HPLC 法測定對乙酰氨基酚雜質含量

支永強，劉曉蓮，馬寧寧，韓 嘯，楊藏軍，王俊凱，代國愛，郝新庭

（河北冀衡藥業股份有限公司，河北 衡水 053400）

0 引言

對乙酰氨基酚（Paracetamol） 是由對氨基苯酚和冰醋酸通過酰化反應生產而成，又名撲熱息痛，為白色結晶或結晶性粉末，無臭，味微苦，是一種臨床上常用的解熱鎮痛藥。

對乙酰氨基酚解熱鎮痛的作用與阿司匹林相似，但基本無抗炎作用，對血小板及凝血機制無影響，另外，對乙酰氨基酚還具有解熱作用緩慢而持久、刺激性較小、極少有過敏反應等優點。此外，其還可用于藥物撲炎痛的合成、作為有機合成的中間體和過氧化氫的穩定劑等。

企業對于科研項目成果轉化的意識較淡薄。主要體現在兩方面：科研課題大多集中于理論層面方面，與解決實際問題有關的科研項目仍然較少，許多項目缺乏市場分析，容易造成科研成果與市場需求不匹配，成果轉化難度加深；另一方面，科研項目管理大多局限于完成結項驗收，缺乏對階段性成果和最終成果的凝結與轉化，導致科研項目成果沒有得到及時的應用和推廣。

目前，對乙酰氨基酚已成為世界上應用最廣泛的藥物之一，是國際醫藥市場上頭號解熱鎮痛藥，同時也是我國原料藥中產量最大的品種之一。

1.1.3 儀器:日立7020型全自動生化分析儀;Beckman-Coulter MAXM血球分析儀;電子稱(常熟市雙杰測試儀器廠產品);萬分之一電子天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司產品);Thermo BIOFUGE PRIMO R型離心機。

參照中國藥典2020 版要求，當使用高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC） 檢測對乙酰氨基酚原料藥時，時常檢測到對乙酰氨基酚二聚體雜質峰，有時導致對乙酰氨基酚質量不合格，需返工處理。所以我們采用HPLC法測定對乙酰氨基酚二聚體來達到提高產品質量的目的。

1 實驗儀器與試劑

1.1 主要實驗儀器

UltiMate 3000 型高效液相色譜，賽默飛世爾科技（中國） 有限公司。

KQ-250DB 型數控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司。

Dsent=0.001918dcip(-1)+0.000884dcip(-2)-0.461604dsent(-1)-0.708382dsent(-2)+0.019000(M)

PURELAB flex 型超純水儀，威立雅水處理技術（上海） 有限公司。

BSA224S 型電子分析天平，賽多利斯科學儀器（北京） 有限公司。

(2)離散數據網格化→參數設置：搜索半徑為采樣點距的2～5倍。(RX=2000，RY=2000，冪指數加權，指數因子10)。

1.2 主要實驗試劑

磷酸氫二鈉，天津市大茂化學試劑廠。

2.范圍拓展。一方面，家庭作為穩定的社會支持系統，對社區服刑人員心理矯治的效果有輔助促進作用，因此心理干預不再僅限于社區服刑人員，也包括其家庭成員，通過家庭心理咨詢改善了社區服刑人員與家庭成員之間的不良關系，減少了因家庭所造成的不良應激，避免了家庭成員對社區服刑人員過多的指責或過分的關心，尤其是對未成年的社區服刑人員和暫予監外執行的社區服刑人員，有利于他們的社會功能修復，促使他們順利回歸社會。另一方面，村居社區矯正協管員聘用制度已覆蓋全區，協管員掌握心理咨詢知識有助于在走訪社區服刑人員時，通過觀察其表情和肢體語言，了解社區服刑人員的真實狀態。

