香格里拉地區規模化豬場豬瘟病毒抗體檢測情況分析

余麗花，和彩云

摘要：為了了解香格里拉地區豬瘟病毒抗體水平，本文對香格里拉地區5個規模化豬場的不同日齡階段的豬進行抗體水平檢測，并進行情況分析。結果顯示，5個規模化豬場的豬瘟抗體陽性率分別為72.72%、81.45%、66.86%、79.81%和82.29%，有4個規模化的場高于國家規定的水平（>70%）;且5家規模化豬場的豬瘟抗體檢測離散度均小于40%，說明這5家豬場的整體豬瘟疫苗免疫抗體水平整齊，疫苗的免疫效果良好;哺乳仔豬、保育豬、育肥豬、后備豬、經產母豬、種公豬的豬瘟抗體陽性率分別為28.85%、89.90%、85.45%、87.78%、78.46%和97.22%;各個階段的豬只的離散度分別為45.76%、30.77%、29.23%、22.47%、30.24%和22.31%，可以看出哺乳仔豬的豬瘟抗體離散度>40%，說明該階段豬瘟抗體水平一般，哺乳仔豬的豬瘟抗體主要是從母源抗體獲得，所以其抗體水平間接反映了母豬群的抗體水平;保育豬、育肥豬、后備豬、經產母豬、種公豬豬瘟抗體水平離散度均較集中，豬瘟疫苗免疫效果良好。

關鍵詞：香格里拉地區;豬瘟;抗體;情況分析

豬瘟是一種可以感染家豬和野豬的傳染病，對社會經濟具有重大影響[1]。豬瘟病毒屬于黃病毒科、瘟病毒屬，是我國一類動物傳染病，各個階段和各個品種的豬均易感，感染豬的潛伏期有長有短，最急性型的感染豬在48h后就會出現典型癥狀，急性型的潛伏期一般為2～4d，慢性感染豬在臨床上5d以上才出現臨床癥狀，更有甚者感染后20d才出現癥狀，該病隱蔽性較強，所以在日常生產中養戶和一些衛生防疫部門很難及時發現，對豬瘟疫情造成忽視，給我國養豬業造成巨大的經濟損失[2，3]。疫苗免疫目前是預防豬瘟病毒感染的重要措施[4]。評價疫苗免疫效果，最重要的手段就是抗體檢測，對當地的豬場進行豬瘟血清學檢測，可以了解當地豬群豬瘟的免疫水平[5]。所以本文采用血清學方法對香格里拉地區的5個規模化豬場進行豬瘟抗體檢測，以期為該地區的豬瘟疫苗免疫情況提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品

待檢血液樣品采集于香格里拉地區的5個規模化豬場，總共624份;按階段分為哺乳仔豬104份、保育豬99份、育肥豬110份、后備豬135份、經產母豬104份、種公豬72份。

1.2 試劑和儀器設備

豬瘟病毒抗體檢測試劑盒購于北京愛德士元亨生物科技有限公司;酶標儀Infinite F50（美國帝肯），自動洗板機（美國帝肯HydroFlex）。

1.3 試驗方法

1）樣品采集方法。血液樣品按照5mL/頭進行采集，采集部位選擇待檢豬的前腔靜脈，通過采血管采集的血液在室溫下靜置30min后，吸出血清，放于1.5mL無菌的EP管中，同時在管上做號分組標記，最后用冷凍離心機3，000r/min進行離心10min，使血清中的紅細胞充分分離，分離到的血清放于-20℃保存待用。

2）抗體檢測。購買的抗體檢測試劑盒，根據其說明書進行操作。首先按要求對抗原包被板進行回溫處理，回溫處理之后的包被板不做任何處理，在稀釋板條上1：1稀釋好的樣品血清、陽性對照和陰性對照各取100μL加入包被板中，用微型振蕩器混勻后置于恒溫恒濕培養箱中孵育2h，孵育完后棄去板上的液體，然后用洗板機洗滌3次，后加入抗豬瘟病毒的辣根過氧化物標記物，在恒溫箱中進行30min標記孵育，孵育完后再次洗滌3次，然后加入TMB底物避光顯色10min，最后加入終止液，利用酶標儀在波長450nm測定各反應孔中的OD值。

