乳酸左氧氟沙星氯化鈉注射液中氯化鈉含量測定方法的探討

鄢雷娜，章紅，黎忠良，陳希，肖欽欽，段和祥

1.江西省藥品檢驗檢測研究院，國家藥品監督管理局中成藥質量評價重點實驗室，江西省藥品與醫療器械質量工程技術研究中心，江西 南昌 330029；2.江西省兒童醫院，江西 南昌 330006

乳酸左氧氟沙星氯化鈉注射液（Levofloxacin lactate and sodium chloride injection）是一種以乳酸、左氧氟沙星、氯化鈉等按一定比例配制而成的滅菌大輸液劑。該制劑中氯化鈉是一種電解質補充藥物，氯和鈉是人體重要的電解質物質，主要存在于細胞外液，有維持正常的血液、細胞外液的容量和調節滲透壓的作用，其含量高低直接威脅人體的健康，因此對氯化鈉含量準確測定有著較為重要的作用［1］。為控制該制劑中氯化鈉的含量，本文根據氯化鈉的結構和性質，參考含氯化鈉制劑文獻進行了研究［2-7］，建立了用銀量法（熒光黃吸附指示劑法）測定224 批乳酸左氧氟沙星氯化鈉注射液中氯化鈉含量的方法。該方法以熒光黃指示液為指示劑，用硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）滴定乳酸左氧氟沙星氯化鈉注射液中氯化鈉的含量，加入2.5%硼砂溶液后，pH 值和乙二胺四乙酸（EDTA）對滴定終點均未有明顯干擾，終點顏色反應靈敏，經方法學考察和含量測定，結果準確可靠，能有效控制乳酸左氧氟沙星氯化鈉注射液中氯化鈉的含量［8］。

1 儀器與材料

1.1 儀器

BT125D 型電子天平(北京賽多利斯儀器系統有限公司)，50 mL 棕色聚四氟酸式滴定管。

1.2 試劑

氯化鈉基準試劑（汕頭市西隴化工廠有限公司，批號：080921），硝酸銀滴定液（本單位自制，按《中國藥典》2015 年版標準依法配制，精密標定為0.1 mol/L），熒光黃（上海麥克林生化科技有限公司，批號：C10875958），糊精（西隴科學股份有限公司，批號：170507），硼砂（上海實驗試劑有限公司，批號：20140817）。2%糊精溶液、2.5%硼砂溶液和熒光黃指示液按《中國藥典》2015 年版標準依法配制［9］。

2 方法與結果

2.1 法定檢驗標準差異

本試驗共涉及29 個廠家共224 批樣品，現行法定標準中氯化鈉含量的檢測方法差異較大，涵蓋了3 種方法［10-11］，方法具體差異見表1。

表1 法定方法差異比較

有兩家廠家的處方中添加了EDTA，在法定檢驗過程中發現按標準檢測時，若未加2.5%硼砂溶液，滴定終點不明顯，粉紅色不顯著，影響試驗結果。該注射液10 mL 加水40 mL 的溶液pH 值為4.7 時，再加2 mL 2.5%硼砂溶液后的pH 值約為8.5，可滿足熒光黃指示劑需在pH7～10 的溶液中指示終點的需要。

2.2 試驗操作方法

根據上述試驗結果確定本試驗方法為“精密量取樣品10 mL，加40 mL 水，5 mL 2%糊精溶液，2 mL 2.5%硼砂溶液與5～8 滴熒光黃指示液，用硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）滴定，每1 mL 硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）相當于5.844 mg 的NaCl”［12-13］。

2.3 線性關系試驗

精密稱取經105 ℃干燥至恒重的基準級氯化鈉試劑6.010 5 g，置100 mL 容量瓶中，加水溶解并稀釋定容至刻度，搖勻，作為氯化鈉標準儲備液。再精密量取5、10、15、20、25 mL 分別至100 mL 量瓶中，加水稀釋定容至刻度，搖勻，作為對照溶液，精密量取上述溶液各10 mL 按“2.2”方法依法測定，進行線性回歸［14］。線性回歸方程：y=4.975x+0.195，r=0.999 9。表明氯化鈉在3.005 25～15.026 25 mg/mL的取量范圍內，線性關系良好。

2.4 精密度試驗

精密量取2.3 項下氯化鈉標準儲備液15 mL 至100 mL 量瓶中，加水稀釋定容至刻度，搖勻，作為對照溶液，精密量取上述對照溶液各10 mL 按“2.2”方法連續滴定6 次，記錄消耗硝酸銀滴定液的體積［15］。結果其RSD為0.25%，表明該方法精密度較好。

2.5 穩定性試驗

精密量取“2.4 精密度試驗”項下的對照溶液，各10 mL 分別在0、4、8、12、16、20、24 h 按“2.2”條件依法測定，記錄消耗硝酸銀滴定液的體積［16］。結果：RSD 為0.21%，表明對照溶液制備后24 h 內穩定性好。