進樣量：20 μL。

磷酸二氫鈉，天津市大茂化學試劑廠。

10%四丁基氫氧化銨水溶液，上海麥克林生化科技有限公司。

甲醇，美國迪馬科技有限公司。

其它各雜質峰面積的和不得大于對照溶液中對乙酰氨基酚峰面積的0.5 倍（0.5%）。

檢測波長：245 nm。

2 方法與結果

2.1 對乙酰氨基酚二聚體結構式

對乙酰氨基酚二聚體結構式如圖1 所示。

2.2 色譜條件

色譜柱：辛烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱（AcclaimTM120 C8，250 mm×4.6 mm×5 μm）。

流動相：以磷酸鹽緩沖液（取磷酸氫二鈉8.95 g，磷酸二氫鈉3.9 g，加水溶解至1000 mL，加10%四丁基氫氧化銨溶液12 mL） - 甲醇（90∶10）為流動相。

我躡手躡腳地走上陽臺，生怕驚破了這場難得的精神“艷遇”。遠遠看去，曇花那海帶狀的綠葉上，一朵朵嬌嫩的花蕾似乎正在微微顫動著。那白玉般的花苞徐徐綻開，鵝黃色的花蕊悄悄地探出花苞，有如初降生的嬰兒滿帶著好奇打量著眼前的世界。漸漸地，片片花瓣如電影中的慢鏡頭一般完全展開，展現給我的是一種驚世駭俗的美麗！我不敢用手，只能用一種滿含溫柔的目光輕輕地觸摸著它們。

流速：1.0 mL/min。

柱溫：40 ℃。

(3)預埋螺栓控制器的設置。利用布置好的控制點，在控制點兩側斜插鋼筋，架設鋼管支架，兩端裝緊線器，抽緊緊線器上的鋼絲繩，使鋼絲繩位于控制軸線上。

其中，甲醇為色譜純，磷酸氫二鈉，磷酸二氫鈉，10%四丁基氫氧化銨水溶液均為分析純試劑。

樣品稀釋劑：甲醇∶水（4∶6）。

測繪新技術在建筑工程測量中的地位越來越重要，尤其是隨著建筑工程行業的規模不斷壯大其重要性越來越突出。但與此同時，傳統的測繪技術因為效率、準確性和可靠性的問題很難再滿足建筑工程發展的需要。在這種狀況下，越來越多的新的測繪技術不斷涌現對推動測繪事業的發展以及提高建筑工程測量的準確度和可靠性起到了重要作用。

理論板數按對乙酰氨基酚峰計算≥2000，雜質二聚體與對乙酰氨基酚峰的分離度應符合要求。

2.3 溶液配制

供試品溶液：取本品0.2 g，精密稱定，加溶劑（甲醇∶水為4∶6） 溶解并稀釋至10 mL 制成每1 mL 中約含20 mg 的溶液，作為供試品溶液。

對照溶液：另取對乙酰氨基酚二聚體雜質對照品10 mg，精密稱定，加溶劑（甲醇∶水為4∶6）溶解，并稀釋至100 mL 的容量瓶中。制成每1 mL中約含對乙酰氨基酚二聚體0.1 mg 溶液，作為對照品溶液。

精密量取對照品溶液與供試品溶液各1 mL，置同一100 mL 量瓶中，加溶劑（甲醇∶水為4∶6） 稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。

選擇我院內科1-3月份住院病人有便秘癥狀患者隨機選取60名,隨機分為2組,年齡60-92歲,平均年齡78.9歲,其中男33例,女27例,隨機分為2組,每組30例,2組患者(性別、年齡、病程等)資料比較差異無統計學意義,具有可比性。

系統適用性要求理論板數按對乙酰氨基酚峰計算≥2000，雜質二聚體與對乙酰氨基酚峰的分離度應符合要求。

精密量取供試品溶液與對照品溶液各20 μL,分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的4 倍。

供試品溶液的色譜圖中如有與對照品溶液中對乙酰氨基酚二聚體雜質保留時間一致的的色譜峰，按外標法以峰面積計算，對乙酰氨基酚二聚體雜質峰面積≤對照品溶液中對乙酰氨基酚的峰面積的0.1 倍（0.1%）。

