LncRNA-HEIH、GP73、AFP在原發性肝癌中的表達及與臨床病理特征的關系

劉羨偉,高 楠△,黃 蕾,弓淑媛,張 婷,安 良

1.西安高新醫院檢驗科，陜西西安 710000;2.西安金域醫學檢驗有限公司，陜西西安 710000

肝癌是臨床上最常見的惡性腫瘤之一，發病率位居全球腫瘤的第6位，病死率居第4位，嚴重威脅人類生命健康[1]。我國原發性肝癌的主要病因是乙型肝炎病毒感染。由于我國乙型肝炎患者較多，再加上患者對自身健康的重視不足，導致我國肝癌的發病率居高不下[2]。原發性肝癌起病隱匿，進展迅速，惡性程度高，就診時多已發展為中晚期，治療效果不佳。盡管手術治療、藥物治療方法發展迅速，但對于中晚期患者而言，5年生存率仍然很低。因此，早診斷、早治療對提高治愈率，延長患者生存期尤為重要。長鏈非編碼RNA HEIH(LncRNA-HEIH)通過多種機制參與人體生物學過程，在多種惡性腫瘤中高表達，可作為肝癌發生、發展的生物學標志物[3]；高爾基體蛋白73(GP73)是新近發現的高爾基體上的跨膜蛋白，已作為肝癌早期診斷和預后評估的指標應用于臨床[4]；甲胎蛋白(AFP)是一種特異度較高的肝癌標志物,與肝癌的發生、發展密切相關[5]。本研究主要探討LncRNA-HEIH、GP73、AFP在原發性肝癌中的表達，分析其與患者臨床病理特征的關系，旨在為原發性肝癌的診療工作提供新的思路，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2017年1月至2018年8月西安高新醫院收治的原發性肝癌患者112例作為肝癌組，其中男68例、女44例，年齡35～70歲、平均(55.4±9.3)歲。納入標準：(1)首次確診，且符合《原發性肝癌診療規范(2019年版)》[6]中的診斷標準；(2)均經組織病理學確診；(3)臨床資料完整，依從性高。排除標準：(1)嚴重肝、腎功能障礙；(2)合并其他惡性腫瘤；(3)合并嚴重心腦血管疾病；(4)合并免疫系統疾病；(5)預計生存期少于3個月。另收集100例肝硬化患者作為肝硬化組，其中男60例、女40例，年齡35～70歲、平均(55.8±9.5)歲。收集同期體檢中心體檢健康者100例作為對照組，其中男60例、女40例，年齡35～70歲、平均(55.5±9.7)歲。3組研究對象的一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經醫院倫理委員會批準通過，符合倫理學標準，所有研究對象均簽署知情同意書。

1.2方法 所有研究對象均空腹8 h以上于次日8:00左右抽取靜脈血2管，1管注入專用試管檢測LncRNA-HEIH，1管注入紅色干燥試管檢測GP73、AFP，均靜置15～30 min后以3 000 r/min的轉速離心10 min，取上清液置于-80 ℃超低溫冰箱統一進行檢測。LncRNA-HEIH采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(qRT-PCR)進行檢測，儀器為美國ABI7500型熒光定量PCR儀，根據2-ΔΔCt算法計算LncRNA-HEIH相對表達量，相對表達量>1即判斷為陽性。GP73、AFP采用羅氏Cobas e601全自動電化學發光免疫分析儀及配套試劑進行檢測，GP73、AFP參考區間分別為0～150、0～8 ng/mL。所有操作嚴格按照試劑盒說明書進行，由同一檢驗師在同一臺儀器完成，室內、室間質控均在控。

2 結 果

2.13組研究對象的LncRNA-HEIH、GP73、AFP水平比較 肝癌組患者LncRNA-HEIH、GP73、AFP水平明顯高于肝硬化組、對照組，肝硬化組以上指標水平明顯高于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 3組研究對象的LncRNA-HEIH、GP73、AFP水平比較

2.2肝癌組與肝硬化組LncRNA-HEIH、GP73、AFP的陽性率比較 肝癌組LncRNA-HEIH、GP73、AFP的陽性率明顯高于肝硬化組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 肝癌組與肝硬化組LncRNA-HEIH、GP73、AFP的陽性率比較[(%)n/n]

