miRNA-21水平變化在妊娠期糖尿病患者中的應用價值

左顯波

河南省南陽市第一人民醫(yī)院檢驗科,河南南陽 473000

妊娠期糖尿病是女性妊娠期常見的內(nèi)科并發(fā)癥之一，不僅會引起妊娠高血壓、先兆子癇、胎膜早破等一系列疾病的發(fā)生，還會增加新生兒高膽紅素血癥、低鈣血癥的發(fā)病風險，對孕產(chǎn)婦、胎兒及新生兒造成不容忽視的健康風險[1]。相關(guān)資料顯示，妊娠期糖尿病是一種由飲食習慣、遺傳因素、生活環(huán)境等共同導致的多因素疾病，具體發(fā)病機制尚未明確[2]。微小核糖核酸(miRNA)是一種內(nèi)源性的小分子RNA，通過與信使RNA(mRNA)結(jié)合、調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄來發(fā)揮作用。而且成熟的miRNA具有高度穩(wěn)定性，不受時間、溫度等外在因素的影響而使檢查結(jié)果發(fā)生變化[3]。miRNA-21作為miRNA中第1個由RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄的miRNA，目前已有很多學者證實了其在胃癌、肺癌、宮頸癌及心血管疾病發(fā)生中的作用，因其所在組織細胞的類型和特異性不同，發(fā)揮著不同的生物學作用[4-5]。也有研究表示，miRNA-21在糖尿病患者中呈異常高表達狀態(tài)[6]，但具體作用機制仍待進一步研究。基于此，本研究旨在探討miRNA-21在妊娠期糖尿病患者中的水平及與血糖指標的相關(guān)性，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2018年2月至2020年1月于本院接受治療的78例妊娠期糖尿病患者納入試驗組。將同期來本院產(chǎn)檢的年齡、孕周與試驗組相近的健康孕婦80例作為對照組。試驗組年齡21～39歲，平均(26.43±4.26)歲；孕周7.6～21.3周，平均(13.4±1.2)周；體質(zhì)量指數(shù)(BMI)21.14～23.72 kg/m2，平均(22.48±0.65)kg/m2。對照組年齡23～37歲，平均(26.52±4.31)歲；孕周7.9～21.6周，平均(13.1±1.4)周；BMI 21.23～23.68 kg/m2，平均(22.54±0.62)kg/m2。兩組受試者一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)本院醫(yī)學倫理委員會審核批準，兩組受試者及家屬均已知曉且簽署知情同意書。

1.2納入與排除標準 納入標準：(1)所選受試者為單胎妊娠，試驗組患者均符合第13版《實用內(nèi)科學》中有關(guān)妊娠期糖尿病的診斷標準[7]；(2)所選受試者均能遵循醫(yī)囑完成相關(guān)檢查或治療。排除標準：(1)妊娠前合并甲狀腺功能亢進等內(nèi)分泌疾病者；(2)妊娠前合并冠心病、高血壓等疾病者；(3)有視聽障礙或意識障礙者；(4)近期服用降血壓、血糖的藥物或本次研究前已確診妊娠期糖尿病者；(5)合并心、肝、肺、腎等器官功能嚴重異常或凝血功能障礙者；(6)臨床資料不完整者或失訪者。

1.3方法 所選受試者均于入組后第1、3、5天清晨空腹抽取靜脈血3 mL，置于真空干燥管中，轉(zhuǎn)入EDTA采血管中，經(jīng)離心處理后取上清液進行檢測。

1.3.1血糖指標檢測 采用免疫比濁法檢測受試者入組后第1、3、5天糖化血紅蛋白(HbA1c)水平，采用葡萄糖氧化酶法檢測空腹血糖(FBG)水平，檢測儀器為美國貝克曼庫爾特公司生產(chǎn)的AU5800全自動生化儀，試劑盒均由上海東仁化學有限公司提供。

1.3.2miRNA-21檢測 取受試者入組后第1、3、5天的血液標本，采用miRcute miRNA 提取分離試劑盒抽提和純化總RNA，總RNA分裝標記并置于-80 ℃環(huán)境下保存。以總RNA為模板，按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書進行反轉(zhuǎn)錄，miRNA反轉(zhuǎn)錄采用miRcute Plus miRNA First-Strand cDNA試劑盒，獲取cDNA。應用miRcute Plus miRNA qPCR 試劑盒進行熒光定量PCR擴增。miRNA-21引物序列以U6為內(nèi)參基因?qū)δ繕嘶蜻M行歸一化處理。正向引物序列為5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′，反向引物序列為5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。反應參數(shù)設置：95 ℃預變性10 min，95 ℃變性15 s，60 ℃退火30 s，共40個循環(huán)。