對乙酰氨基酚二聚體標準品，含量＞99%，TRC 多倫多研究化學品公司。

2.4 HPLC 方法學考察

2.4.1 專屬性考察

取空白溶劑20 μL，按照“2.1”項下的色譜條件，注入液相色譜儀。檢測結果表明，無其它色譜雜峰，對對乙酰氨基酚及對乙酰氨基酚二聚體的含量測定無明顯干擾，證明該方法專屬性良好。

2.4.2 線性關系考察

精密稱取對乙酰氨基酚二聚體雜質標準品適量，加樣品稀釋劑溶解并稀釋成濃度為50、100、200、300、400、500 μg/mL 的6 個不同對乙酰氨基酚二聚體雜質標準品溶液，并依次編號。

我國的軍糧供應工作已經走上了制度化、標準化、規范化道路，軍糧管理、供應和服務工作得到很大的發展。現在紙制軍用糧票已經被更先進、更快捷的電磁卡所取代，紙制軍用糧票完成了歷史任務，在我黨我軍的歷史上為中國人民的解放事業和國防建設事業做出了重大貢獻，將被載入史冊，彪炳千秋，為后人銘記。

取上述各濃度的溶液20 μL，按照“2.1”項下的色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖并計算峰面積。得出的數據以峰面積為縱坐標，以乙酰氨基酚二聚體雜質的濃度為橫坐標，繪制標準曲線。對乙酰氨基酚二聚體雜質線性關系圖如圖2所示。

由圖2 可以看出，在50 ～500 μg/mL 的線性范圍內，具有良好的線性關系，相關系數R2=0.9998，線性方程為y=0.525 x+10.595。

2.4.3 重復性考察

精密稱定對乙酰氨基酚二聚體標準品適量，配制成對乙酰氨基酚二聚體標準品0.4 mg/mL 的溶液，取上述溶液20 μL，按照“2.1”項下的色譜條件，注入液相色譜儀，連續進樣6 針。結果表明，檢測液相檢測重復性良好，各峰面積RSD＜2.0%，符合分析方法學要求。對乙酰氨基酚二聚體雜質液相色譜圖譜如圖3 所示。

圖3 對乙酰氨基酚二聚體雜質液相色譜圖譜Fig.3 A liquid chromatography map of the acetaminophen dimer impurities

2.4.4 穩定性考察

精密稱定對乙酰氨基酚二聚體標準品適量，加樣品稀釋劑稀釋成適當濃度的供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、18、24 h 各取20 μL，按照“2.1”項下的色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果表明，與0 小時相比，24 h 溶液穩定，峰面積RSD＜2%，符合方法學要求。且系統適用性實驗表明，理論板數按對乙酰氨基酚峰計算＞2000，雜質二聚體與對乙酰氨基酚峰的分離度＞1.5，分離度應符合要求。

針對性產品的研發離不開大數據的收集反饋，更離不開創新研發實力的支持。他表示，未來倍豐鹽湖農業科技將繼續發揮自身優勢，不斷整合各方資源，向產業鏈上下游持續延伸，與各科研院所不斷加強合作，在現有的產品基礎上加大創新研發力度，不斷推陳出新，為中國農民提供越來越多的、具有針對性的優質肥料。

2.4.5 樣品的檢測

按“2.2”項下溶液的配制標準，取六批樣品進行有關對乙酰氨基酚二聚體雜質的檢測，雜質的量分別為0.05%、0.07%、0.08%、0.08%、0.06%、0.05%，均符合中國藥典2020 版要求。

3 結語

本文以辛烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm） 為固定相；以磷酸鹽緩沖液（取磷酸氫二鈉8.95 g，磷酸二氫鈉3.9 g，加水溶解至1000 mL，加10%四丁基氫氧化銨溶液12 mL） - 甲醇（90 ∶10） 為流動相；流速：1.0 mL/min；柱溫：40 ℃；進樣量：20 μL；檢測波長：245 nm。該方法對乙酰氨基酚雜質線性關系良好，線性方程：y =0.525 x +10.595，R2=0.9998。實驗操作簡單，簡便快速、準確可靠的測定對乙酰氨基酚以及乙酰氨基酚雜質的含量，為提高對乙酰氨基酚產品的質量提供了保障。