的檢出率，為前列腺癌患者術后局部精準治療提供病理依據。