壯醫藥線點灸療法對原發性痛經大鼠的影響

梁淇棋　林娜　樊俊宏　稂宇嘉　黃禮芳　劉志珊　韋麗樂　林艷明

【摘 要】 目的：觀察壯醫藥線點灸療法對原發性痛經大鼠PGF2α、NO、Ca²⁺的影響，探討壯醫藥線點灸療法對原發性痛經大鼠模型的作用機理。方法：50只雌性SD大鼠隨機分為正常對照組、模型對照組，壯醫藥線點灸治療組、阿司匹林組、當歸芍藥散組，持續干預7d，比較各組大鼠的扭體反應以及子宮勻漿中PGF2α、NO、Ca²⁺表達水平。結果：正常對照組無扭體，與模型組相比，壯醫藥線點灸治療組、阿司匹林組、當歸芍藥散組30 min扭體次數減少（P<0.01），且3組中壯醫藥線點灸治療組體抑制率最高;壯醫藥線點灸治療組、阿司匹林組、當歸芍藥散組扭體次數差異無統計學意義（P>0.05）。與正常組比較，壯醫藥線點灸治療組、阿司匹林組、當歸芍藥散組大鼠PGF2α、NO、Ca²⁺含量無統計學意義（P>0.05）;與模型組比較，壯醫藥線點灸治療組、阿司匹林組、當歸芍藥散組PGF2α、Ca²⁺值顯著降低，NO顯著增加（P<0.01）。結論：壯醫藥線點線療法治療原發性痛經的作用機制可能與降低PGF2α、Ca²⁺水平，升高NO水平有關。

【關鍵詞】 壯醫藥線點灸療法;PGF2α;一氧化氮;鈣離子;原發性痛經

【中圖分類號】R246.3【文獻標志碼】A? 【文章編號】1007-8517（2022）07-0042-04

基金項目：作者簡介：梁淇棋（1997-），女，漢族，碩士研究生在讀，研究方向為臨床醫學。E-mail：571710688@qq.com

通信作者：林艷明（1974-），女，壯族，碩士，副教授，研究方向為不孕證中西醫治療。E-mail：kisspsm@tom.com

Effect of Zhuang Medicine Line Point Moxibustion Therapy on Primary Dysmenorrhea Rats

LIANG Qiqi LIN Na FAN Junhong LAN Yujia HUANG Lifang LIU Zhishan WEI Lile LIN Yanming*

Youjiang Medical University for Nationalties，Baise 533000，China

Abstract：Objective To observe the effect of line point moxibustion with Zhuang medicine on PGF2α、NO and Ca2+ in rats with primary dysmenorrhea， and to explore the mechanism of line point moxibustion with Zhuang medicine on rats with primary dysmenorrhea. Methods 50 female SD rats were randomly divided into normal control group， model control group， zhuang nationality thread moxibustion group， aspirin group， Danggui Shaoyao powder group. After continuous intervention for 7 days， the writhing reaction of each group and the expression levels of PGF2α、Ca²⁺and NO in uterine homogenate were compared. Results There was no body twisting in the normal control group. Compared with the model group， the number of body twisting in 30min in the Zhuang medicine line-point moxibustion treatment group， the Aspirin treatment group and the Danggui Shaoyao powder group decreased P<0.01）， and the torsion inhibition rate in the Zhuang medicine line-point moxibustion treatment group was the highest. There was no significant difference in the number of body writhing between Zhuang medicine line point moxibustion treatment group， aspirin group and Danggui Shaoyao powder group （P>0.05）. Compared with the normal group， the contents of PGF2α、Ca²⁺and NO in Zhuang medicine line point moxibustion treatment group， aspirin group and Danggui Shaoyao powder group were not statistically significant （P>0.05）. Compared with the model group， thePGF2α、 Ca²⁺value of Zhuang Medicine line-point moxibustion treatment group， Aspirin group and Danggui Shaoyao powder group was significantly decreased， and NO was significantly increased （P<0.01）.Conclusion The mechanism of Zhuang medicine line point-line therapy in the treatment of primary dysmenorrhea may be related to the decrease of PGF2α、Ca²⁺and increase of NO.42F13091-10A7-4D00-ACA3-FE6638C6814D

