山西老陳醋源萎縮芽孢桿菌細菌素對病原菌群體感應的抑制研究

許春青，李 陽，魏莎莎，李田田，朱 丹，王 愈，張曉宇，許 女

（1.食醋發酵科學與工程山西省重點實驗室，山西 太原 030400；2.山西紫林醋業股份有限公司，山西 太原 030400；3.山西農業大學食品科學與工程學院，山西 晉中 030801）

群體感應（quorum sensing，QS）是微生物根據周圍細胞密度產生和釋放信號分子[1]，信號分子的數量隨著菌體濃度變化而變化，不同濃度的信號分子對基因的表達有著不同的調控，從而導致群體顯現出與單個菌體不同的表達的一種生理活動。群體感應使得細菌可以更好的應對外界環境，各類微生物均存在群體感應這一現象[2]。常見的QS信號分子有：自體誘導多肽（autoinducing peptides，AIPs）、N-酰基-高絲氨酸內酯類（N-acyl-homoserinelactones，AHLs）、自體誘導物2（autoinduction-2，AI-2）、自體誘導物3（autoinduction-3，AI-3）[3]。AIPs是種內群體感應信號分子，首先通過腺苷三磷酸（adenosine triphosphate，ATP）結合盒（ATPbinding cassette，ABC）轉運蛋白被釋放到細胞體外，待其在體外積累到一定濃度時，調節胞內受體蛋白，受體蛋白結合脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA），調節轉錄表達[4]。AHLs含有一個結構穩定的內酯環和一個可變的酰基側鏈，是最普遍的一類信號分子[5]，其種類較多，但其調控表達的機制大致相同。AI-2在細菌中普遍存在，為雙五圓環結構，主要作用于細菌間的交流[6]。AI-3也是種間信號分子，僅存在于革蘭氏陰性菌，到目前為止還不曾在革蘭氏陽性菌中被發現過[3]。

二酮哌嗪（diketopiperazine，DKPs）化合物，是最新研究發現的信號分子。DKPs有兩個氫鍵給體與受體，保證了抗菌性、抗氧化活性等生物、藥理活性[7]。因此，DKPs的發現為革蘭氏陰性菌的后續研究奠定了基礎。到目前為止，能夠產生DKPs的微生物中，90%都是革蘭氏陰性菌，另外在一些真菌中也有發現[8]。DKPs具有許多重要的生物活性，近期DKPs還被發現能夠激活或者競爭性抑制受體蛋白QSLux[9]，DKPs與LuxR型蛋白結合，調節QS系統[10-11]。顧清清等[12]在大黃魚特定腐敗細菌海希瓦氏菌（Shewanella baltica）OS185中檢測到了DKPs，發現DKPs可以調控細菌的腐敗能力。GU Q Q等[13]發現，在波羅的海希瓦氏菌中，DKPs作為信號分子，也能促進腐敗。李田田[14]就萎縮芽孢桿菌（Bacillus atrophaeus）的抑菌物對DKPs引起腐敗菌致腐能力的抑制作用進行了研究，發現信號分子DKPs對5種腐敗菌的生長、生物被膜、胞外多糖含量及泳動性都有促進作用。

目前，抑菌劑根據成分主要可以分為化學抑菌劑和天然抑菌劑，化學抑菌劑價格低廉、作用快，但是存在很大的弊端，化學藥品都存在一定的毒性，長時間食用，對人體會造成不可避免的危害。天然抑菌劑具有無毒性、安全性、作用范圍廣等諸多優點[15]，其中，微生物抑菌劑作為目前食品中的新型抑菌劑，具有很好的研究前景。國內外關于微生物抑菌物質的研究主要集中于乳酸菌和芽孢菌，芽孢菌能產生具有高效抑菌作用的代謝產物（如脂肽、細菌素、肽類抗生素等）[3]，在果蔬保鮮防腐開發方面具有很好的應用前景。因此，本研究首先考察了5種腐敗病原菌產生信號分子DKPs能力，然后考察不同理化因子及山西老陳醋源萎縮芽孢桿菌（Bacillus atrophaeus）SAV-CP 297細菌素對5種腐敗病原菌產生信號分子DKPs能力的影響，最后考察萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素對抑制草莓菌腐敗群體感應的能力，以期為微生物抑菌劑在果蔬貯藏的廣泛應用、對微生物抑制劑的前景和開發價值提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 材料與菌株