3）結果判定。結果判定根據公式：樣品阻斷率（%）=100%*[陰性對照A（450）-樣品A（450）]/陰性對照A（450）。試驗成立的條件為陰性對照的OD450值>0.500，陽性對照的阻斷率≥50%。待檢樣品的阻斷率小于30%，該樣品豬瘟抗體為陰性，體內無豬瘟抗體;若待檢樣品阻斷率≥40%，該樣品豬瘟抗體為陽性，表示有豬瘟抗體;若待檢樣品的阻斷率在30%～40%，則為可疑，對其需要重新進行檢測。

變異系數（CV）=（標準差/平均數）*100%。CV≤40%表示抗體水平整齊，豬瘟疫苗免疫效果良好;40%60%則表示抗體水平不集中，間接反映了疫苗免疫效果不好。

2 結果

2.1 不同規模化豬場的整體抗體水平

由表1可以看出，5個規模化豬場的豬瘟抗體陽性率分別為72.72%、81.45%、66.86%、79.81%和82.29%，有4個規模化的場高于國家規定的水平（>70%）;且5家規模化豬場的豬瘟抗體檢測離散度均小于40%，說明這5家豬場的整體豬瘟疫苗免疫抗體水平整齊，疫苗的免疫效果良好;但是這5個場的整體陽性率為76.86%，陽性率不是很高。

2.2 不同階段豬群的豬瘟抗體水平

由表2可以看出哺乳仔豬、保育豬、育肥豬、后備豬、經產母豬、種公豬的豬瘟抗體陽性率分別為28.85%、89.90%、85.45%、87.78%、78.46%和97.22%;各個階段的豬只的離散度分別為45.76%、30.77%、29.23%、22.47%、30.24%和22.31%，可以看出哺乳仔豬的豬瘟抗體離散度>40%，說明該階段豬瘟抗體水平一般，哺乳仔豬的豬瘟抗體主要是從母源抗體獲得，所以其抗體水平間接反映了母豬群的抗體水平;保育豬、育肥豬、后備豬、經產母豬、種公豬豬瘟抗體水平離散度均較集中，豬瘟疫苗免疫效果良好。

3 討論

豬瘟病毒血清抗體的檢測對于臨床上診斷和免疫效果的評估、適宜免疫時機的選擇都有很重要的指導意義。目前豬瘟病毒的抗體檢測方法主要有正向間接血凝試驗、間接ELISA、阻斷ELISA、瓊脂擴散試驗、膠體金免疫層析試紙條等[6-8]。本文采用阻斷ELISA方法對香格里拉地區規模化豬場豬瘟病毒抗體檢測情況分析，發現5家規模化的豬場有一家豬瘟抗體陽性率低于國家的標準（<70%），造成該場豬瘟抗體水平較低的原因可以從多方面考慮，如豬場管理員免疫方法不當、飼養環境條件差等，所以豬場應結合自身的實際生產情況進行豬瘟疫苗免疫程序的調整[9]。有研究報道抗體水平低于40%，不僅代表豬場的整體疫苗的免疫效果較好，同時還表示該豬場散發豬瘟的危險度小[10];從香格里拉這5個規模化豬場的整體抗體離散度均低于40%，說明這5個規模化豬場的整體豬瘟疫苗免疫效果良好。

從不同階段的豬瘟抗體檢測情況來看，哺乳仔豬的抗體陽性率為28.85%，說明了哺乳仔豬的整體抗體水平偏低，對于哺乳仔豬的抗體是從母豬的母源抗體中獲得，抗體水平偏低可能是不同仔豬受母源抗體影響程度不同所致，同時受母源抗體水平均勻度和整齊度及受母體和個體影響[11];經產母豬的豬瘟抗體陽性率為78.46%，說明香格里拉地區的這5個規模化豬場的整體母豬群的豬瘟疫苗免疫情況還是比較不理想，需要調整為更合適自身本場的免疫程序[12]。保育豬、育肥豬、后備豬、種公豬的豬瘟抗體陽性率分別為89.90%、85.45%、87.78%和97.22%，表明這些階段的豬瘟疫苗免疫效果較好。

綜上所述，目前規模化豬場對于豬瘟的防控主要還是要靠疫苗免疫，對疫苗整體的免疫水平進行監測是規模化豬場完善自身免疫程序的一種重要手段;規模化豬場可以根據本場豬瘟抗體水平的波動來合理的安排和調整疫苗，從而提高疫苗的免疫效果，避免造成疫苗及人力的浪費，所以是一種可以廣泛應用于養豬產業的監測方法[13]。

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