鹽酸小檗堿腸溶緩釋片制劑工藝研究

林青薇，鐘華林，李沛波，吳灝，彭維，蘇薇薇，程春雷，王永剛*

(1.中山大學生命科學學院，廣東省中藥上市后質量與藥效再評價工程技術研究中心/廣東省熱帶亞熱帶植物資源重點實驗室，廣東 廣州 510275；2.山東省食品藥品檢驗研究院，山東 濟南 250101)

小檗堿是從小檗科、蕓香科等植物中提取的異喹啉類原小檗堿型生物堿，臨床常用其鹽酸鹽，鹽酸小檗堿片為一種甲類非處方藥有廣泛的應用。鹽酸小檗堿在抗癌抗腫瘤[1-2]、抗炎抗氧化[3-6]、代謝調節(jié)[7-10]、肝腎保護[11-14]、心腦保護[15-18]等方面有相當?shù)膽脻摿Γ洳涣嫉奈队X體驗以及一天3次的服藥模式會影響患者依從性和臨床應用。基于減少副作用、減少服藥次數(shù)、提高味覺體驗等目的，結合羥丙甲纖維素骨架緩釋技術與腸溶包衣技術，研制了一種鹽酸小檗堿腸溶緩釋片。

1 試藥與儀器

1.1 試藥 乙醇(廣州化學試劑廠，分析純)；乙腈(Honeywell，色譜純)；磷酸二氫鉀(天津市北聯(lián)精細化學品開發(fā)有限公司，分析純)；氫氧化鈉(西隴化工股份有限公司，分析純)；羥丙甲纖維素K4M(卡樂康)；無水乳糖(鎮(zhèn)江市康富生物工程有限公司)；微晶纖維素(安徽山河藥用輔料有限公司)；聚維酮K30(安徽山河藥用輔料有限公司)；硬脂酸鎂(湖州市菱湖新望化學有限公司)；Eudragit L100-55(德國)，檸檬酸三乙酯(Morimura Bros.,Inc)，滑石粉(湖州展望藥業(yè)有限公司)。

1.2 儀器 萬分之一電子分析天平(ME204，瑞士Mettler Toledo公司)；十萬分之一電子分析天平(MS105US，瑞士Mettler Toledo公司)；數(shù)控超聲波清洗器(KQ500DE，昆山市超聲儀器有限公司)；紫外分光光度計(Cary 60 UV-Vis，美國 Agilent公司)。單沖壓片機(DP30，北京國藥龍立科技有限公司)；多功能流化床(WBF-1G，重慶英格造粒包衣技術有限公司)。

2 方法與結果

2.1 片芯累積釋放度測定 先采用紫外分光光度法測定鹽酸小檗堿腸溶緩釋片的含量，具體方法按藥典指導原則經(jīng)方法學驗證，在此不贅述。再取鹽酸小檗堿緩釋片，照溶出度與釋放度測定法(通則0931 第一法)，以水1 000 mL為釋放介質，轉速為120 r·min-1，在取樣時間點取5 mL溶液濾過并補充對應釋放介質，精密量取續(xù)濾液2 mL于50 mL量瓶，加水至刻度，搖勻，以水為空白，按紫外-可見分光光度法(通則0401)，在263 nm波長處測定吸光度。計算累積釋放度，繪制釋放度曲線。

2.2 腸溶緩釋片累積釋放度測定 酸中溶出量：取鹽酸小檗堿緩釋片，照溶出度與釋放度測定法(通則0931 第一法)，以0.1 mol·L-1鹽酸溶液750 mL為釋放介質，轉速為120 r·min-1，2 h后在規(guī)定取樣點吸取溶出液適量，濾過，以相應介質為空白，按紫外-可見分光光度法(通則0401)，在263 nm波長處測定吸光度，計算每片的酸中溶出量。

緩沖液中溶出量：棄去上述各溶出杯中酸液，加入1 000 mL磷酸二氫鉀-氫氧化鈉緩沖液(pH 6.8)為釋放介質，轉速為120 r·min-1，依法操作，在取樣時間點取5 mL溶液濾過并補充對應釋放介質，精密量取續(xù)濾液2 mL于50 mL量瓶，加相應介質至刻度，搖勻，以相應介質為空白，按紫外-可見分光光度法(通則0401)，在263 nm波長處測定吸光度。計算累積釋放度，繪制釋放度曲線。