山西老陳醋源萎縮芽孢桿菌（Bacillus atrophaeus）SAV-CP 297、大腸桿菌（Escherichia coli）ATCC 8739NA、沙門氏菌（Salmonella）CMCC 50041-16、志賀氏菌（Shigella）ATCC 12022、單增李斯特菌（Listeria monocytogenes）ATCC 19114和金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）ATCC6538：均保存于山西農業大學食品科學與工程學院生物工程實驗室；新鮮草莓：市售。

1.1.2 試劑

腦心浸液肉湯（brain heart infusion broth，BHI）培養基、MRS液體培養基、蛋白胨（生物試劑）、抗壞血酸（分析純）、硫代巴比妥酸（分析純）、三氯乙酸（分析純）：西亞化學科技有限公司；DKPs cycLo-（L-Pro-L-Phe）標準品（生物試劑）：北京中科質檢生物技術有限公司。其他試劑均為國產分析純。

1.2 儀器與設備

KH22R高速冷凍離心機：萊州辰達化工機械有限公司；Trace1300氣相色譜-TraceISQ質譜（gas chromatgraphy mass spectrometrometry，GC-MS）分析儀：賽默飛世爾科技（中國）有限公司；XK96渦旋儀：江蘇新康醫療器械有限公司；RE201D-真空旋轉蒸發儀：鞏義市英峪儀器廠。

1.3 方法

1.3.1 病原菌產信號分子DKPs能力的測定

將大腸桿菌ATCC8739NA、沙門氏菌CMCC 50041-16、志賀氏菌ATCC 12022、單增李斯特菌ATCC 19114和金黃色葡萄球菌ATCC 6538 5株病原菌分別接種于1 mL BHI液體培養基中，37 ℃培養12 h進行活化后，按5%（V/V）的接種量分別接種于50 mL的BHI液體培養基中，37 ℃、160 r/min條件下培養至對數生長末期，10 000 r/min離心10 min，分別取40 mL上清液，用等體積氯仿萃取3次，收集有機相，用等體積超純水清洗有機相一次后37 ℃旋轉蒸干，分別用氯仿重新溶解上述蒸發瓶中的殘留物，定容至1 mL，0.45 μm微孔過濾器過濾，進行GC-MS分析[16-17]。

1.3.2 不同理化因子對病原菌產信號分子DKPs能力的影響

將活化好的5株病原菌按5%（V/V）的接種量分別接種于裝有不同NaCl含量（0.5%、1.5%、2.5%、3.5%）、不同pH值（4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0）的50 mL的BHI液體培養基中，在不同溫度（10 ℃、25 ℃、30 ℃、37 ℃、45 ℃），160 r/min條件下培養至對數生長末期，10 000 r/min離心10 min，取上清液40 mL，用等體積氯仿萃取3次，收集有機相，用等體積超純水清洗有機相一次后37 ℃旋轉蒸干，分別用氯仿重新溶解上述蒸發瓶中的殘留物，定容至1 mL，0.45 μm微孔過濾器過濾，進行GC-MS分析[16-17]。

1.3.3 萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素對病原菌產信號分子DKPs能力的測定

（1）萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297無細胞提取濃縮液的制備

按5%（V/V）的接種量將萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297接種至100 mL的MRS液體培養基，37 ℃、160 r/min條件下培養24 h，然后10 000 r/min、4 ℃條件下離心10 min，取上清，用6.0 mol/L的NaOH溶液將其pH值調整至7.0，82 ℃旋轉蒸發濃縮至20 mL，可得萎縮芽孢桿菌CP 297的無細胞提取濃縮液（cell-free extract，CFE（5×））。

（2）萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素對病原菌產信號分子DKPs能力的測定

將活化的5株病原菌按5%（V/V）的接種量分別接種于50 mL的BHI液體培養基中，加入5%（V/V）的CFE（5×），分別于37 ℃、160 r/min條件下培養至對數生長末期，10 000 r/min離心l0 min，取上清液40 mL，用等體積氯仿萃取3次，收集有機相，用等體積超純水清洗有機相一次后37 ℃旋轉蒸干，分別用氯仿重新溶解上述蒸發瓶中的殘留物，定容至1 mL，0.45 μm微孔過濾器過濾，進行GC-MS分析[16-17]。

