miR-205-5p在卵巢癌患者血清中的表達及其預后價值

張紅梅， 梁艷麗， 席 源， 魏 容， 周慧君

(遂寧市中心醫院檢驗科，四川省遂寧市629000)

卵巢癌是女性生殖器最常見的惡性腫瘤之一，疾病早期缺乏有效的診斷生物學標志物，約70%患者確診時已是晚期，5年生存率低于30%[1]。miRNA是一類具有調控基因表達功能的小分子RNA，血清miRNA表達水平與腫瘤發生及轉移相關[2]。血清中miRNA結構穩定，難降解，可在-80 ℃條件下長期保存，有成為疾病診斷生物學標志物的潛質[3]。卵巢癌患者的血清中存在著多種miRNA的異常表達，miRNA的異常表達可靶向調控其下游的靶基因，促進疾病的發展[4]。miR-205-5p是miRNA家族中的一種，其在多種腫瘤患者血清中均呈高表達，且與腫瘤惡性程度具有一定的相關性[5-6]。但是目前關于miR-205-5p在卵巢癌中研究的報道較為少見，因此本研究采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(real-time quantitative polymerase chain reaction，qRT-PCR)檢測卵巢癌患者血清中miR-205-5p表達水平，并分析其臨床預后意義，為卵巢癌的臨床診斷和治療提供參考。

1 資料和方法

1.1 研究對象

選擇本院婦產科2016年1月—2017年12月收治的卵巢癌患者98例為卵巢癌組，另選取同期健康體檢女性98例為健康組。兩組一般資料比較差異無顯著性(P>0.05；表1)。本研究經本院倫理委員會批準，患者和家屬均知情同意。納入標準：①組織活檢確診為卵巢癌；②臨床資料完整；③肝腎功能正常；④進行手術治療。排除標準：①妊娠或哺乳；②伴有嚴重心、腦、肺功能障礙；③合并其他或嚴重婦科疾病；④放療或化療史。

表1 兩組基本資料的比較(n=98)

1.2 主要試劑及儀器

RNA提取試劑盒(批號20132154)、RNA反轉錄試劑盒(批號2041245)、qRT-PCR試劑盒(批號2145874)均購自上海優寧維生物有限公司。伯樂Mini-PRO熒光定量PCR儀購自美國伯樂公司。

1.3 qRT-PCR

卵巢癌患者術前1天及術后7天各抽血1次，采集空腹靜脈血，健康組體檢當天抽血。3 000 r/min，離心15 min，取上清置于-80 ℃冰箱保存備用。根據RNA試劑盒提取血清總RNA，并利用反轉錄試劑盒得到cDNA保存至-80 ℃備用。qRT-PCR體系：SYBR Green qPCR SuperMix 16.25 μL，特異性引物2.0 μL，模板cDNA 3.25 μL，DEPC水補足至30 μL。反應條件為：95 ℃ 10 min；95 ℃ 10 s；60 ℃ 30 s；70 ℃ 30 s；共40個循環。設置3個復孔，根據公式(2-ΔΔCT法)計算mRNA表達情況。

1.4 隨訪

以門診或電話隨訪的方式進行3年隨訪，半年1次，隨訪終點為2020年12月止或患者死亡時間。

1.5 統計學分析

2 結 果

2.1 兩組血清miR-205-5p表達水平的比較

與健康組比較，卵巢癌組血清miR-205-5p表達水平更高(P<0.05)；與術前比較，卵巢癌組術后miR-205-5p表達水平顯著降低(P<0.05；表2)。

表2 兩組血清miR-205-5p表達水平的比較

2.2 血清miR-205-5p對卵巢癌的診斷價值

ROC曲線結果顯示，血清miR-205-5p診斷卵巢癌的曲線下面積為0.810，最佳截斷值為6.28，靈敏度為89.79%，特異度為86.73%(圖1)。

圖1 血清miR-205-5p對卵巢癌診斷價值的ROC曲線

2.3 miR-205-5p與卵巢癌患者臨床特征的關系

以術前血清miR-205-5p表達水平8.08為界值，將卵巢癌患者分為miR-205-5p低表達組(48例)和miR-205-5p高表達組(50例)，兩組患者腫瘤分化程度和有無淋巴結轉移情況比較，差異有顯著性(P<0.05；表3)。

