2021 年云南省玉溪市小反芻獸疫專項監測評估

楊秋楠，羅曉燕，宋詩雅，李晶，徐聰，楊耀蘭，李錫慧，張文東，趙煥云，呂嶸

（1.玉溪市動物疫病預防控制中心，云南玉溪 653100；2.云南省動物疫病預防控制中心，云南昆明 650201）

小反芻獸疫（peste des petits ruminants，PPR）由小反芻獸疫病毒（peste des petits ruminants virus，PPRV）引起，又稱為“羊瘟”，世界動物衛生組織（OIE）將其列為須通報動物疫病，并列入2030 年根除目標[1]。PPR 對羊群危害嚴重，引起的感染率和死亡率高達90%[2]。PPRV屬于副黏病毒科（Paramyxoviridae）麻疹病毒屬（Morbillivirus）[3]，具有高度傳染性，主要通過密切接觸傳播，也可通過呼吸系統傳播[4]。PPR 一年四季均可發生，但多發于雨季及干燥寒冷季節[5]。PPR 潛伏期通常為3～21 d，OIE 在《陸生動物衛生法典》中規定為21 d[6]。2007 年，我國首次發生PPR 疫情，引發毒株為基因IV 系，與周邊國家流行的毒株屬同一系[7]。

目前，對PPR 尚無有效的治療方法，疫苗免疫是其主要防控措施[8]。2014 年4 月初，云南省多個市州發生輸入性PPR 疫情，其中包括玉溪市[9]。此后，玉溪市開始實施PPR 強制免疫措施。有條件的規模養殖場，按本場免疫程序或結合群體免疫抗體監測情況進行適時免疫。而對散養戶，每年開展春秋兩季集中免疫，對所有種公羊、種母羊（空懷）、育肥羊、羔羊（1 月齡以上）進行集中免疫，并及時進行補免、加強免；免疫接種人員主要為鄉村獸醫、動物防疫合作社成員和畜主，疫苗為政府統一購買的商品化活疫苗[8]。近年來，玉溪市養羊業發展逐步加快，羊存欄量逐年增長。2020年以來，全市羊飼養量基本維持在35 萬只以上，年出欄30 萬只以上。其中，山區、半山區總存欄約占全市存欄的68%，以散養為主，多數貧困戶依靠山羊養殖實現了脫貧。因此，切實做好PPR防控，事關玉溪市養羊業的持續健康發展，事關農戶增收，意義重大。

為全面摸清玉溪市PPR 流行情況及疫苗免疫效果，加快推進PPR 無疫區建設及凈化工作，2021 年玉溪市動物疫病預防控制中心對全市羊群開展了專項監測，以期為該病的綜合防控，免疫退出評估，最終實現消滅PPR 的目標提供數據支撐。

1 材料與方法

1.1 監測目標群

2021 年3 月，玉溪市動物疫病預防控制中心對所轄9 個縣區分別統計羊存欄情況，將全市1 084 個羊養殖場群（存欄100 只以上的規模養殖場，1 個行政村內所有散養戶存欄羊作為1 個群體）作為目標群。

1.2 監測單元

場群層面，抽樣單元為每個規模場和行政村；場內層面，抽樣單元為所有免疫PPR 的羊只。

1.3 抽樣方案

本次專項監測集中采樣時間為2021 年4—5月。根據全市養殖存欄情況，采用多階段隨機抽樣方法[10]，先抽取場群，再抽取個體[6]，采集免疫血清和眼鼻棉拭子樣品。

1.3.1 血清學樣品 第一階段，計算全市開展PPR 免疫效果評估所需抽樣的場點數。以估計流行率計算樣本量，按照95%的置信水平、85%的預期免疫合格率（根據2017—2020 年監測結果確定）、10%的可接受誤差，利用公式（1）計算出抽樣場點數。依據全市共有1 084 個羊養殖場群，計算得出應采集47 個養殖場點。根據規模場與行政村場點比例，按比例分配規模場點24 個、行政村場點23 個。再根據各縣區場群比例，通過分層比例抽樣，確定各縣區抽取場點數。

式中，n為抽樣個數，p為預期流行率，z為統計量（置信水平為95%時，z2=1.962），e為可接受的最大絕對誤差。第二階段，計算所需的抽樣羊只數量。采用預估流行率方法，按照95%的置信水平、85%的預期免疫合格率（根據2017—2020 年監測結果確定）、10%的可接受誤差，根據抽出場點的存欄確定具體采樣數量。采樣時，群內隨機選羊，按系統隨機方法抽樣。

1.3.2 病原學樣品 第一階段，計算全市開展PPR 病原學檢測所需抽樣的場點數。以發現疫病或證明無疫方法計算樣本量的抽樣策略，按照估計場點流行率3%、置信水平95%，依據公式（2）計算出抽樣的場點數，運用按比例隨機分層抽樣的方式抽取監測場點。全市1 084 個羊養殖場群，計算得出應采集95 個養殖場點。根據規模場與行政村場點比例，按比例分配規模場點48 個、行政村場點47 個。再根據各縣區場群比例，通過分層比例抽樣，確定各縣區抽取場點數。

式中，n為抽樣個體數，CL 為置信水平，Se 為檢測方法的敏感性，N為群體數，D為陽性動物數（群體數與預定流行率的乘積，即D=N×p）。第二階段，計算所需的抽樣羊只數量。采用證明無疫的方法，按照3%的預期流行率、95%的置信水平，計算出每個規模場（村）所抽取的羊只數量。采樣時，群內隨機選羊，按系統隨機抽樣方法。