2.6 重復性試驗

精密量取乳酸左氧氟沙星氯化鈉注射液（廠家：A，處方中含EDTA）10 mL 按“2.2”方法，用硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）連續滴定6 次，記錄消耗硝酸銀滴定液的體積。RSD 為0.25%，表明該方法重復性較好。

2.7 加樣回收率試驗

精密量取“2.3”項下氯化鈉標準儲備液15 mL至100 mL 量瓶中，加水溶解并稀釋定容至刻度，搖勻，作為回收加標溶液。取具塞錐形瓶9 個，依次編號①～⑨，精密量取已知氯化鈉含量的乳酸左氧氟沙星氯化鈉注射液5 mL（廠家：A，處方中含EDTA）9 份，分別置9 個具塞錐形瓶中，于①②③號瓶中各精密加入回收加標溶液4 mL，加水41 mL，搖勻；④⑤⑥號瓶中各精密加入回收加標溶液5 mL，加水40 mL，搖勻；⑦⑧⑨號瓶中各精密加入回收加標溶液6 mL，加水39 mL，搖勻；按上述條件依法測定，試驗數據及結果見表2。結果表明：回收率結果良好。

表2 加樣回收率測定結果

2.8 空白對照試驗

精密稱取與供試品相同濃度的乳酸、左氧氟沙星配成不含氯化鈉的空白對照溶液，用硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）滴定，結果消耗硝酸銀滴定液為0 mL［17］。

2.9 試驗結果

本試驗建立了銀量法對224 批乳酸左氧氟沙星氯化鈉注射液中氯化鈉含量進行統計分析，結果顯示223 批合格，含量范圍為98.0%～103.4%；1 批不合格，含量為87.3%。總體合格率為99.6%，平均含量為100.1%；含量為99.4%的批次最多，有35批次。數據分析圖詳見圖1。

圖1 銀量法數據分析圖

3 討論

3.1 pH 值對滴定終點的影響

該試驗所用的熒光黃吸附指示劑是一種有機弱堿，pKa=8，其在溶液中可離解為黃綠色的熒光黃陰離子和質子。因此，當溶液的pH 值小于8 時，熒光黃的電離被抑制，導致熒光黃陰離子濃度變低，較難被AgCl 沉淀吸附，滴定終點顏色變化不明顯［18］。實驗結果表明，當待測溶液的pH 值為中性至弱堿（pH7～10）時，終點顏色較容易觀察。29個廠家生產的該注射液pH 值均偏弱酸性，范圍在3.9～5.0 之間。因此，在執行法定標準對乳酸左氧氟沙星氯化鈉注射液進行含量測定時，本品10 mL 加水40 mL 的待測溶液pH 值為4.7 時,加2 mL2.5%硼砂溶液后的pH 值約為8.5 顯中性至弱堿性,待測溶液黃綠色熒光顯示強烈，滴定終點明顯。A 廠家和B 廠家的處方中添加了EDTA，加入2mL 2.5%硼砂溶液后，pH 值從弱酸性調成了中性至弱堿性，可滿足熒光黃指示劑需在pH7～10 的溶液中指示終點的需要，此時待滴定溶液黃綠色熒光顯示強烈，滴定終點明顯［19］，詳細結果見表3。

表3 pH值的變化

3.2 EDTA 對滴定終點的影響

本品種29 個生產企業的處方中，有部分廠家處方中添加了EDTA，為了絡合部分金屬離子調節溶液顏色，在氯化鈉滴定過程中，EDTA 會與Ag+穩定結合而干擾AgCl·Ag+形成，進一步會干擾熒光黃陰離子吸附AgCl·Ag+導致滴定終點顏色變化不明顯［18］。本試驗方法加入了2.5%硼砂溶液2 mL，可把處方中有EDTA 的樣品溶液pH 值調整至弱堿性（pH7～10），pH 值和EDTA 對滴定終點的干擾可以忽略不計［20］。

3.3 硼砂溶液對滴定終點的影響

該試驗選用乳酸左氧氟沙星氯化鈉注射液（廠家：D，處方中不含EDTA），進一步證實加入2.5%硼砂溶液，pH 值和EDTA 對滴定終點的干擾可以忽略不計，試驗結果見表4。

表4 乳酸左氧氟沙星氯化鈉注射液（D廠家生產）加入硼砂溶液對滴定終點的關聯影響

4 結論

本試驗建立了以熒光黃指示液為指示劑的銀量法，用硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）滴定乳酸左氧氟沙星氯化鈉注射液中氯化鈉的含量，加入2.5%硼砂溶液后，pH 值和EDTA 對滴定終點均未有明顯干擾，終點顏色反應靈敏，經方法學考察和含量測定，結果準確可靠，能有效控制乳酸左氧氟沙星氯化鈉注射液中氯化鈉的含量［21-23］。