2.3 單因素試驗考察緩釋片輔料的選擇

2.3.1 潤滑劑及填充劑的選擇 選擇緩釋片常用的乳糖與微晶纖維素作為填充劑，硬脂酸鎂為潤滑劑，進行壓片。

2.3.2 緩釋材料的篩選 按處方比例稱取原輔料，分別加入羧甲基纖維素鈉、羥丙甲纖維素K15M、海藻酸鈉為緩釋材料，或不加緩釋材料，混勻，制粒，壓片。測定1、2、4、6、8 h的累積釋放度，繪制釋放度曲線。結果以羥丙甲纖維素為緩釋材料釋放效果最好(見圖1)，故選擇羥丙甲纖維素為緩釋材料。

圖1 不同緩釋材料的鹽酸小檗堿緩釋片釋放度曲線

2.3.3 黏合劑的選擇 按處方比例稱取原輔料，分別以乙醇、10%聚維酮K30乙醇溶液為黏合劑制粒，壓片。結果以乙醇為黏合劑，制得顆粒細粉多，流動性差，不利于壓片。以10%聚維酮K30乙醇溶液為黏合劑，制得顆粒粒度均勻，流動性好，故選擇10%聚維酮K30乙醇溶液為黏合劑。

2.3.4 羥丙甲纖維素黏度對藥物釋放的影響 按處方比例稱取原輔料，分別加入羥丙甲纖維素K4M、羥丙甲纖維素K15M為緩釋材料，混勻，制粒，壓片。測定1、2、4、6、8、12 h的累積釋放度，繪制釋放度曲線，以羥丙甲纖維素K4M為緩釋材料的鹽酸小檗堿緩釋片在12 h內具有更好的釋放度(見圖2)，故選擇羥丙甲纖維素K4M為緩釋材料。

圖2 含有不同黏度羥丙甲纖維素的鹽酸小檗堿緩釋片釋放度曲線

2.3.5 羥丙甲纖維素用量對藥物釋放的影響 按處方比例稱取原輔料，分別加入10%羥丙甲纖維素K4M、20%羥丙甲纖維素K4M作為緩釋材料，混勻，制粒，壓片。測定各處方鹽酸小檗堿緩釋片在1、2、4、6、8、12 h的累積釋放度，繪制釋放度曲線。當羥丙甲纖維素K4M用量為10%時鹽酸小檗堿緩釋片在12 h內具有更好的釋放度(見圖3)。

圖3 不同羥丙甲纖維素用量的鹽酸小檗堿緩釋片釋放度曲線

2.3.6 填充劑用量對藥物釋放的影響 按處方比例稱取原輔料，分別加入20%、25%、30%乳糖混勻，制粒，壓片。測定1、2、4、6、8、12 h的累積釋放度，繪制釋放度曲線。當乳糖用量為25%時，鹽酸小檗堿緩釋片在12 h內具有較好的釋放度(見圖4)。

圖4 不同填充劑用量的鹽酸小檗堿緩釋片釋放度曲線

2.3.7 壓片壓力對藥物釋放的影響 按處方比例稱取原輔料，混勻，制粒，壓成不同硬度的片劑。測定不同硬度鹽酸小檗堿緩釋片在1、2、4、6、8、12 h的累積釋放度，繪制釋放度曲線。不同硬度的鹽酸小檗堿緩釋片在12 h內釋放度基本無差異，壓片壓力基本不影響鹽酸小檗堿緩釋片的釋放(見圖5)。

圖5 不同硬度鹽酸小檗堿緩釋片釋放度曲線

2.4 正交試驗考察緩釋片輔料的選擇 在單因素試驗基礎上，以羥丙甲纖維素K4M、乳糖、聚維酮K30的用量為考察因素，采用L9(34)正交表，以2、6、12 h的累積釋放度為指標，進行3因素3水平正交試驗，因素水平表見表1。

表1 因素水平設計(%)

稱取鹽酸小檗堿(重量比50%)，按L9(34)正交表及因素水平表稱取羥丙甲纖維素K4M、乳糖，片重600 mg，以微晶纖維素補足重量，混勻，分別按L9(34)正交表及因素水平表以聚維酮K30乙醇溶液為黏合劑制軟材，制粒，干燥，整粒后，加入1%硬脂酸鎂，壓片。