1.3.4 萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素對病原菌群體感應的抑制

（1）萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素的制備

按5%（V/V）的接種量將萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297接種至100 mL的MRS液體培養基，37 ℃、160 r/min條件下培養24 h，然后10 000 r/min、4 ℃條件下離心10 min，取上清，用6.0 mol/L的NaOH溶液將其pH值調整至7.0，82 ℃旋轉蒸發濃縮至20 mL，將其置于燒杯內，加入硫酸銨，充分溶解，待其飽和度達到80%，置于4 ℃冰箱，存放一夜，4 000 r/min條件下離心20 min，保留沉淀，采用5 mL（pH=7.2）的磷酸緩沖鹽溶液（phosphate buffer saline，PBS）復溶，透析除鹽，經濃縮真空冷凍干燥后得萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素粗提物。

（2）病原菌混合液的制備

按3%（V/V）的接種量將5株病原菌分別接種至100 mL的BHI液體培養基，37 ℃、160 r/min條件下培養12 h，然后10 000 r/min、4 ℃條件下離心10 min，取菌體細胞，以無菌0.1%蛋白胨水洗滌2次，通過無菌水重懸，使細胞濃度達到104CFU/mL，等體積混合5種病原菌菌懸液。

（3）萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素在草莓保鮮貯藏中的應用

新鮮草莓放在無菌平皿中（直徑9 cm），采用容量為50 mL的小噴壺將每顆草莓分別按表1中的處理方法均勻噴施，之后在超凈臺無菌風吹干后覆蓋保鮮膜，置于4 ℃冰箱中，每天觀察記錄其狀態，并按照文獻[18]的方法測定菌落總數與5株病原菌菌落數，按照文獻[17]測定草莓失重率、可溶性固形物、總糖、總酸、多酚氧化酶（polyphenol oxidase，PPO）、過氧化物酶（peroxidase，POD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、細胞膜通透性。

表1 新鮮草莓的不同處理方式Table 1 Different treatments of fresh strawberry

2 結果與分析

2.1 病原菌產信號分子能力的測定

5種病原菌培養上清液中信號分子的相對含量見圖1。由圖1可知，大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、志賀氏菌、沙門氏菌和單增李斯特菌產cyclo-（L-Pro-L-Leu）的相對含量最高，分別為11.94%、12.55%、17.38%、7.31%、12.14%，說明志賀氏菌產cyclo-（L-Pro-L-Leu）的能力明顯高于其他4株病原菌；產cyclo-（L-Pro-L-Gly）的相對含量最低，分別為0.58%、0.98%、0.45%、0.98%、0.20%，單增李斯特菌產cyclo-（L-Pro-L-Gly）的能力明顯低于其他4株菌。另外5株病原菌產cyclo-（L-Pro-L-Phe）的相對含量差距不大，分別為1.26%、1.24%、1.42%、1.44%和1.43%。

圖1 5種病原菌產信號分子二酮哌嗪能力的測定結果Fig.1 Determination results of diketopiperazine producing ability of 5 pathogenic bacteria