Key words：Zhuang's Herbal Moxibustion;PGF2α;NO;Ca²⁺;Primary Dysmenorrhea

原發性痛經是婦科常見病癥，臨床上主要表現為經前后或行經期發生下腹墜脹、脹痛、伴有腰酸或其他不適，嚴重影響患者健康及生活質量^[1]。原發性痛經的發病機制尚未完全闡明，現代醫學^[2-4]認為其發生與內分泌、遺傳、代謝及免疫等因素有關。西醫治療主要以對癥處理為主。壯醫藥線點灸作為廣西特色民族療法，在治療痛經上有顯著療效，但其治療機制尚缺乏現代科學的證據^[2]。本實驗運用壯醫藥線點灸療法治療原發性痛經大鼠模型，通過觀察大鼠扭體次數及大鼠血清中PGF2α、NO、Ca²⁺離子水平的變化，探究壯醫藥線點灸療法治療原發性痛經的可能機制。

1 資料與方法

1.1 實驗動物 采用昆明種大鼠50只雌性，鼠齡9～10周，體重（200±20）g，性成熟，未交配，由右江民族醫學院動物實驗中心提供。大鼠正常飼養1周后，隨機分為壯醫藥線點灸治療組、阿司匹林組、當歸芍藥散組、空白對照組、模型對照組，每組各10只。

1.2 材料 壯醫藥線（直徑0.7 cm，廣西中藥醫大學壯醫藥推廣中心）;補佳樂（拜爾醫藥保健有限公司廣州分公司）;阿司匹林腸溶片（拜爾醫藥保健有限公司）;縮宮素注射液（上海全宇生物科技動物藥業有限公司）;蒸餾水、生理鹽水;前列腺素 ELISA 試劑盒（ 上海酶聯生物）;NO 測試盒、蛋白測試盒、鈣測試盒（南京建成生物工程研究所）;當歸芍藥散（右江民族醫學院藥劑科提供）。

1.3 動物造模及各組干預方法

1.3.1 樣品制備 稱取當歸芍藥散處方：當歸20 g，川芎10 g，白術12 g，茯芩10 g，澤瀉10 g，芍藥20 g，加10倍量水，浸泡20 min，煎煮1 h，取煎出液，再加8倍量水煎煮40 min，合并2次煎煮液，濃縮制成濃度為1 g/mL水煎液;1 mg補佳樂片研碎溶于20 mL纖稀鈉中制成0.05 mg/mL混懸液;100 mg阿司匹林腸溶片研碎溶于5 mL纖稀鈉中制成20 mg/mL混懸液。

1.3.2 動物造模 除空白對照組外，所有大鼠適應性喂養1周后，采用補佳樂和縮宮素注射液聯合制造大鼠原發性痛經模型。具體方法如下：壯醫藥線點灸組、阿司匹林組、當歸芍藥組和模型對照組，于中午12：00灌胃補佳樂混懸液10 mL/kg，正常對照組給予10 mL/kg生理鹽水灌胃，連續給藥12 d。于末次給藥后1 h腹腔注射縮宮素100 U/kg，正常組注射生理鹽水10 mL/kg。

1.3.3 干預方法 從造模第5天起，每天下午17：00進行1次干預，連續 7 d。壯醫藥線點灸組參照方宗疇等編著的《實驗大鼠針灸俞穴圖譜及針刺手法》取穴人中、歸來、足三里、中極、肚臍（周圍）、關元，一人將實驗操作部位充分暴露，另一人點燃藥線線端后熄滅明火，將帶火星的線端對準穴位，標準為一按一滅即起為一壯，每穴予灸2壯。阿司匹林組劑量按50 kg成人體表面積折算，每只大鼠予阿司匹林腸溶片混懸液200 mg/kg即10 mL/kg灌胃，當歸芍藥散組同按50 kg成人體表面積折算，每只大鼠予當歸芍藥散水煎液10 g/kg即10 mL/kg灌胃，空白對照組和模型對照組不進行干預，只予生理鹽水10 ml/kg灌胃做等容積液體進入胃內容對照。上述操作均在大鼠安靜狀態下，溫暖的環境中進行。

1.4 觀察指標

1.4.1 扭體反應 第12天灌胃給藥1 h后，腹腔注射縮宮素100 U/kg（正常組注射生理鹽水 10 mL/kg），觀察記錄大鼠30 min內扭體次數，計算扭體抑制率。扭體反應標準：大鼠腹部收縮內凹，軀干與后肢伸展，臀部與一側肢體內旋。抑制率=（模型組大鼠扭體次數-給藥組大鼠扭體次數）/模型組大鼠扭體次數×100%。