2.3LncRNA-HEIH、GP73、AFP在不同臨床病理特征原發性肝癌患者中的表達 根據不同臨床病理特征對原發性肝癌患者進行分組，結果顯示，LncRNA-HEIH、GP73、AFP水平在TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為低分化和有門靜脈癌栓、淋巴結轉移、肝外轉移的患者中明顯升高(P<0.05)，見表3。

表3 LncRNA-HEIH、GP73、AFP在不同臨床病理特征原發性肝癌患者中的表達

2.4LncRNA-HEIH、GP73、AFP與臨床病理特征的相關性 將2.3中有統計學意義的變量納入Spearman相關進行分析可知，LncRNA-HEIH、GP73、AFP與TNM分期、門靜脈癌栓、淋巴結轉移、肝外轉移均呈正相關(P<0.05)，與分化程度均呈負相關(P<0.05)，見表4。

表4 LncRNA-HEIH、GP73、AFP與臨床病理特征的相關性分析

3 討 論

原發性肝癌是世界范圍為內病死率較高的一種惡性疾病，我國每年死于肝癌的患者約有30萬，占全世界因肝癌死亡人數的一半[7]。早期篩查可以降低肝癌的發病率及病死率，有效改善預后。篩選診斷肝癌有效的腫瘤標志物已經成為當前研究的熱點。

AFP是一種多肽類糖蛋白，主要由胎兒肝細胞及卵黃囊合成，胎兒時期水平最高，出生后則下降[8]。以往臨床上診斷原發性肝癌的血清學指標主要是AFP，但AFP也存在缺陷，一部分原發性肝癌患者AFP呈陰性表達，容易造成漏診[9]。單獨將AFP作為篩查和診斷肝癌的標志物具有一定的局限性。長鏈非編碼RNA(LncRNA)是長度超過200個核苷酸的RNA，參與多種生物學進程。LncRNA-HEIH是近年來研究較多的一種LncRNA，在腫瘤組織常呈異常表達。HEIH是由RNA聚合酶Ⅱ轉錄而來，被多聚腺苷酸化后,位于肝細胞細胞核和細胞質中，在原發性肝癌患者中被發現異常表達[10]。馬慶等[11]的研究表明，LncRNA-HEIH水平在乙型肝炎相關肝硬化患者及肝癌患者中明顯升高，可用于預測肝硬化及肝癌的發生。GP73是高爾基體上的一種跨膜蛋白，其末端的螺旋結構能夠作為蛋白作用的位點，與運輸蛋白的轉運、結合、黏附功能有關，在肝病患者中高表達[12]。孫艷華等[13]的研究指出，GP73聯合其他腫瘤標志物檢測可提高診斷的準確率，對疾病早期診斷、治療、病情監測意義重大。本研究結果顯示，原發性肝癌患者LncRNA-HEIH、GP73、AFP水平明顯升高，說明這些指標與疾病的發生、發展密切相關。

根據不同臨床病理特征分組后發現，LncRNA-HEIH、GP73、AFP水平在TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為低分化和有門靜脈癌栓、淋巴結轉移、肝外轉移的患者中明顯升高(P<0.05)。TNM分期是臨床上比較常用的實體腫瘤分期標準，分期越高，惡性程度越高，血清腫瘤標志物水平也越高[14]。分化程度是反映腫瘤細胞接近正常細胞的程度，分化程度越低，惡性程度越高[15]。出現門靜脈癌栓的原發性肝癌患者病灶內的癌細胞團與原發性肝癌的侵犯程度、生長速度有關，還可能導致癌細胞的轉移[16]。淋巴結轉移、肝外轉移也與原發性肝癌的發生、發展密切相關[17]。本研究所得結果說明這些指標與部分臨床病理特征密切相關，這與上述研究相契合。本研究中Spearman相關分析結果也印證了這一觀點。

綜上所述，原發性肝癌患者LncRNA-HEIH、GP73、AFP水平明顯升高，且與臨床病理特征密切相關，以上指標檢測對原發性肝癌患者的早期診斷及病情評估具有重要意義，值得臨床推廣應用。但此次研究樣本量較小，且為回顧性分析，有待日后擴大樣本量進行更深層次的研究來佐證結果。