2.2 不同理化因子對病原菌產信號分子DKPs能力的影響

2.2.1 NaCl含量對病原菌產信號分子DKPs能力的影響

NaCl含量對病原菌產信號分子DKPs能力的影響見表2。由表2可知，病原菌分泌信號分子DKPs的含量及種類均受到NaCl含量的影響，大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、單增李斯特菌在0.5%NaCl條件下有3種類型的信號分子DKPs，在1.5%NaCl、2.5%NaCl、3.5%NaCl條件下只有cyclo-（L-Pro-L-Leu）、cyclo-（L-Pro-L-Phe）2種類型的信號分子DKPs，并且隨著NaCl含量的增加，各類DKPs信號分子的相對含量呈下降趨勢；沙門氏菌、志賀氏菌在0.5%NaCl和1.5%NaCl條件下有3種類型的信號分子DKPs，在2.5%NaCl和3.5%NaCl條件下只有cyclo-（L-Pro-L-Leu）、cyclo-（L-Pro-L-Phe）2種類型的DKPs信號分子，并且隨著NaCl含量的增加，各類信號分子DKPs的相對含量呈下降趨勢；綜上所述，在高鹽環境下，病原菌產信號分子DKPs的相對含量均有所降低。李婷婷等[19]檢測了不同含鹽量下嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）產信號分子的情況，結果顯示當含鹽量為25 g/L時，A.hydrophila產生的信號分子的濃度最高；孫秀嬌等[20]以NaCl含量為變量，對凡納濱對蝦源不動桿菌M1分泌AHLs的情況進行研究，結果發現，含鹽量為0.5%～2.0%時，菌株M1生長會受到影響，分泌AHLs的能力并無明顯差異；當含鹽量為3.0%～5.0%時，菌株M1分泌AHLs的能力明顯變強。在本試驗中，0.5%的NaCl含量條件下5株病原菌分泌DKPs信號分子的能力最強，隨著NaCl含量的提高，細菌分泌DKPs信號分子的能力不斷減弱，因而認為，高含鹽量不利于5株病原菌分泌信號分子DKPs。

表2 NaCl含量對5株病原菌產信號分子二酮哌嗪能力的影響Table 2 Effect of NaCl content on the ability of 5 pathogenic bacteria producing signal molecule diketopiperazine

2.2.2 pH值對病原菌產信號分子DKPs能力的影響

pH值對病原菌產信號分子DKPs能力的影響見表3。由表3可知，病原菌分泌信號分子DKPs的種類和含量受pH值的影響，5種病原菌在pH=7的條件下均分泌3類信號分子DKPs，且信號分子含量較高。大腸桿菌、志賀氏菌和單增李斯特菌在pH=4、pH=5、pH=6條件下只能分泌cyclo-（L-Pro-L-Leu）和cyclo-（L-Pro-L-Phe）2類信號分子DKPs，在pH=7、pH=8條件下可以分泌3類信號分子DKPs，在pH=9條件下，大腸桿菌和志賀氏菌分泌3類信號分子DKPs，單增李斯特菌只能分泌cyclo-（L-Pro-L-Leu）和cyclo-（L-Pro-L-Phe）2類信號分子DKPs，并且pH值對信號分子DKPs的相對含量有較大影響，在pH=7時，3類信號分子的相對含量均達到最大；金黃色葡萄球菌、沙門氏菌在pH=4、pH=5條件下只能分泌cyclo-（L-Pro-L-Leu）、cyclo-（L-Pro-L-Phe）2類信號分子DKPs，在pH=6、pH=7、pH=8時分泌3類信號分子DKPs，在pH=9時，金黃色葡萄球菌分泌3類信號分子DKPs，沙門氏菌只能分泌cyclo-（L-Pro-L-Leu）、cyclo-（L-Pro-L-Phe）2類信號分子DKPs，并且pH值對其分泌信號分子DKPs的相對含量有較大影響，3類信號分子在pH=7時的相對含量均最大，在酸性或堿性環境下，病原菌的3類信號分子的相對含量均有所降低，但在堿性環境下病原菌分泌信號分子DKPs能力較酸性條件下強。馬艷等[21]也證實菌株生長環境的pH值過低或過高均能夠抑制微生物生物被膜的形成，其發現當環境pH為7時，大腸桿菌分泌群體感應信號分子能力最強。孫秀嬌等[20]也研究發現，pH為7.0的中性條件下凡納濱對蝦源不動桿菌M1分泌AHLs信號分子能力最強。酸性或堿性條件都不利于生物被膜的形成[22-23]。

表3 pH值對病原菌產信號分子二酮哌嗪能力的影響Table 3 Effect of pH on the ability of 5 pathogenic bacteria producing signal molecule diketopiperazine