按“2.2”項下方法，對各處方鹽酸小檗堿緩釋片的釋放度進行測定，采用綜合評分法，對各處方結果計算S值，S=|Q2h-25|+|Q6h-55|+|Q12h-95|(Q2h：2h累積釋放度；Q6 h：6 h累積釋放度；Q12 h：12 h累積釋放度)，評分值低者為優(yōu)，結果見表2。方差分析結果見表3。直觀分析顯示，優(yōu)選處方為A2B2C1。但是實際操作中C1水平聚維酮K30用量少，制得顆粒細粉多，不利于壓片。正交試驗結果顯示，C1水平與C2水平評分接近，且方差分析顯示，羥丙甲纖維素K4M用量(A)具有顯著意義(P<0.05)，乳糖用量(B)、聚維酮K30用量(C)沒有顯著差異，故最后確定以A2B2C2作為最終處方，即羥丙甲纖維素用量為10%，乳糖用量為25%，聚維酮K30用量為3%。

表2 正交試驗結果

表3 正交試驗方差分析

2.5 工藝的均一性與重現(xiàn)性

2.5.1 工藝均一性試驗 按優(yōu)選工藝制粒，壓片。測定同批6片鹽酸小檗堿緩釋片各在1、2、4、6、8、12 h的累積釋放度，繪制釋放度曲線。同一批樣品釋放度差異小，工藝均一性良好(見圖6)。

圖6 各樣品釋放度曲線

2.5.2 工藝重現(xiàn)性試驗 按優(yōu)選工藝連續(xù)制備3批鹽酸小檗堿緩釋片(批號：20200507、20200525、20200526)。測定各批次鹽酸小檗堿緩釋片在1、2、4、6、8、12 h的累積釋放度，繪制釋放度曲線，結果見圖7。批次間釋放度差異小，工藝重現(xiàn)性良好。

圖7 各批次鹽酸小檗堿緩釋片釋放度曲線

2.5.3 釋藥模型的擬合 將鹽酸小檗堿緩釋片(批號：20190925)釋放度數(shù)據(jù)分別用一級方程、Higuchi方程、零級方程進行擬合。結果見表4，Mt為時間為t時的累積釋放量；M∞為時間為∞時的累積釋放量；Mt/M∞為時間為t時的累積釋放率。計算擬合結果、相關系數(shù)(r)及均方誤差(MSE)，釋放度數(shù)據(jù)用Higuchi方程擬合結果r最大且MSE最小，認為其釋放符合Higuchi模型。

表4 鹽酸小檗堿緩釋片釋藥模型擬合

2.6 包衣工藝 以歐巴代薄膜包衣預混劑(胃溶型)為隔離層包衣材料，隔離層包衣增重5%～8%；以尤特奇L100-55為腸溶材料，檸檬酸三乙酯為增塑劑，滑石粉為抗粘劑配制包衣液，腸溶包衣增重4%～6%。測定鹽酸小檗堿腸溶緩釋片的酸溶出量與緩沖液中累積釋放度，繪制釋放度曲線。酸溶出量低于檢測限，符合腸溶制劑酸溶出量要求。包衣后腸溶緩釋片釋放度曲線符合Higuchi方程，Mt/M∞=0.320 6 t1/2-0.148 6，r=0.996 9。

3 討論

由于緩釋材料會影響鹽酸小檗堿在水中的釋放，鹽酸小檗堿腸溶緩釋片的含量測定使用乙醇為提取溶劑。建立了一個鹽酸小檗堿緩釋片的處方，該處方以羥丙甲纖維素K4M為緩釋材料，乳糖、微晶纖維素為填充劑，聚維酮K30為黏合劑，硬脂酸鎂為潤滑劑。片重600 mg，每片含鹽酸小檗堿300 mg。該處方能在12 h內穩(wěn)定、持續(xù)釋藥，其工藝均一性及重現(xiàn)性良好，釋藥模型擬合符合Higuchi模型。

鹽酸小檗堿緩釋片在介質中完全釋放時，理論濃度為0.3 mg，以磷酸二氫鉀-氫氧化鈉緩沖液(pH 6.8)為釋放介質時，試驗滿足漏槽條件，以磷酸鈉-鹽酸緩沖液(pH 6.8)為釋放介質時，則不滿足漏槽條件，故選用磷酸二氫鉀-氫氧化鈉緩沖液(pH 6.8)為釋放介質。

腸溶包衣雖能阻止鹽酸小檗堿在酸液中的釋放，但是酸液水分進入片芯后會影響其后續(xù)緩釋性能，因此在進行腸溶包衣前需進行隔離層包衣，包腸衣后，釋藥模型擬合仍符合Higuchi模型。制成腸溶緩釋片后，可以減少對胃的副作用、減少服藥次數(shù)、提高味覺體驗等。常規(guī)片鹽酸小檗堿的生物利度較低，后續(xù)將其在該腸溶緩釋片的生物利度進一步研究。