1.4 檢測方法與試劑

對采集的血清樣品，采用PPRV 阻斷ELISA抗體檢測試劑盒（科前生物公司）和酶標儀（型號anthos 2010，安圖生物公司）進行PPRV 免疫抗體檢測。

對采集的棉拭子樣品，采用探針法熒光PCR 試劑盒（TakaRa One Step PremixScriptTMRTPCR kit）、熒光定量PCR 儀（ABI QuantStudio 7 Flex）進行PPRV 核酸檢測。

2 結果與分析

2.1 免疫抗體檢測

2.1.1 總體情況 按照估計流行率計算樣本量的抽樣策略，計劃采集免疫血清樣品1 641 份，實際采集并檢測免疫血清樣品1 631 份，檢出PPRV 抗體合格樣品1 364 份，免疫個體合格率為83.62%，達到了國家要求的抗體合格率70%以上的標準。共檢測47 個養殖場點，合格場群39 個，群體合格率為82.98%。

2.1.2 不同養殖類型 本次血清學監測涉及47 個場點，其中規模場24 個、行政村23 個，群體免疫合格率分別為83.33%、82.61%，個體免疫合格率分別為82.50%、84.83%。不管是從場群水平（P=0.95 ＞0.05），還是從個體水平（P=0.20 ＞0.05）看，差異均不顯著。具體結果見表1。

表1 不同養殖類型的免疫抗體檢測結果

2.1.3 不同養殖區域 不同縣區的統計結果（表2）顯示：最高的PPRV 免疫抗體個體合格率為97.13%，最低的為63.73%，不同區域間免疫抗體水平有差異，部分縣區差異顯著（P＜0.05）。

表2 不同養殖區域的免疫抗體檢測結果

2.1.4 不同企業疫苗 本次采集的羊血清樣品，涉及2 個廠家生產的2 種疫苗，分別是A 公司生產的“小反芻獸疫弱毒活疫苗（Clone9株）”和B 公司生產的“小反芻獸疫-山羊痘二聯活疫苗（Clone9+AV41株）”。本次采樣流調中，明確記錄免疫疫苗廠家的羊血清樣品1 208 份，2 個企業生產的PPR 疫苗免疫合格率均高于國家規定的最低70%的保護水平，且不同企業疫苗的免疫抗體合格率差異不顯著（P=0.06 ＞0.05）。具體結果見表3。

表3 不同企業PPR 疫苗免疫抗體檢測結果

2.1.5 不同羊只性別 本次監測評估明確記錄性別的羊血清樣品1 517 份，其中公羊458 份、母羊1 059 份，個體合格率分別為88.86%、81.96%，具有統計學差異（P＜0.01）。具體結果見表4。

表4 不同性別羊只PPR 免疫抗體檢測結果

2.2 病原學檢測

9 個縣區涉及95 個場點（規模場48 個、行政村47 個），共采集羊眼鼻棉拭子樣品6 438 份，均未檢測到PPRV 核酸陽性樣品。

3 討論

3.1 不同養殖規模免疫情況

監測發現，不同養殖規模免疫群體合格率與個體合格率均超過國家規定的最低標準70%，且不具有統計學差異，說明玉溪市對散養戶的PPR免疫重視程度越來越高。隨著動物防疫合作社的普及，合作社專業隊伍為散養戶進行統一免疫，免疫效果逐步提升，春秋兩防免疫工作開展有一定成效。

3.2 不同區域免疫情況

玉溪市9 個縣區中，僅1 個縣區的PPR 個體合格率低于70%。通過對比發現，該縣區不同養殖類型的場點抗體合格率均較低。該縣區多為山地散養，村落分布較散，這給羊群免疫帶來了諸多不便，可能存在漏免現象；同時部分村落因路途較遠，可能存在因疫苗保存不當，造成疫苗失效的情況。后期需要繼續加大對散戶免疫的重視力度，配備完善的疫苗免疫設施和工具，同時加大對基層防疫員的免疫技術培訓，使其規范免疫操作。對于免疫抗體較低的地區，要重點監測和監管，及時做好補免工作。

3.3 不同廠家疫苗免疫情況

兩個企業的PPR 疫苗免疫合格率均高于國家規定的保護水平，表明兩個企業生產的PPR 疫苗免疫原性良好，能夠起到抵御PPRV 感染的效果，建議后期持續監測兩種疫苗的免疫效果。

3.4 不同性別免疫情況

公羊免疫抗體水平明顯高于母羊。這是因為公羊大多作為種羊來飼養，免疫重視程度相對較高，且飼養周期長，免疫次數多；而母羊飼養周期相對較短，加之母羊懷孕期間不建議免疫，且部分畜主怕影響母羊的生產性能拒絕免疫[11]，可能出現漏免情況。因此，在每年春秋兩季集中免疫的基礎上，應根據免疫記錄，及時對漏免的孕、幼畜進行補免，使應免羊只免疫密度長期保持較高水平，同時加大對養殖戶免疫知識的宣貫，充分落實其免疫主體責任。

3.5 病原檢測情況

本次監測未檢測到PPRV 核酸陽性樣品，說明發生PPR 的風險較低。目前玉溪市最大的風險來自于未經檢疫外購羊只的流入，今后應重點加強引入羊群的檢疫監督工作，加大活羊調運監管力度，加強引種及外購羊的檢疫檢驗，防止發生輸入性疫情。

4 小結

玉溪市PPR 免疫效果整體較好，轄區內發生的PPR 風險較低，但部分縣區免疫合格率偏低。因此，應持續做好該病的免疫和監測，加大防疫知識宣傳力度，提高養殖戶免疫意識，加強防疫人員培訓，整體提高玉溪市疫病防控能力，盡快實現消滅PPR 目標。