2.2.3 溫度對病原菌產信號分子DKPs能力的影響

溫度對病原菌產信號分子DKPs能力的影響見表4。由表4可知，5株病原菌產信號分子DKPs受溫度的影響，信號分子DKPs種類未受到影響，仍有3類信號分子DKPs，但是溫度對信號分子DKPs的相對含量有較小的影響。隨著溫度的升高，大腸桿菌分泌3類信號分子DKPs的相對含量呈上升趨勢，當溫度高于30 ℃之后，信號分子的相對含量開始降低；金黃色葡萄球菌分泌3類DKPs信號分子的相對含量在37 ℃時達到最大值，之后其相對含量也呈現出下降的趨勢。而志賀氏菌、沙門氏菌和單增李斯特菌分泌3類信號分子DKPs的相對含量則一直呈現上升趨勢。綜上所述，隨著溫度的升高，病原菌產3類信號分子相對含量均有所升高，達到一定溫度后，3類信號分子相對含量均有所下降。

表4 溫度對病原菌產信號分子二酮哌嗪能力的影響Table 4 Effect of temperature on the ability of 5 pathogenic bacteria producing signal molecule diketopiperazine

2.3 萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素對病原菌產信號分子DKPs能力的影響

萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素對病原菌產信號分子DKPs能力的影響見圖2。由圖2可知，5株病原菌產信號分子DKPs的能力均會受萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素的影響。通過萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素處理，志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌及單增李斯特菌產信號分子DKPs的種類受到了影響，只產生了cyclo-（L-Pro-LLeu）和cyclo-（L-Pro-L-Phe）2類信號分子DKPs，并且各信號分子的相對含量均有所下降；沙門氏菌產信號分子DKPs的種類未受到影響，但各信號分子的相對含量均有所降低。在這5種病原菌中，萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素處理對大腸桿菌產信號分子DKPs的含量影響最大，對金黃色葡萄球菌產信號分子DKPs的含量影響較小。芽孢菌及芽孢菌細菌素對腐敗病原菌產信號分子的降解及作用機制非常復雜，還需進一步進行研究。

圖2 萎縮芽孢桿菌無細胞提取液對病原菌產信號分子二酮哌嗪能力的影響Fig.2 Effect of Bacillus atrophaeus cell free extract on the ability of diketopiperazine produced by spoilage bacteria

2.4 萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素對病原菌群體感應抑制的應用研究

在水果的貯藏過程中，微生物的數量不僅決定著其貯藏時間，也關系著水果的品質，因此控制微生物的生長對水果產業的經濟效益有著重要的意義。萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素對草莓中菌落總數及5株病原菌菌落數的影響見圖3。由圖3可知，隨著儲藏時間的增加，各處理組中草莓的菌落總數與5株病原菌的對應菌落數均呈現上升的趨勢。隨著儲藏時間的增加，同時噴施信號分子DKPs和病原菌與只添加病原菌的草莓相比，菌落總數及5株病原菌的菌落數均明顯增加，噴施了病原菌及萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素的草莓的菌落總數及5株病原菌的菌落數最低，說明萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素的噴施對病原菌起到了抑制作用。噴施了病原菌、信號分子DKPs及萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素的草莓，其菌落總數及5株病原菌的菌落數均明顯低于只噴施了病原菌和信號分子DKPs的草莓。結果表明，外源信號分子對草莓腐敗病原微生物的生長均有促進作用，萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素的噴施抑制了信號分子DKPs對草莓病原微生物生長的促進作用。另外，噴施了病原菌、信號分子DKPs及萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素的草莓和噴施了病原菌及萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素的草莓的菌落總數低于只噴施無菌水的草莓，說明萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素在抑制噴施的病原菌的同時，也抑制了草莓在貯藏過程中其他自然生長微生物的生長，但是對比5種病原菌的生長情況，發現萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素對大腸桿菌的抑制作用更明顯，這與2.3中，萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素對5種腐敗病原菌產信號分子DKPs能力影響結果相呼應。

圖3 萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素對草莓貯藏期間微生物的影響Fig.3 Effect of Bacillus atrophaeus SAV-CP 297 bacteriocins on microorganisms of strawberry during storage