表3 miR-205-5p與卵巢癌患者臨床病理特征的關系

2.4 miR-205-5p表達水平與卵巢癌患者預后的關系

miR-205-5p低表達卵巢癌患者生存期、1年生存率、3年生存率均高于高表達卵巢癌患者(P<0.05；表4)。

表4 miR-205-5p表達水平與卵巢癌患者預后的關系

2.5 影響卵巢癌患者預后的多因素Cox回歸分析

經多因素Cox分析得出，腫瘤分化程度低、有淋巴結轉移和miR-205-5p呈高表達均為影響卵巢癌患者預后的危險因素(P<0.05；表5)。

表5 影響卵巢癌患者預后的多因素Cox回歸分析

3 討 論

卵巢癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，其發病率在女性惡性腫瘤中僅次于宮頸癌和子宮體癌，卵巢上皮癌在各種類型卵巢癌中死亡率最高[7]。由于卵巢體積小且位于盆腔內，導致卵巢癌早期臨床癥狀不明顯，且難以發現，因此患者容易錯過早期的最佳治療時間。當腫瘤細胞發生迅速增殖和擴散，導致患者癌細胞擴散至盆腔內臟器時，往往已經到了疾病的晚期，患者病情加重，臨床治療困難。據統計，2018年全球預計卵巢癌確診病例為29.5萬，中國卵巢癌發病率為5.37例/10萬，死亡率為2.22例/10萬[8]。因此尋找有效的、新穎的檢測方法和治療靶點，以提高卵巢癌早期發現率、個性化治療及預后是一個迫切的問題。

miR-205-5p是miR-205-5家族中的一種，已被證實在多種腫瘤中發揮重要作用。有研究發現，肺癌、肝癌、子宮內膜癌和胃癌患者血清miR-205-5p異常高表達，表明在多種腫瘤中miR-205-5p均可作為一項有價值的檢測指標，有成為潛在生物學標志物的可能性[9-10]。本研究結果發現，卵巢癌組血清miR-205-5p表達水平顯著高于健康組，表明卵巢癌的發生會引起機體血清miR-205-5p的異常高表達，因此miR-205-5p異常升高可能與卵巢癌發生具有一定的相關性。同時本研究還檢測了卵巢癌患者術前、術后血清miR-205-5p表達水平，發現手術后患者miR-205-5p表達水平較術前顯著降低，表明當疾病終止時，患者血清miR-205-5p有趨向正常水平的趨勢，進一步說明了miR-205-5p與卵巢癌發展密切相關，也提示miR-205-5p有成為卵巢癌治療靶點的可能性。

已有研究發現，miR-205-5p對腫瘤細胞分化、增殖及轉移均具有調控作用[11]。目前認為其作用機制為miR-205-5p高表達可作用于抑癌基因的上游靶位點，從而抑制抑癌基因表達，為腫瘤細胞增殖和分化提供了良好的體內環境基礎[12]。研究發現，在卵巢癌患者血清中存在著多種miRNA的異常表達，miR-199a、miR-9、miR-223等在卵巢癌患者中均表達異常[13-15]。而本研究分析miR-205-5p在卵巢癌患者血清的表達水平與臨床病理特征的關系，發現卵巢癌患者血清miR-205-5p的表達水平與腫瘤的分化程度和淋巴結轉移與否密切相關，患者腫瘤分化程度越低，血清miR-205-5p表達水平越高，淋巴結轉移增加，這表明miR-205-5p表達水平與患者的疾病進程具有密切的相關性，患者腫瘤惡性程度高，同時癌細胞發生擴散均可導致miR-205-5p表達水平升高，進一步說明miR-205-5p可作為卵巢癌患者診斷的生物學標志物。本研究還對卵巢癌患者的生存時間進行了分析發現，卵巢癌患者miR-205-5p高表達組1年和3年生存率均顯著低于miR-205-5p低表達組，提示miR-205-5p的表達水平對卵巢癌術后患者的康復情況有一定的影響，miR-205-5p高表達可能不利于卵巢癌患者的預后。多因素Cox分析發現，腫瘤分化程度低、腫瘤細胞有淋巴結轉移和miR-205-5p呈高表達水平均是影響卵巢癌患者預后的危險因素，因此對以上患者治療后應密切關注其康復情況。同時本研究也存在一定的局限性，后期應加大樣本量的收集，同時對多個miRNA進行聯合檢測，以找到最有效的靶點。

綜上所述，卵巢癌患者血清miR-205-5p表達水平異常升高，同時miR-205-5p異常高表達可能會引起患者腫瘤細胞擴散風險增加，術后生存率可能降低，因此miR-205-5p有成為臨床卵巢癌治療靶點的可能。