血清miR-29a、miR-20a水平預測老年STEMI患者PCI治療后缺血再灌注損傷

李鑫檸 王學超 白世茹 黨懿 杜榮品

(河北省人民醫院心內科，河北 石家莊 050000)

經皮冠狀動脈介入(PCI)術是治療ST段抬高型心肌梗死(STEMI)有效方式，通過心導管技術，恢復患者心肌供血〔1〕。由于STEMI好發于老年群體，老年患者身體普遍較弱，常合并多種基礎疾病，PCI術后易出現缺血再灌注損傷(IRI)，威脅患者生命安全〔2〕。因此如能有效預測老年STEMI患者PCI治療后IRI風險，針對性干預，對改善患者預后有積極意義。微小核糖核酸(miRNA)參與多種心血管系統疾病的病理過程〔3〕。miR-29a、miR-20a均屬于miRNA的一種，其中miR-29a可調控心肌細胞凋亡，而miR-20a可抑制血管內皮生長因子表達，減少血管生成〔4〕。如能發現miR-29a、miR-20a與IRI的關系，通過miR-29a、miR-20a預測IRI風險，對挽救老年STEMI患者生命有積極意義。鑒于此，本研究著重分析血清miR-29a、miR-20a水平預測老年STEMI患者PCI治療后IRI的臨床價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2020年4月至2021年4月河北省人民醫院收治的100例行PCI治療的老年STEMI患者臨床資料，男57例，女43例；年齡60～78歲，平均年齡(67.18±3.57)歲；體重指數18～26 kg/m2，平均(22.10±1.28)kg/m2；紐約心臟病協會(NYHA)心功能分級：Ⅰ級23例，Ⅱ級49例，Ⅲ級20例，Ⅳ級8例。100例老年STEMI患者PCI治療后發生IRI 46例(46.00%，發生組)，其中再灌注性心律失常17例(36.96%)，再灌注低血壓29例(63.04%)。未發生IRI 54例為未發生組。

1.2入選標準 納入標準：①STEMI符合《內科學(第九版)》〔5〕中的診斷標準，并經冠狀動脈造影確診；②初次發??；③發病24 h內接受PCI治療；④臨床資料完整。排除標準：①合并肝腎功能不全；②合并周圍血管疾?。虎坶L期大量吸煙、飲酒；④合并惡性腫瘤。

1.3IRI診斷標準 參考《中國經皮冠狀動脈介入治療指南(2016)》〔6〕，① PCI術后開通冠狀血管≤4 h，繼發嚴重心動過緩伴低血壓、頻發室性期前收縮；②藥物治療或電復律及電除顫后伴有嚴重室性心律失常；③冠狀動脈造影診斷冠狀動脈前向血流心肌梗死溶栓治療0～2級，可見血栓、夾層及痙攣等血管閉塞。

1.4方法 取患者PCI術前靜脈血5 ml，離心(轉速3 000 r/min，離心15 min)取血清，20℃保存待檢，取血清樣本，37℃水中復溶，加入Trizol裂解液，提取血清總RNA，并測定RNA濃度與純度。采用逆轉錄試劑盒進行逆轉錄反應，取cDNA作為模板，使用實時熒光定量PCR儀7300Plus(國械注進20163220767，Life Technologies Holdings Pte Ltd)進行實時熒光定量聚合酶反應。miR-29a引物序列：上游：5′-GCCCTAGCACCATCTGAAAT-3′，下游：5′-GTGCAG GGTCCGAGG-3′；miR-20a上游：5′-GGGGTGTTTACGTAGACCAGAACCAC-3′，下游：5′-GTGCGTGTCGTGGAGTCG-3′；內參小分子U6上游：5′-ACAACTTTGGTATCGTGGAAGG-3′，下游：5′-GCCATCACGCCAGTT TC-3′。反應條件為95℃，5 min預變形，95℃，5 s變性、60℃，30 s退火循環36次，從60℃緩慢升至97℃，充分延伸收集熒光信號，繪制溶解曲線。以2-ΔΔCt表示miR-29a、miR-20a的相對表達量。

1.5一般資料收集 查閱老年STEMI患者臨床資料，記錄患者性別、年齡、體重指數、高血壓(參照相關指南〔7〕)、糖尿病(參照相關指南〔8〕)。取患者入院時靜脈血5 ml，離心(轉速3 000 r/min，離心15 min)取血清，使用血糖與血脂監測儀LipidPro(國械注進20152222771，OSANG Heaithcare Co.，Ltd.)檢測并記錄患者總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平。

1.6統計學方法 采用SPSS23.0軟件進行獨立樣本t檢驗、χ2檢驗、Logistic回歸分析；繪制受試者工作特征(ROC)曲線得到曲線下面積(AUC)，檢驗血清miR-29a、miR-20a水平預測老年STEMI患者PCI治療后IRI發生的價值：AUC<0.50無價值，0.50≤AUC<0.70診斷價值較低，0.70≤AUC<0.85診斷價值中等，>0.85診斷價值高。