失重是指果蔬在存儲過程中的自然損耗，其代表了果蔬的水分和營養物質的損耗，因此控制失重率對果蔬的保鮮研究有著重要意義。MDA會造成膜的損傷[24]，在果蔬貯存實驗中，可以通過測定其含量來檢測果蔬膜系統的損傷程度。在果蔬的組織細胞中，細胞膜滲透性的改變會導致該膜內外電解質以及電導率改變，因此細胞膜的滲透率決定了果蔬的貯藏品質[25]。由圖4可知，噴灑病原菌混合液后，隨著貯藏時間增加，草莓的失重率和相對滲透率均呈現上升趨勢；可溶性固形物和MDA含量呈現波動變化；可滴定酸在儲藏時呈先上升后下降的變化趨勢；總糖含量則呈下降趨勢。

圖4 萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素對草莓貯藏期間理化指標的影響Fig.4 Effect of Bacillus atrophaeus SAV-CP 297 bacteriocins on physical and chemical indicators of strawberry during storage

隨著儲藏時間的增加，噴施了病原菌及信號分子DKPs的草莓與只噴施病原菌的草莓各物質含量的變化趨勢一致，但含量出現差異，噴施了病原菌及信號分子DKPs的草莓失重率明顯偏高，可溶性固形物、MDA、總糖、可滴定酸含量均降低，其中總糖和可滴定酸含量下降的變化趨勢更明顯，作為果實衰老重要指標的膜透性的上升趨勢最快。噴施了病原菌、信號分子DKPs及萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素的草莓與噴施了病原菌及信號分子DKPs草莓相比，失重率、可溶性固形物、MDA含量均降低，總糖、可滴定酸含量及膜透性偏高。結果可知，外源信號分子DKPs的噴施使草莓的總糖、總酸的含量下降趨勢和膜透性上升趨勢皆變快，提高了MDA的含量，萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素的噴施減緩了草莓的總糖、總酸含量的下降趨勢和膜透性上升趨勢，降低了MDA的含量。

過氧化物酶（POD）是植物體內活性很高的酶。在逆境條件下，POD與超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）協同作用，清除植物體內多余自由基，提高其抗逆性[26]。作為一種末端氧化酶，PPO將電子直接傳遞給分子氧。在植物體內，PPO催化酚類化合物，參與黑色素的生成，使得果蔬褐變[27]。由圖4亦可知，各處理組的POD活性、PPO酶活均呈現先上升后下降的趨勢，分析原因是在草莓的保鮮過程中，激發了草莓本身的防御反應，導致草莓POD、PPO活性的升高，使其提高對環境的抗逆行，延緩了草莓的酶促褐變及腐爛；而隨著儲藏時間的增加，草莓代謝減弱，酚類物質減少，以及PPO催化褐變產物的逐漸積累，在一定程度上抑制了PPO的活性，因此各處理組的草莓的PPO活性在貯藏后期逐漸下降[28]。草莓儲藏前4天，噴施了病原菌及信號分子DKPs的草莓與只噴施病原菌的草莓相比，POD、PPO活性明顯偏高，同時噴施了病原菌、信號分子DKPs及萎縮芽孢桿菌SAV-CP 297細菌素的草莓與噴施了病原菌及信號分子DKPs草莓相比，POD、PPO活性明顯偏低。結果可知，外源信號分子DKPs的噴施使得草莓在儲藏過程中POD酶活及PPO酶活降低。

3 結論

大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、志賀氏菌、單增李斯特菌均能產生cyclo-（L-Pro-L-Gly）、cyclo-（L-Pro-L-Leu）和cyclo-（L-Pro-L-Phe）3種類型的信號分子DKPs。隨著NaCl含量的增加，信號分子的種類和含量均減少；隨著pH、溫度的升高，信號分子的含量均呈先升高后下降的趨勢，其種類在pH升高時增加，在溫度升高時不變。B.atrophaeusSAV-CP 297細菌素可以明顯抑制病原菌產信號分子DKPs化合物的能力。與利用外源信號分子DKPs及病原菌混合液處理的草莓相比，將萎縮芽孢桿菌CP297細菌素應用到草莓貯藏保鮮中，降低了菌落總數和5株病原菌菌落數，減緩了草莓總糖、總酸含量的下降趨勢和膜透性上升趨勢，降低了MDA的含量，說明可通過抑制病原菌群體感應信號分子DKPs而延緩貯藏期間草莓的腐敗速度，達到良好的保鮮效果。