1.4.2 子宮勻漿組織PGF2α、NO、Ca²⁺測定 于末次給藥后1h，大鼠頸椎斷頭處死，迅速剖腹，取出子宮，以冰凍的生理鹽水洗凈拭干稱重，制成5%的子宮組織勻漿，以2500 r/min低溫離心10 min，取上清液冷藏保存待測。子宮組織前列腺素 F2α （PGF2α）的含量采用ELISA法檢測;NO、Ca²⁺含量測定采用微板法。均按試劑盒說明書的實驗步驟嚴格操作。

1.5 統計學處理 所有數據采用SPSS18.0統計軟件分析，計量資料以均數加減標準差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較的q檢驗（Newman-Keuls法），P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠30 min內扭體反應比較 空白對照組未出現扭體反應，模型對照組大鼠扭體次數明顯增多，差異有統計學意義 （P<0.01），提示造模成功;各治療組與模型對照組比較，30 min內扭體次數減少，扭體抑制率上升（P<0.01）;壯醫藥線點灸組、當歸芍物組、阿司匹林組扭體反應次數均無統計學差異 （P>0.05）;且阿司匹林組和壯醫藥線點灸組扭體抑制率均>80%，說明阿司匹林組和壯醫藥線點灸組鎮痛效果佳。詳見表 1。

2.2 各組大鼠子宮勻漿組織PGF2α、NO、Ca²⁺值比較 與空白對照組比較，模型組大鼠子宮內膜 PGF2α含量明顯升高，同時模型組NO值升高，Ca²⁺值降低，差異有統計學意義（P<0.01）;壯醫藥線點灸組、當歸芍物組、阿司匹林組與模型組比較，PGF2α值、Ca²⁺值降低，NO值升高，差異有統計學意義（P<0.01）;各治療組間NO值、Ca²⁺值均無統計學差異 （P>0.05），提示壯醫藥線點灸組、當歸芍物組、阿司匹林組對原發性痛經有效，且壯醫藥線點灸組與當歸芍物組、阿司匹林組之間相比療效相當。見表2。42F13091-10A7-4D00-ACA3-FE6638C6814D

3 討論

原發性痛經屬壯醫“火路病”范疇，是較為普遍的婦科疾患。近年來，原發性痛經的發病率逐漸升高，尋找最有效的治療方法極其重要，而中醫藥在治療原發性痛經取得效好的效果，是值得深入挖掘研究的有效資源^[5-7]。壯醫藥線點灸療法是壯醫最具特色的一種治療方法，具有通絡止痛、活血化瘀、散結消腫、溫經行痹等作用^[8-9]。本實驗采用補佳樂和縮宮素注射液聯合制造大鼠原發性痛經模型，根據中醫經絡選穴原則，選取人中、歸來、足三里、中極、臍周四穴、關元等穴位，用壯醫藥線灼灸刺激穴位，調節氣血，達到活血化瘀，溫經散寒，氣血調和的作用。研究表明，痛經的發生主要是由于前列腺素（PGs）分泌過多導致子宮異常收縮引起的^[10]，同時與NO、Ca²⁺的變化密切相關，其中PGF2α屬于前列腺素中的一種，可刺激子宮收縮和缺血，導致痛經^[11]。Ca²⁺作為在細胞收縮中起重要作用的第二信使，刺激后可通過細胞內鈣離子的釋放和胞外的內流，子宮平滑肌細胞內Ca²⁺超載引起能量耗竭、細胞膜受損，此外還可以導致子宮肌攣縮^[12-13]。NO是一種血管內皮舒張因子，可通過NO-環磷鳥苷（cGMP）途徑調節，或直接作用于細胞膜上的鈣通道，引起鈣離子外流或加速細胞內游離鈣的結合，從而引起平滑肌細胞舒張和血管擴張。本實驗結果顯示，壯醫藥線點灸療法能夠降低PGF2α、Ca²⁺值，并使NO水平升高，抑制扭體反應。其作用機制可能是通過調節PGF2α、Ca²⁺、NO水平，緩解子宮平滑肌痙攣引起的缺血再灌注損傷，抑制子宮痙攣從而達到解除或緩解疼痛的目的。同時壯醫藥線點灸組、當歸芍物組、阿司匹林組之間子宮勻漿PGF2α、NO、Ca²⁺對比無明顯差異，提示壯醫藥線點灸療法與臨床常用藥物療效相當。因此，壯醫藥線點灸療法治療原發性痛經具有明顯的療效，值得在臨床上進一步推廣。

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（收稿日期：2021-07-07 編輯：陶希睿）42F13091-10A7-4D00-ACA3-FE6638C6814D