2 結 果

2.1基線資料 發生組與未發生組性別、年齡、體重指數、高血壓、糖尿病、TC、TG、HDL-C、LDL-C比較差異無統計學意義(P>0.05)；發生組與未發生組NYHA心功能分級差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

2.2兩組血清miR-29a、miR-20a水平比較 發生組miR-29a水平高于未發生組，miR-20a水平低于未發生組，差異有統計學意義(P<0.001)。見表2。

表2 兩組血清miR-29a、miR-20a水平比較

2.3血清miR-29a、miR-20a水平與老年STEMI患者PCI治療后IRI發生的關系分析 將血清miR-29a、miR-20a水平作為協變量，老年STEMI患者PCI治療后IRI發生情況作為因變量(0=未發生，1=發生)，經Logistic回歸分析結果顯示，血清mi-29a水平過表達(OR>1，P<0.05)，miR-20a水平低表達與老年STEMI患者PCI治療后IRI發生相關(OR<1，P<0.05)。見表3。

2.4血清miR-29a、miR-20a水平預測老年STEMI患者PCI治療后IRI的價值分析 將血清miR-29a、miR-20a水平作為檢驗變量，將老年STEMI患者PCI治療后IRI發生情況作為狀態變量(0=未發生，1=發生)，繪制ROC曲線，結果顯示，血清miR-29a、miR-20a水平及聯合檢查預測老年STEMI患者PCI治療后IRI的AUC均>0.70，均有一定預測價值，其中聯合檢測診斷價值最高。見表4、圖1。

表4 血清miR-29a、miR-20a水平預測老年STEMI患者PCI治療后IRI的價值分析

圖1 血清miR-29a、miR-20a水平及聯合檢測預測老年STEMI患者PCI治療后IRI的ROC曲線

3 討 論

IRI是STEMI患者PCI治療后常見并發癥，主要因STEMI患者冠狀動脈突然開通恢復血流，易導致血管內皮細胞功能異常，氧自由基生成過多，攻擊細胞膜，使細胞膜功能單位結構與功能障礙，造成心肌細胞壞死，誘發IRI〔9〕。韓婷婷等〔10〕研究顯示，PCI術后IRI發生率約47.00%與本研究46.00%較為相似。提示STEMI患者PCI治療后IRI發生率較高。

miRNA是小分子非編碼RNA，在心肌梗死、心律失常等心臟疾病發生與發展過程中發揮重要作用〔11〕。miR-29a是miR-29家族中重要一員，在多種惡性腫瘤疾病的發生與發展中起到重要作用〔12〕。miR-20a是miR1-17-92基因簇產物，在血清中表達較為穩定，同時在血管生成中發揮重要作用〔13〕。本研究結果提示發生組老年STEMI患者miR-29a、miR-20a表達異常。進一步經Logistic回歸分析結果顯示，血清miR-29a水平過表達，miR-20a水平低表達與老年STEMI患者PCI治療后IRI發生相關。分析其原因為STEMI患者多存在血脂異常，患者機體中低濃度的氧化LDL可誘導miR-29a表達上調，使平滑肌細胞遷移能力增強，誘發急性冠狀動脈綜合征，增加IRI風險〔14〕。B細胞淋巴瘤(Bcl)-2是一種重要的抗凋亡蛋白，在細胞凋亡調控中，Bcl-2可通過阻止細胞色素(Cyt)-C釋放至細胞質中，抑制凋亡下游級聯反應〔15〕。而miR-29a可通過降解mRNA或抑制蛋白反應，抑制心肌細胞中細胞存活促進因子水平，促進心肌細胞凋亡，誘發IRI。同時據相關研究顯示，miR-29a可負向調節轉化生長因子(TGF)-β1因子的表達，促進多種疾病纖維化進程〔16〕。但TGF-β1也對心臟具有保護作用，TGF-β1可通過在缺氧條件下的抗氧化機制在心房肌細胞中發揮保護作用。因此miR-29a升高可導致STEMI患者心肌細胞凋亡，降低機體對心肌細胞的保護作用。

miR-20a可通過促進血管內皮生長因子(VEGF)的大量釋放，調節血管生成，加速側支循環建立，改善患者心肌缺血缺氧狀況〔17〕。如miR-20a水平降低，導致VEGF分泌量較少，無法有效建立側支循環，導致病情惡化。同時miR-20a是自噬相關基因(ATG)7典型的上游靶基因，與ATG7表達呈負相關，如miR-20a水平下降，則ATG7呈高表達，促進心肌細胞自噬，導致心肌受損，誘發IRI〔18〕。因此miR-20a可有效促進STEMI患者側支循環建立，降低心肌細胞自噬，起到保護心肌細胞的作用。此外本研究進一步繪制ROC曲線結果提示STEMI患者血清miR-29a、miR-20a水平可有效預測PCI術后IRI風險。

綜上所述，血清miR-29a、miR-20a水平能夠有效預測老年STEMI患者PCI治療后IRI發生風險，臨床可通過檢測血清miR-29a、miR-20a水平，為早期防治IRI發生提供依據。