2 結(jié) 果

2.1兩組受試者檢驗指標的比較 試驗組第1、3、5天的FBG、HbA1c及miRNA-21水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組受試者FBG、HbA1c及miRNA-21水平比較

2.2試驗組患者miRNA-21水平與血糖指標的相關(guān)性分析 試驗組患者的miRNA-21水平與FBG、HbA1c呈明顯正相關(guān)(r=0.782、0.618,P<0.05)。

3 討 論

妊娠期糖尿病指既往無糖尿病史，妊娠期間發(fā)生或首次被發(fā)現(xiàn)的糖尿病，是妊娠期最常見的并發(fā)癥之一[8]。目前全球范圍內(nèi)妊娠期糖尿病的患病率為1%～20%，占糖尿病孕婦的80%～90%，并呈逐年上升趨勢，嚴重影響母嬰健康[9]。由于妊娠期多種激素的相互作用及代謝的改變，使孕產(chǎn)婦易于發(fā)生糖尿病[10]。大部分妊娠期糖尿病患者的臨床癥狀會在妊娠結(jié)束后消失，但其產(chǎn)后轉(zhuǎn)為2型糖尿病的概率是其他孕產(chǎn)婦的數(shù)倍，特別是高齡、肥胖的孕產(chǎn)婦，這也是導致妊娠期糖尿病不良妊娠結(jié)局的高危因素[11]。關(guān)于糖尿病的臨床診斷方法，目前主要通過檢測FBG、葡萄糖耐量試驗(OGTT)和HbA1c水平作為臨床診斷依據(jù)[12]。其中FBG是最常用的糖尿病篩查和診斷指標，從1997年作為共識一直沿用至今，但該指標只能反映患者檢測即刻的血糖狀態(tài)，靈敏度較低，具有一定局限性，易造成漏診[13]。OGTT是我國臨床用于研究糖代謝狀況和評價糖尿病患者胰島β細胞功能的常用檢測方法，有著靈敏度高、特異度高、干擾因素較少的優(yōu)點，但該方法也存在著檢測手段復雜，檢測結(jié)果等待時間長等缺點，有少部分患者依從性差，并不利于臨床的廣泛開展[14]。HbA1c是血紅蛋白和血糖的最終結(jié)合物，因其結(jié)合反應不可逆，HbA1c水平可隨著血糖水平的升高而升高，也可隨著紅細胞的死亡而降低，可反映患者過去2～3個月的血糖變化情況，不易受進餐等因素的干擾，準確度較高。但HbA1c也有缺點，易受孕產(chǎn)婦中晚期血容量變化、血紅蛋白代謝速度及紅細胞壽命的影響，并不完全適用于高齡孕產(chǎn)婦作為糖尿病的診斷標準[15]。因此，尋求一種有效且安全的生物標志物來篩查和診斷妊娠期糖尿病，對改善妊娠期糖尿病患者的生活質(zhì)量有重要價值。

妊娠期糖尿病是多因素、多機制共同作用的結(jié)果，多個具有重要功能基因的表達水平會影響該病的發(fā)生、發(fā)展，故妊娠期糖尿病的分子調(diào)控機制研究對該病的早期篩查及診斷有重要意義[16]。有學者指出，miRNA是基因表達的主要監(jiān)管者和生物病理學的關(guān)鍵控制器，它的重要性已在癌癥、病毒性疾病、心血管疾病中被證實，而且其在胰島β細胞對胰島素的調(diào)節(jié)過程中也發(fā)揮著關(guān)鍵作用[17]。目前研究最多的miRNA包括miRNA-1、miRNA-21、miRNA-133、miRNA-181等，其中miRNA-21已被證實參與了脂肪細胞分化、糖酵解、胰島素分泌等生物學調(diào)控過程[18]。本研究結(jié)果顯示，妊娠期糖尿病患者miRNA-21、FBG和HbA1c水平明顯高于健康孕婦(P<0.05)，且經(jīng)Spearman相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，miRNA-21水平與FBG、HbA1c呈正相關(guān)(P<0.05)，說明妊娠期糖尿病患者的miRNA-21呈高表達，其水平會隨著血糖水平的上升而升高。分析其中原因：miRNA-21作為人類基因組中最早發(fā)現(xiàn)和命名的miRNA，其可直接作用于多種靶基因，表達水平也受多種因子的調(diào)控，當其直接靶向作用于胰島素受體、胰島素受體底物等因子時，可下調(diào)AMPK基因表達進而參與調(diào)控胰島β細胞的生長、存活和有絲分裂，導致機體糖代謝異常，誘發(fā)妊娠期糖尿病。

綜上所述，妊娠期糖尿病患者的miRNA-21水平相比健康孕婦明顯升高，其水平與FBG、HbA1c呈正相關(guān)，孕期動態(tài)監(jiān)測miRNA-21水平在一定程度上可預測妊娠期糖尿病是否發(fā)生。